【摘要】：非酒精性脂肪肝病是一種全球最常見的慢性肝病,常與肥胖、非酒精性脂肪肝炎、肝硬化、Ⅱ型糖尿病以及肝癌癥等代謝性疾病相聯(lián)系,嚴(yán)重至肝硬化和肝癌可導(dǎo)致死亡。厚樸酚(MG)是中藥厚樸中提取的一種木酚素,其具有多種生物學(xué)功能,包括抗真菌、抗氧化、抗癌和肝保護(hù)的功能。油酸(OA)是游離脂肪酸的一種,是造成非酒精性脂肪肝病的主要物質(zhì),它可以誘導(dǎo)人肝癌(HepG2)細(xì)胞的脂質(zhì)積聚。泰洛沙泊(Tyloxapol)是一種表面活性劑,它可以抑制脂肪酶的活性,引起小鼠高脂血癥。在本實驗中,我們采用OA誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞作為非酒精性脂肪肝病的體外模型,通過MTT實驗篩選無毒濃度,油紅O染色觀察HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的含量,并檢測甘油三酯(TG)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、活性氧簇(ROS)的含量,應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western Blot)和免疫熒光(Immunofluorescence)檢測代謝相關(guān)信號通路的活性,確定MG對該模型的影響和分子機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),OA誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞有明顯的脂質(zhì)積聚和TG的明顯升高,并促進(jìn)TNF-α和ROS的釋放,而MG顯著的改善了HepG2細(xì)胞的脂質(zhì)積聚,抑制了TG、TNF-α、ROS的活性;Western Blot實驗結(jié)果顯示MG激活了AKT/AMPK/PPARα信號通路,抑制了SREBP-1c的蛋白表達(dá)和MAPKs/NF-κB炎癥信號通路;Immunofluorescence實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),MG激動了P-AMPKα、P-AKT、PPARα的表達(dá),抑制了SREBP-1c的蛋白表達(dá);此外,在Tyloxapol刺激的小鼠體內(nèi)模型中,Tyloxapol明顯的引起的小鼠血液中TG和含量的升高,并造成小鼠肝臟大量的脂滴存在和脂質(zhì)積聚;MG顯著抑制了血液中由Tyloxapol引起的總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量的升高,減輕了肝臟的空泡數(shù)量和脂質(zhì)積聚;Western Blot實驗發(fā)現(xiàn),MG激活了AKT和AMPK的磷酸化表達(dá),上調(diào)了PPARα的蛋白表達(dá),進(jìn)而抑制了SREBP-1c的蛋白表達(dá)。綜上所述,MG擁有明顯的抗脂質(zhì)積聚的作用和抗炎作用作用,并可能為NAFLD及其相關(guān)疾病的機制研究和新的藥物研發(fā)作出一定的借鑒價值。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285
【圖文】：

說明這三個濃度對于 HepG2 細(xì)胞是無毒的，見圖1.3.1A。由細(xì)胞油紅 O 染色可知，OA（60、120、240、480 μM）明顯引起了 HepG2細(xì)胞脂質(zhì)積聚，并根據(jù)對應(yīng) MOD 指數(shù)顯示，隨著濃度的不斷升高，脂質(zhì)含量越高，（P<0.01），此外，檢測細(xì)胞內(nèi)的 TG 的含量也發(fā)現(xiàn)，OA（120、240、480μM）與空白組之間有極顯著差異（P<0.01），見圖 1.3.1B。由實驗結(jié)果可知，OA 可以引起 HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)積聚

1.3.1B OA 對 HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)積聚的影響。油紅 O 染色、細(xì)胞內(nèi) TG、M的檢測，平均光密度（MOD）＝積分光密度（IOD SUM）/陽性區(qū)域總（AREASUM）。注：對比空白組，##p<0.01。2 MG 對 HepG2 細(xì)胞的 AMPK 信號通路的影響由 MTT 細(xì)胞毒性實驗結(jié)果可知，MG（2、4、8、16 μg/mL）對 HepG2毒的，與空白組之間無顯著性差異（P>0.05）；MG（32 μg/mL）與空存在顯著性差異（P<0.05）；MG（64、100 μg/mL）與空白組之間存在異（P<0.01）；這說明 MG（32、64、100 μg/mL）對 HepG2 細(xì)胞有毒 1.3.2A。MG（1、2、4、8 μg/mL）處理 HepG2 細(xì)胞 24 h 后，Western結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MG（4、8 μg/mL）可以明顯的激動 P-AMPK 、P-AMPKβ、P-AKT 的蛋白表達(dá)，其與空白組之間有極顯著差異（P<0.01）；為了詮釋

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Giuseppe Paradies;Valeria Paradies;Francesca M Ruggiero;Giuseppe Petrosillo;;Oxidative stress, cardiolipin and mitochondrial dysfunction in nonalcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2014年39期

本文編號：2728015