【摘要】：目的:通過(guò)觀察葛根素對(duì)缺氧型肺動(dòng)脈高壓大鼠在體模型中缺氧指標(biāo)和細(xì)胞模型中細(xì)胞增殖的影響,探討其可能的作用機(jī)制,為臨床的應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:采用實(shí)驗(yàn)室自行組裝的常壓低氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)大鼠建立大鼠的缺氧模型:選取清潔級(jí)大鼠60只,隨機(jī)分成三組,即正常對(duì)照組、缺氧模型組、葛根素治療組,在實(shí)驗(yàn)室正常環(huán)境下進(jìn)行正常組培養(yǎng),于缺氧環(huán)境下進(jìn)行缺氧組培養(yǎng),按計(jì)劃培養(yǎng)3 d、7 d、14 d、21 d后進(jìn)行相關(guān)的檢測(cè)。測(cè)定的項(xiàng)目包括:肺動(dòng)脈平均壓力(mPAP)、右心室肥厚指數(shù)(RVHI)、肺組織中超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛(MDA)含量等。采用膠原酶消化法培養(yǎng)大鼠原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMC),培養(yǎng)成功后建立大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的高C02低02缺氧模型。實(shí)驗(yàn)分組為模型組和葛根素不同濃度(50μ mol/L、100 μ mol/L、200 μ mol/L)干預(yù)組,分別放置于缺氧環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)24h后進(jìn)行數(shù)據(jù)檢測(cè)。數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),MTT法檢測(cè)PASMC活性,觀察對(duì)缺氧導(dǎo)致的細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果:1.肺動(dòng)脈平均壓力結(jié)果比較:缺氧模型組大鼠隨著缺氧時(shí)間的增加mPAP明顯升高,14 d、21 d時(shí)mPAP高于正常對(duì)照組明顯,差異具有顯著性(P0.05);與缺氧模型組比較,14d、21d時(shí)葛根素組的mPAP明顯升高(P0.05)。2.右心室肥厚指數(shù)結(jié)果比較:缺氧模型組大鼠的右心肥厚指數(shù)隨著缺氧時(shí)間的增加明顯增高,差異具有顯著性(P0.05);葛根素組大鼠的右心肥厚指數(shù)也有一定的升高,14 d時(shí)與缺氧組比較,差異具有顯著性(P0.05);葛根素組21 d數(shù)值的升高開(kāi)始均勻的減緩,與缺氧組比較具有顯著性差異(P0.01)。3.超氧化物歧化酶活性數(shù)值比較:缺氧模型組大鼠中SOD活性會(huì)隨著缺氧時(shí)間的增加而明顯降低,從14 d開(kāi)始分析發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)差異具有顯著性(P0.05);葛根素治療組大鼠的超氧化物歧化酶活性也有一定程度上的降低,14d時(shí)的數(shù)值與缺氧組比較,差異具有顯著性(P0.05);葛根素組21 d的數(shù)值的降低開(kāi)始均勻減緩,與缺氧模型組比較具有顯著性差異(P0.01)。4.丙二醛含量的結(jié)果比較:缺氧模型組大鼠中丙二醛含量會(huì)隨著缺氧時(shí)間的增加而明顯升高,14d開(kāi)始測(cè)定數(shù)值與正常對(duì)照組相比,差異具有顯著性(P0.05);葛根素治療組大鼠的丙二醛含量也有一定程度的升高,14d的數(shù)值與缺氧組分析比較,差異具有顯著性(P0.05);葛根素治療組21 d的數(shù)值升高開(kāi)始均勻減慢,與缺氧模型組數(shù)值統(tǒng)計(jì)比較,具有顯著性差異(P0.01)。5.PASMCs的培養(yǎng)和形態(tài)觀察:采用膠原酶消化法培養(yǎng)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞成功率,可行性很強(qiáng)。采用倒置顯微鏡進(jìn)行顯微觀察:細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好,細(xì)胞呈不規(guī)則的三角形或長(zhǎng)梭形,符合肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的生理特點(diǎn),呈并行排列或簇狀生長(zhǎng)(表1A),生長(zhǎng)繁殖達(dá)到90%融合時(shí),表現(xiàn)出典型血管平滑肌細(xì)胞"峰、谷"狀生長(zhǎng)的特點(diǎn)(表1B)。6.葛根素對(duì)缺氧誘導(dǎo)的PASMC增殖的作用比較:葛根素干預(yù)的最佳濃度為100μg/mL。葛根素可以顯著的抑制缺氧導(dǎo)致的PASMC的增殖,從而減輕缺氧導(dǎo)致的肺血管重構(gòu),對(duì)缺氧性肺動(dòng)脈高壓的治療有指導(dǎo)作用。結(jié)論:葛根素能有效抑制缺氧導(dǎo)致的肺動(dòng)脈平均壓力增加及氧自由基增加,減輕其肺血管重構(gòu)的程度,對(duì)缺氧性肺動(dòng)脈高壓有良好的治療作用和預(yù)防保護(hù)作用。葛根素對(duì)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞有保護(hù)作用,對(duì)于缺氧導(dǎo)致的PASMC增殖和肺血管的重構(gòu),葛根素有明顯的抑制和減輕效果,證明其對(duì)缺氧性肺動(dòng)脈高壓有良好的保護(hù)和治療效果。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2728049