【摘要】：目的:利用GC-MS法分析比較四種炮制品的黔產(chǎn)莪術(shù)中揮發(fā)油含量及其化學(xué)成分的差別,確定黔產(chǎn)莪術(shù)油中所含的主要成分,并比較四者所含化學(xué)成分的異同;研究莪術(shù)油對直腸癌SW1463細(xì)胞株的增殖抑制作用,并探討其對直腸癌SW1463細(xì)胞株抑制作用的可能機(jī)制。方法:通過水蒸氣蒸餾法提取不同炮制類型的黔產(chǎn)莪術(shù)飲片中揮發(fā)油類成分,采用GC-MS法對黔產(chǎn)莪術(shù)油的化學(xué)成分進(jìn)行分析,通過標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索分析計(jì)算,確定黔產(chǎn)莪術(shù)揮發(fā)油中所含的主要成分。將經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的莪術(shù)揮發(fā)油,配制成40、80、120、160、200、240、280 mg·L-1等梯度濃度,采用四氮唑鹽(MTT)比色法檢測不同濃度莪術(shù)油干預(yù)直腸癌SW1463細(xì)胞24、48、72h后對細(xì)胞增殖抑制的影響,計(jì)算莪術(shù)油對細(xì)胞的抑制率及IC50;根據(jù)藥物的IC50設(shè)定濃度為80,120,160,200 mg·L-1的梯度劑量組干預(yù)細(xì)胞24h,采用倒置顯微鏡觀察不同濃度莪術(shù)油對直腸癌SW1463細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響,Giemsa染色法觀察莪術(shù)油對SW1463細(xì)胞增殖凋亡形態(tài)學(xué)的影響;采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測莪術(shù)油對直腸癌細(xì)胞內(nèi)Capase-3,Bax與Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:從4種莪術(shù)飲片中共檢測出78種化學(xué)成分,其中鮮品莪術(shù)揮發(fā)油中有58個(gè)化學(xué)成分,生切飲片揮發(fā)油中有53個(gè)化學(xué)成分,蒸制飲片揮發(fā)油中有52個(gè)化學(xué)成分,醋炙莪術(shù)揮發(fā)油中有51個(gè)化學(xué)成分。揮發(fā)油中的主要成分為單萜和倍半萜類,但是不同炮制法制備的黔產(chǎn)莪術(shù)中揮發(fā)油的含量及其成分組成存在較大的差異。MTT比色法檢測發(fā)現(xiàn)莪術(shù)油對SW1463細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用,并呈一定的時(shí)間-劑量依賴性,24 h、48 h和72 h的半數(shù)抑制率(IC50)分別為144.33、134.11、120.04 mg·L-1;Giemsa染色可見細(xì)胞明顯的凋亡形態(tài)學(xué)特征;Western blot表明,莪術(shù)油干預(yù)SW1463細(xì)胞株24 h后,與陰性對照組比較,Caspase-3、Bax的蛋白表達(dá)上調(diào)(P㩳0.05,P㩳0.05),Bcl-2的蛋白表達(dá)下調(diào)(P㩳0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.黔產(chǎn)莪術(shù)油的主要成分為單萜和倍半萜類,不同炮制法制備的黔產(chǎn)莪術(shù)揮發(fā)油的含量及其成分組成存在較大差異。2.不同濃度的黔產(chǎn)莪術(shù)油對直腸癌SW1463細(xì)胞增殖有一定的抑制作用,且隨著時(shí)間的增長及濃度增高而增強(qiáng),呈一定的時(shí)間-劑量依賴性。3.黔產(chǎn)莪術(shù)油可明顯抑制直腸癌SW1463細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與上調(diào)Caspase-3和Bax蛋白的表達(dá),下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285
【圖文】：

圖 2-5 吐溫-80 對 SW1463 細(xì)胞增殖的影響Fig. 2-5 The effect of Tween-80 on SW1463 cell line實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng) Tween-80 濃度低于 0.012%時(shí)，各時(shí)間點(diǎn)內(nèi) OD 值與陰性對照組比較差異并無顯著性，表明在此濃度范圍內(nèi) Tween-80 對細(xì)胞的增殖并無明顯影響，但當(dāng) Tween-80 濃度大于或等于 0.012%時(shí)，其 OD 值與陰性對照組比

圖 2-6 莪術(shù)油對 SW1463 細(xì)胞增殖的影響Fig. 2-6 Effect of zedoary turmeric oil on proliferation ofSW1463 cells2.5 黔產(chǎn)莪術(shù)油對直腸癌 SW1463 細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響正常情況下，SW1463 細(xì)胞呈梭形或橢圓形，貼壁生長，細(xì)胞長勢良好，胞

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2722615