【摘要】：目的基于前期臨床研究證素辨證成果,PMOP的主要病位在腎,主要病性為陰虛,本課題以二至丸為探針,以骨代謝紊亂及Sirt1/Runx2信號(hào)通路為切入點(diǎn),從分子機(jī)制出發(fā)探討補(bǔ)腎滋陰法治療PMOP的作用機(jī)理,以期為補(bǔ)腎滋陰法防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的基礎(chǔ)研究提供新的思路。方法3月齡雌性SD大鼠60只,隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組20只與手術(shù)組40只。假手術(shù)組,在雙側(cè)卵巢周圍切除少許脂肪組織;手術(shù)組摘除雙側(cè)卵巢建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥大鼠模型,術(shù)后2周,隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組和二至丸組,每組20只。假手術(shù)組,以等量生理鹽水灌胃;模型組,以等量生理鹽水灌胃;二至丸組,以0.3g/ml二至丸(3ml/kg)灌胃,連續(xù)灌胃12周,每日1次。每?jī)芍苡涗涹w重變化,Micro-CT檢測(cè)第五腰椎骨密度(Bone Mineral Density,BMD),HE染色觀察第五腰椎骨小梁形態(tài)學(xué)變化,三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)檢測(cè)股骨脛骨的生物力學(xué)特性,ELISA檢測(cè)大鼠血清中骨代謝標(biāo)記物骨堿性磷酸酶(Bone Alkaline Phosphatase,BALP)、骨保護(hù)素(Osteoprotegerin,OPG)、雌二醇(Estradiol,E2)、性激素結(jié)合球蛋白(Sex Hormone Binding Globulin,SHBG)和核因子-κB受體活化因子配體(Receptor Activator ofNF-κB Ligand,RANKL)表達(dá)變化,qPCR 及 Western-blot 檢測(cè)骨組織 Sirt1、Foxo1、Foxo3a、PPAR-γ和 Runx2 基因及蛋白表達(dá)變化,探針試劑盒檢測(cè)骨組織miR-132基因表達(dá)變化。結(jié)果1.影像學(xué)檢測(cè):L5腰椎骨密度(BMD)、松質(zhì)骨與皮質(zhì)骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨小梁寬度(Tb.Th)、骨小梁分離度(Tb.Sp)檢測(cè)結(jié)果顯示,假手術(shù)組、二至丸組BMD、BV/TV、Tb.Th明顯下降,Tb.Sp明顯升高,與模型組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01,P0.05)。2.組織學(xué)檢測(cè):假手術(shù)組L5腰椎骨小梁致密,分布均勻,排列規(guī)則,表面光滑,交織成網(wǎng)狀,骨小梁間隙均勻。模型組腰椎骨小梁變細(xì)、分布稀疏、散亂、不連續(xù),表面粗糙,完整性差,出現(xiàn)碎片、斷裂等。二至丸組腰椎骨小梁變細(xì),數(shù)量減少,分布稀疏,排列較規(guī)則。3.生物力學(xué)檢測(cè):股骨干及脛骨干生物力學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,模型組的股骨斷裂點(diǎn)和脛骨斷裂點(diǎn)均低于假手術(shù)組(P0.01)。二至丸組股骨斷裂點(diǎn)和脛骨斷裂點(diǎn)都高于模型組(P0.05)。4.骨代謝標(biāo)記物血清含量檢測(cè):模型組血清E2水平低于假手術(shù)組,而血清SHBG水平高于假手術(shù)組(P0.01,P0.01)。模型組血清BALP、OPG、OPG/RANKL水平均低于假手術(shù)組(P0.01),而血清RANKL水平高于假手術(shù)組(P0.01)。二至丸組血清E氐和SHBG水平與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。然而,二至丸組BALP、OPG、OPG/RANKL的表達(dá)均高于模型組(P0.05),同時(shí)二至丸組血清RANKL的表達(dá)低于模型組(P0.01)。5.Sirt1/Runx2信號(hào)通路相關(guān)生物標(biāo)志物mRNA和蛋白表達(dá)檢測(cè):Sirt1、Runx2、Foxo1、Foxo3a的表達(dá)mRNA和蛋白的結(jié)果都顯示出相同的趨勢(shì),模型組低于假手術(shù)組(P0.01,P0.05),PPAR-γ的mRNA和蛋白的表達(dá)結(jié)果模型組均高于假手術(shù)組(P0.01,P0.05)。二至丸組 Sirt1、Runx2、Foxo1、Foxo3a 的表達(dá) mRNA 和蛋白的結(jié)果均高于模型組(P0.01,P0.05),PPAR-γ的mRNA和蛋白的表達(dá)結(jié)果均低于模型組(P0.01,P0.05)。6.骨組織miR-132基因表達(dá)的變化:模型組miR-132的表達(dá)顯著高于假手術(shù)組(P0.01),二至丸組miR-132的表達(dá)低于模型組(P0.05)。結(jié)論1.二至丸改善絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型大鼠的骨密度和骨小梁數(shù)量,增強(qiáng)生物力學(xué)特性。2.二至丸通過激活Sirt1/Runx2信號(hào)通路,抑制破骨細(xì)胞的分化,降低骨吸收水平,減少骨量丟失,從而抑制PMOP大鼠骨質(zhì)疏松的病理進(jìn)程。
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2723891