【摘要】：目的:探討淫羊藿苷(Icariin,ICA)對脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞損傷的保護作用并明確核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor erythroid-2related factor 2,Nrf2)信號通路在其中所發(fā)揮的作用。方法:(1)將BV2細胞(小膠質(zhì)細胞的細胞株)隨機分為空白組、ICA(0.1μM)單獨給藥組、LPS(1μg/ml)組、LPS+ICA(0.01μM)低劑量組、LPS+ICA(0.1μM)高劑量組。細胞給予ICA作用30 min后再給予LPS處理24 h。通過MTT法檢測小膠質(zhì)細胞的損傷情況;免疫熒光觀察小膠質(zhì)細胞的激活情況和Nrf2的激活情況;通過Real-time PCR檢測2 h、6 h、24 h時Nrf2、HO-1和NQO1的m RNA水平;通過Western Blot檢測細胞中Iba-1、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表達;通過Griess法和ELISA法分別檢測細胞上清液中NO、白細胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18的含量。(2)為了確定Nrf2信號通路在ICA抗神經(jīng)炎癥中發(fā)揮的作用,分別通過Nrf2-siRNA(50 n M)沉默Nrf2表達和HO-1特異性抑制劑Zn PP(20μM)抑制HO-1表達,用Western Blot分別檢測Nrf2的沉默效率和HO-1的抑制效率;通過免疫熒光觀察小膠質(zhì)細胞的激活情況;通過Real-time PCR分別檢測2 h、6 h、24 h時Nrf2、HO-1和NQO1的m RNA水平,Western Blot檢測Iba-1、Nrf2、HO-1和NQO1表達;通過Griess試劑盒和ELISA法分別檢測上清液中NO、IL-1β和IL-18的含量。結(jié)果:(1)MTT結(jié)果顯示,空白組、ICA(0.1μM)單獨給藥組、LPS(1μg/ml)組、LPS+ICA(0.01μM)低劑量組和LPS+ICA(0.1μM)高劑量組之間細胞活力無明顯變化;Western Blot和免疫熒光結(jié)果顯示,ICA可以抑制小膠質(zhì)細胞的激活;Griess試劑盒和ELISA法測得的結(jié)果顯示與空白組相比,LPS組NO,IL-1β和IL-18的釋放量增加,而在給予ICA后明顯降低;PCR結(jié)果顯示LPS可以增加2 h時Nrf2的m RNA水平和6 h時HO-1、NQO1的m RNA水平,給予ICA后,相應(yīng)時間點的Nrf2、HO-1、NQO1的m RNA水平進一步增加;免疫熒光結(jié)果顯示與LPS組相比,給予ICA能增加Nrf2的入核;Western Blot結(jié)果顯示LPS組BV2細胞的細胞核中Nrf2以及HO-1、NQO1的蛋白表達與空白組相比明顯升高,在給予ICA后,細胞核中Nrf2和細胞中HO-1、NQO1的蛋白表達進一步升高。(2)Western Blot結(jié)果顯示用Nrf2-si RNA轉(zhuǎn)染后小膠質(zhì)細胞中的Nrf2蛋白表達明顯下降;MTT結(jié)果顯示Nrf2-si RNA(50 n M)對小膠質(zhì)細胞沒有細胞毒性;PCR結(jié)果顯示給予Nrf2-si RNA 6 h后HO-1和NQO1的m RNA水平相對于LPS+ICA(0.1μM)明顯降低;Western Blot結(jié)果顯示Nrf2-si RNA處理后HO-1和NQO1的蛋白表達相對于LPS+ICA(0.1μM)明顯降低;免疫熒光結(jié)果顯示在給予Nrf2-si RNA后,小膠質(zhì)細胞的激活量相對于LPS+ICA(0.1μM)組明顯升高。用Griess法和ELISA測得的結(jié)果顯示用Nrf2-si RNA處理后,培養(yǎng)基中NO、IL-1β和IL-18的釋放量相對于LPS+ICA(0.1μM)組明顯升高。(3)Western Blot結(jié)果顯示HO-1抑制劑Zn PP(20μM)可降低HO-1蛋白表達;MTT結(jié)果顯示20μM的Zn PP對小膠質(zhì)細胞沒有明顯的毒性作用;PCR結(jié)果和Western Blot結(jié)果顯示Zn PP對ICA誘導(dǎo)的Nrf2激活沒有顯著影響;Western Blot結(jié)果和免疫熒光結(jié)果提示Zn PP處理后小膠質(zhì)細胞的激活量相對于LPS+ICA(0.1μM)明顯升高;Griess試劑盒和ELISA測得的結(jié)果顯示在給予Zn PP后,炎癥因子的釋放量相對于LPS+ICA(0.1μM)組明顯升高。結(jié)論:ICA可能通過調(diào)控Nrf2信號通路抑制小膠質(zhì)細胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285
【圖文】：

S 介導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞神經(jīng)炎癥反應(yīng)0.01μM）和 ICA（0.1μM）預(yù)處理小膠質(zhì)細胞 理 24h。通過 MTT 測定細胞活力。如圖 1 所示LPS（1μg/ml）組、LPS+ICA（0.01μM）低劑量細胞活力無明顯變化。收集細胞總蛋白，通過達。如圖 2A 和 2B 所示，與 LPS 組相比，給顯降低，說明 ICA 可抑制小膠質(zhì)細胞激活。隨培養(yǎng)基中 NO，IL-1β 和 IL-18 的釋放量。如圖 3給予 LPS 后，培養(yǎng)基中 NO，IL-1β 和 IL-18 的明顯下降。

圖 2 ICA 抑制 LPS 介導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞激活注：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準誤( ± SEM，n=3)表示，*P<0.05 vs 空白組,#P<0.05 vs LPS 組。（A）各組細胞Iba-1 免疫熒光代表圖片（標尺=100 μm）；（B）各組細胞 Iba-1 代表性條帶和含量統(tǒng)計圖；Fig. 2 ICAattenuated LPS-induced microglia activation. Results were the mean ± SEM from three independentexperiments performed in triplicate. *P<0.05 compared with the control cultures;#P<0.05 compared with LPS-treatedcultures. (A) Representative photomicrographs of Iba-1 of each group (scale bar = 100 μm); (B) Representative bandsand quantitative analysis of Iba-1 of different groups.圖 3 ICA 抑制小膠質(zhì)細胞炎癥因子釋放注：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準誤( ± SEM，n=3)表示，*P<0.05 vs 空白組,#P<0.05 vs LPS 組。（A）各組細胞上清中 NO 的釋放量;（B）各組細胞上清中 NO、IL-1β、IL-18 的釋放量；（C）各組細胞上清中 IL-18 的釋放x

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 毛景洋;;深圳先進院首破腦內(nèi)再殖小膠質(zhì)細胞起源之謎[J];高科技與產(chǎn)業(yè)化;2018年09期

2 范沖竹;;暗小膠質(zhì)細胞:一種主要與病理狀態(tài)相關(guān)的新表型[J];中國病理生理雜志;2016年07期

3 梁菲;;運動介導(dǎo)小膠質(zhì)細胞調(diào)控阿爾茨海默病的分子機制[J];當(dāng)代體育科技;2014年29期

4 張思磊;王雄偉;;小膠質(zhì)細胞/腦巨噬細胞與膠質(zhì)瘤研究進展[J];海南醫(yī)學(xué);2015年20期

5 姜文敏;唐羅生;賀達仁;;小膠質(zhì)細胞在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病機制中的作用[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版);2011年10期

6 馬怡然;郭大文;孫偉;方文剛;;小膠質(zhì)細胞的活化對其Aβ吞噬能力的影響[J];解剖科學(xué)進展;2010年01期

7 黃秀艷;曾耀英;張彩;朱斌;;人小膠質(zhì)細胞的分離、純化、特異分子表達與吞噬功能研究[J];中國病理生理雜志;2008年05期

8 熊懷林,范光碧,胡興宇;小膠質(zhì)細胞在腦缺血中的作用[J];四川解剖學(xué)雜志;2005年02期

9 劉鋒,朱長庚;小膠質(zhì)細胞激活的分子機制[J];解剖科學(xué)進展;2003年02期

10 楊逢春;顯示小膠質(zhì)細胞方法的改進[J];解剖學(xué)研究;2002年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 唐亞梅;李子晨;許鵬飛;徐永騰;彭英;;放射后小膠質(zhì)細胞吞噬功能及相關(guān)信號機制研究[A];7th中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會全國中青年神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會暨第十屆全國神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病與腦脊液細胞學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2014年

2 韓書珍;李雪梅;牛文澤;陳翔;王果;李澤宜;;激光掃描共聚焦顯微鏡觀察大鼠局灶性腦缺血半暗區(qū)內(nèi)小膠質(zhì)細胞的變化及意義[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

3 陸浩慧;羅婷婷;武勝昔;鄺芳;;1型小膠質(zhì)細胞對小鼠焦慮樣行為、學(xué)習(xí)、記憶的影響[A];第十九屆全國心理學(xué)學(xué)術(shù)會議摘要集[C];2016年

4 巨富榮;張勝祥;;小膠質(zhì)細胞在小鼠全腦缺血模型中的形態(tài)變化[A];第三屆中國西部動物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2014年

5 李捷;劉勇;張蓬勃;肖新莉;呂海俠;李敏杰;康前雁;鄧美英;;大鼠局灶性腦缺血后小膠質(zhì)細胞的來源[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

6 楊陽;廖萬清;郭秀軍;林敏;王志東;徐紅;陳孫孝;溫海;;新生隱球菌對鼠小膠質(zhì)細胞細胞骨架蛋白質(zhì)組的影響[A];第二屆全國深部真菌感染學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

7 姚瑤;Stefania Echeverry;Xiang Qun Shi;Qiu Zi Yang;傅開元;Yves De Koninck;Ji Zhang;;脊髓小膠質(zhì)細胞去除后的動態(tài)變化[A];中華醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會第十二屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2016年

8 趙銘;李冬;朱迅;閆東梅;;小膠質(zhì)細胞的激活在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中作用的研究進展[A];第十二屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2017年

9 趙敏;袁云;趙培園;李t

本文編號：2728431