【摘要】：目的:急性心肌梗死是急危重癥,近年來在我國發(fā)病率和病死率逐漸上升�，F(xiàn)代醫(yī)學對急性心肌梗死院前急救多采取溶栓療法為院內(nèi)急救爭取時間,然而存在醫(yī)護人員趕到之前患者未能及時服用特效藥進行自救而死亡的情況,無法為院前急救和院內(nèi)治療爭取有效時間,因而開發(fā)急性心肌梗死早期患者自行急救的特效藥物迫在眉睫。本實驗通過H_2O_2誘導心肌細胞凋亡,主要應用烏頭赤石脂丸組含藥血清予以干預,探討烏頭赤石脂丸方抑制心肌細胞凋亡的機制。方法:選用20只大鼠分為正常組、烏頭赤石脂丸組、陽性對照組(參附湯)進行常規(guī)飼養(yǎng)和給藥,觀察大鼠狀態(tài),5天后提取含藥血清。選用H9C2心肌細胞株進行分組培養(yǎng)和傳代。應用細胞計數(shù)器將H9C2心肌細胞按5000~10000個/孔種入96孔板,24h后準備細胞活力檢測。設(shè)置4組時間(1,2,4,8h)與4個H_2O_2濃度(分別為600,900,1200,1500μmol/L),通過酶標儀檢測各組的光密度,并計算細胞活力,得出最佳造模時間(4h)與H_2O_2造模濃度(900μmol/L)。依照此濃度與時間,制備正常組、H_2O_2模型組、陽性對照組和烏頭赤石脂丸組(造模同時給予含藥血清),進行組細胞活力檢測。免疫熒光技術(shù)檢測H9C2心肌細胞中Bcl-2、BAX的表達情況。通過蛋白印跡法(Western Blot,WB)檢測B淋巴細胞瘤-2蛋白(B-cell cymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2-Assaciated X蛋白(Bcl-2-Assaciated X protein,BAX)的表達水平,并進行分析。結(jié)果:1.CCK-8法測定不同濃度H_2O_2誘導損傷的H9C2心肌細胞活力,結(jié)果顯示900μmol/L濃度、時間為4h時最為接近半數(shù)致死率,有統(tǒng)計學意義(p0.01)。與模型組相比,烏頭赤石脂丸組H9C2心肌細胞活力顯著升高,接近正常組,有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2.免疫熒光技術(shù)檢測顯示,正常組Bcl-2在心肌細胞核周圍胞質(zhì)中呈強陽性表達,模型組僅少量陽性表達。陽性對照組有相對較高的陽性表達,而烏頭赤石脂丸組可見大量的陽性表達,熒光強度高于模型組,提示烏頭赤石脂丸方可以上調(diào)心肌細胞中Bcl-2的表達。正常組中BAX的表達不明顯,在模型組中呈高表達,陽性對照組熒光表達相對較低,而烏頭赤石脂丸組僅見少量熒光表達,熒光強度低于模型組,提示烏頭赤石脂丸方可以下調(diào)心肌細胞中BAX的表達。3.Western Blot技術(shù)檢測顯示,與正常組、模型組、陽性對照組比較,烏頭赤石脂丸組心肌細胞中Bcl-2蛋白表達顯著高于模型組(p0.01),有統(tǒng)計學意義;顯著高于陽性對照組(p0.01),有統(tǒng)計學意義;接近正常組(p0.01),有統(tǒng)計學意義。烏頭赤石脂丸組心肌細胞中BAX蛋白表達低于模型組(p0.05),有統(tǒng)計學意義;高于正常組(p0.01),有統(tǒng)計學意義;與陽性對照組比,略低于陽性對照組,烏頭赤石脂丸組無統(tǒng)計學意義。結(jié)論:烏頭赤石脂丸方能夠抗H_2O_2對H9C2心肌細胞的損傷,可以通過上調(diào)線粒體通路抗凋亡蛋白Bcl-2表達、下調(diào)促凋亡蛋白BAX的表達,抑制心肌細胞凋亡。
【學位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

20丸組圖 4 烏頭赤石脂丸方對心肌細胞 Bax 表達的影響結(jié)急性心肌梗死早期，心肌細胞凋亡是重要標志，本實驗選擇線粒體相關(guān)蛋白 BAX 蛋白進行一抗孵育，以相應的山羊抗兔作為二抗，通過觀察蛋白的表達情況烏頭赤石脂丸方抗 H2O2對心肌細胞的損傷情況。結(jié)果證明，烏頭赤石脂丸組 B高于模型組，BAX 表達低于模型組。接下來需要進一步探究 Bcl-2 與 BAX 蛋白，以及烏頭赤石脂丸方對 Bcl-2/BAX 的影響。

.0 軟件分析和比較各組間數(shù)據(jù)，全部數(shù)值目標蛋白條帶灰度值/內(nèi)參蛋白條帶灰度.01 視作差異顯著。與分析ern Blot 檢測顯示，與正常組、模型組、cl-2 蛋白表達顯著高于模型組（p<0.01）），有統(tǒng)計學意義；接近正常組（p<0.01 BAX 蛋白表達低于模型組（p<0.05），義；高于正常組（p<0.01），有統(tǒng)計學意學意義。表明烏頭赤石脂丸方可以上調(diào)護作用。結(jié)果見圖 5、圖 6、圖 7。A B C D

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 曲瑰琦;烏頭赤石脂丸方的臨床應用[J];中國醫(yī)藥學報;1998年02期

2 劉熹;烏頭赤石脂丸治愈潰瘍病出血[J];四川中醫(yī);1985年04期

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 張一偉;烏頭赤石脂丸方抗心肌細胞凋亡的機制研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2019年

本文編號：2731146