【摘要】：目的:探究大劑量下不同粒度的三七對秀麗隱桿線蟲的毒副作用,確定三七的安全給藥劑量;研究三七對秀麗線蟲的長壽效應及其可能的分子機制,確定最佳粉碎粒度;研究不同粒度三七中皂苷類成分體外溶出度及穩(wěn)定性,為三七粉的臨床應用和進一步的新劑型新制劑開發(fā)提供一定的理論依據。方法:采用秀麗隱桿線蟲為模型,以10,20,40 mg/mL三七醇提物對線蟲急性暴露48 h和1,2,4 mg/mL三七醇提物對線蟲長期暴露8 d后,檢測各組線蟲生存率、后代數、體長、運動行為、細胞凋亡數、ROS水平等指標,確定三七的安全給藥劑量。以0.8,1.6 mg/mL三七醇提物對秀麗線蟲給藥4 d,測定各組線蟲壽命、后代數,確定三七最佳給藥粒度;以三七細粉給藥,測定線蟲在急性氧化應激和急性熱應激條件下的生存率,測定氧化應激1 h后線蟲體內ROS水平,測定線蟲體內脂質含量、SOD活力水平和CAT活力水平,測定線蟲體內衰老相關基因的表達水平,測定三七對轉基因線蟲CL2070體內HSP-16.2∷GFP和轉基因線蟲CF1553體內SOD-3∷GFP表達的影響,測定氧化應激條件下三七對轉基因線蟲CF1038和CB1370壽命的影響,從而觀察三七對秀麗線蟲的抗衰老作用,及對IIS信號通路調節(jié)的影響。研究不同粒度三七中皂苷類成分在不同pH溶液中的溶出情況,測定不同粒度三七的加速穩(wěn)定性,為三七粉進一步開發(fā)提供參考。結果:(1)以10,20,40 mg/mL三七醇提物對線蟲急性暴露48 h,均降低了線蟲的生存率、生殖能力和運動能力,增加了線蟲體內細胞凋亡數目和自由基數量,且40 mg/mL三七細粉組表現(xiàn)最為顯著。(2)以1,2,4mg/mL三七醇提物對線蟲長期暴露8 d,僅4 mg/mL組降低了線蟲的生存率、生殖能力和運動能力,增加了線蟲體內細胞凋亡數和自由基數量,且以細粉組表現(xiàn)最顯著,1,2 mg/mL組各指標均未表現(xiàn)出明顯的毒副作用。(3)以0.8,1.6 mg/mL三七醇提物對秀麗線蟲給藥,延長了線蟲的壽命,同時不影響線蟲的生殖能力。以三七細粉醇提物給藥,與對照組相比,增加了線蟲在急性氧化應激和急性熱應激條件下的存活率,降低了線蟲體內油脂含量和氧化應激后體內ROS水平,增加了線蟲體內SOD活力和CAT活力。(4)與對照組相比,三七細粉醇提物給藥組線蟲體內daf-2 mRNA表達量顯著下調,daf-16、sod-3、hsp-16.2 mRNA表達量顯著上調,且轉基因線蟲CL2070體內HSP-16.2∷GFP和CF1553體內SOD-3∷GFP表達量顯著性增加,daf-2和daf-16轉基因型線蟲壽命無顯著性影響。(5)在pH=1的鹽酸溶液中,三七粉中主要含有的3種皂苷均迅速被降解,未能測出其溶出曲線;在純水、pH=4.5和pH=6.8的緩沖溶液中,三七中粉和細粉溶出率和溶出速度均高于三七粗粉,但中粉和細粉溶出度相差不大;在三種溶出介質中,pH越高,三七總皂苷的累計溶出率越高。在加速試驗中,不同粒度三七粉末穩(wěn)定性基本一致。結論:通過大劑量(10,20,40 mg/mL)三七醇提物對線蟲急性暴露48 h,結果表明三七大劑量給藥有一定的毒副作用,且細粉效果最顯著;通過1,2,4 mg/mL三七醇提物對線長期暴露8 d,表明以三七對線蟲給藥的安全劑量在2 mg/mL以下。以0.8,1.6 mg/mL三七對線蟲給藥,結果表明三七可延長線蟲的壽命,具有一定的抗衰老作用,且三七細粉抗衰老作用最強,可能是通過調節(jié)IIS信號通路實現(xiàn)的。三七中粉和細粉的溶出度和穩(wěn)定性基本一致,結合藥效學研究,建議使用三七細粉口服,為三七散劑進一步開發(fā)提供參考。
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 不同粒度三七樣品含量測定的高效液相圖譜注：a. 三七皂苷 R1，b.人參皂苷 Rg1，c.人參皂苷 Rb1存率的影響劑量（10，20，40 mg/mL）三七粗粉、中粉、細粉和極急性暴露 48 h 后，各組線蟲生存率均有所降低，見圖比，粗粉 20，40 mg/mL 劑量組和中粉 20 mg/mL 劑量組P<0.05）；中粉 40 mg/mL 劑量組、細粉和極細粉各劑著下降（P<0.01）。各劑量細粉和極細粉組線蟲生存率存率相比，均顯著降低（P<0.05），但各劑量細粉和極相比較均無顯著性差異（P>0.05）。劑量（1，2，4 mg/mL）三七粗粉、中粉、細粉和極細暴露 8 d，各組線蟲生存率情況，如圖 2，B 所示。與

圖 2 不同粒度三七醇提物對線蟲生存率的影響注：A.急性暴露 48 h，B.長期暴露慢性給藥 8 d與對照組相比，* P<0.05，** P<0.01，下同。的影響量（10，20，40 mg/mL）三七粗粉、中粉、細粉醇提8 h，各組線蟲運動情況，如圖 3，A 和 B 所示。與對照劑量下，僅三七細粉組線蟲身體彎曲頻率和頭部擺動；20，40 mg/mL 劑量下，三七粗粉、中粉、細粉組下降（P<0.01），頭部擺動頻率也下降（P<0.01）。量（1，2，4 mg/mL）三七粗粉、中粉、細粉醇提物d，各組線蟲頭部擺動頻率如圖 3，C 所示。不同粒度

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本文編號：2722598