【摘要】：【目的】1.通過整理缺血性中風(fēng)恢復(fù)期證素相關(guān)文獻(xiàn),總結(jié)恢復(fù)期證素之間的關(guān)聯(lián),了解其病因病機(jī)的演變,并為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究提供一定依據(jù)。2.觀察健脾補(bǔ)土組方對(duì)體外胎鼠原代皮層神經(jīng)細(xì)胞低氧損傷后凋亡及INT-FAK通路下游凋亡相關(guān)Bax、Bcl-2、MEK、Erk2表達(dá)的影響,探討健脾補(bǔ)土方對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的干預(yù)機(jī)理。【方法】1.基于文獻(xiàn)研究對(duì)缺血性中風(fēng)恢復(fù)期證素進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析:采用計(jì)算機(jī)檢索方法,檢索2007年~2017年中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(CBM)、相關(guān)期刊論文(CNKI)、維普期刊資源整合服務(wù)平臺(tái)(VIP)中關(guān)于缺血性腦中風(fēng)恢復(fù)期證素的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行收集整理,應(yīng)用SQL Server 2012MAddin數(shù)據(jù)挖掘軟件、采用Apriori算法對(duì)缺血性中風(fēng)恢復(fù)期的證素進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析處理,總結(jié)缺血性腦中風(fēng)恢復(fù)期常見證素及其之間的關(guān)聯(lián)。2.分離孕17d SD大鼠的胎鼠原代神經(jīng)元,接種于六孔板中培養(yǎng),并分為A正常血清對(duì)照組、B低氧損傷模型組、C低氧+神經(jīng)生長因子組、D低氧+健脾補(bǔ)土血清組、E低氧+健脾補(bǔ)土血清+FAK抑制劑組5組。采用培養(yǎng)箱低氧/復(fù)氧的方法誘導(dǎo)后四組標(biāo)本神經(jīng)元凋亡形成腦缺血損傷模型,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測神經(jīng)元凋亡情況,RT-q PCR法檢測Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA的表達(dá),Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測Bax、Bcl-2、MEK、Erk2蛋白的表達(dá)�！窘Y(jié)果】1.關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:缺血性中風(fēng)恢復(fù)期常見的病位證素主要有5個(gè),分別為:腦、心、脾、腎、肝;病性證素主要有4個(gè),分別為:氣虛、血瘀、痰濁、陰虛。(1)病位證素關(guān)聯(lián):腦與心的關(guān)聯(lián)性最高,其次依次為腦與腎、腦與脾、心與脾等。(2)病性證素關(guān)聯(lián):關(guān)聯(lián)性最高的是氣虛與血瘀,其次依次為血瘀與痰濁、氣虛+痰濁與血瘀、氣虛與痰濁、陰虛與血瘀。2.體外實(shí)驗(yàn):(1)神經(jīng)元凋亡率:與正常血清對(duì)照組比較,低氧損傷模型組凋亡率明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與低氧損傷模型組比較,低氧+神經(jīng)生長因子組和低氧+健脾補(bǔ)土血清組均顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與低氧+神經(jīng)生長因子組比較,健脾補(bǔ)土組相對(duì)減少,差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與低氧+健脾補(bǔ)土血清組比較,低氧+健脾補(bǔ)土血清+FAK抑制劑組神經(jīng)元凋亡率顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA與蛋白表達(dá)情況:與正常血清對(duì)照組比較,低氧損傷模型組神經(jīng)元Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達(dá)顯著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)明顯減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與低氧損傷模型組比較,低氧+神經(jīng)生長因子組和低氧+健脾補(bǔ)土血清組中神經(jīng)元Bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)顯著升高,Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達(dá)明顯減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與低氧+神經(jīng)生長因子組比較,健脾補(bǔ)土組神經(jīng)元Bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)稍升高,Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達(dá)稍減少,差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與低氧+健脾補(bǔ)土血清組比較,低氧+健脾補(bǔ)土血清+FAK抑制劑組神經(jīng)元Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達(dá)顯著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)明顯減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。【結(jié)論】1.通過整理缺血性中風(fēng)恢復(fù)期的文獻(xiàn),采用數(shù)據(jù)挖掘之關(guān)聯(lián)分析的方法,揭示缺血性中風(fēng)恢復(fù)期的中醫(yī)證素分布具有一定的規(guī)律,其病位證素主要為腦、心、脾、腎,病性證素主要為氣虛、血瘀、痰濁、陰虛。各病位病性相互聯(lián)系,隨著疾病的演變,相互夾雜或轉(zhuǎn)化,其規(guī)律更清楚地展現(xiàn)了缺血性中風(fēng)恢復(fù)期的證素特點(diǎn)及病機(jī)演變,并發(fā)現(xiàn)“腦”與“脾”強(qiáng)關(guān)聯(lián)及“氣虛”、“血瘀”、“痰濁”之間演變與“脾”功能相關(guān)的特點(diǎn),從病因病機(jī)上為課題組健脾補(bǔ)土方治療缺血性中風(fēng)提供了一定的理論及文獻(xiàn)支持。2.通過體外神經(jīng)元低氧/復(fù)氧損傷后凋亡模擬腦缺血性再灌注損傷模型,研究健脾補(bǔ)土方對(duì)神經(jīng)元凋亡以及特定基因FAK表達(dá)被阻斷情況下的Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達(dá)情況,探討健脾補(bǔ)土組方對(duì)體外神經(jīng)元凋亡的干預(yù)機(jī)理,其結(jié)論如下:A.健脾補(bǔ)土方能減少體外神經(jīng)元凋亡。B.其作用機(jī)制可能通過激活I(lǐng)NT-FAK通路,上調(diào)FAK的表達(dá),通過Raf/MEK/ERK激酶信號(hào)途徑,發(fā)生進(jìn)一步級(jí)聯(lián)反應(yīng),抑制凋亡相關(guān)MEK、Erk2、Bax表達(dá),增加Bcl-2表達(dá),從而達(dá)到抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡,起到保護(hù)腦缺血損傷的作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R255.2;R285.5
【圖文】：

Raf/MEK/ERK信號(hào)通路

土方抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展組在既往探討健脾補(bǔ)土方對(duì)缺血性中風(fēng)治療機(jī)制中發(fā)現(xiàn)的作用。李花等在探討健脾補(bǔ)土方對(duì)改善腦缺血再灌注大圖 8 健脾補(bǔ)土方方解示意圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2722452