【摘要】：本論文主要由兩部分組成。第一部分為對(duì)大型高等真菌光炭輪菌(Daldinia eschscholtzii)菌絲體進(jìn)行化學(xué)成分研究。第二部分為對(duì)冬蟲夏草中一株內(nèi)生菌赫克青霉菌(Penicillium herquei)的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行化學(xué)成分研究。第一部分:為了探究光炭輪菌菌絲體中所含的化學(xué)成分,即尋求更多結(jié)構(gòu)新穎、活性良好的化合物,本論文針對(duì)一株大型高等真菌D.eschscholtzii,對(duì)其進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng),并對(duì)其菌絲體進(jìn)行化學(xué)成分研究。本論文利用微生物學(xué)手段將采集并鑒定的光炭輪菌接種至固體培養(yǎng)基,并對(duì)菌種進(jìn)行放大液體發(fā)酵,得到實(shí)驗(yàn)所用全部菌絲體;再運(yùn)用化學(xué)手段,通過溶劑萃取、柱色譜、薄層色譜、制備色譜等方法,對(duì)菌絲體的化學(xué)成分進(jìn)行提取分離;對(duì)得到的單體化合物,采用NMR、MS等波譜手段對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定;再采用MTT法對(duì)所得到的化合物進(jìn)行細(xì)胞毒活性測(cè)試。實(shí)驗(yàn)分離鑒定了7個(gè)化合物,分別為:(E)-6-(3-壬烯基)-2H-吡喃-2-酮((E)-6-(non-3-en-1-yl)-2H-pyran-2-one)(DE-1)、(R)-5-羥基-8-甲氧基-2-甲基4-色原酮((R)-5-hydroxy-8-methoxy-2-methylchroman-4-one)(DE-2)、4,6,8(14),22-四烯-3-麥角甾酮(ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one)(DE-3)、5-甲氧基香豆素(5-methoxycoumarin)(DE-4)、5-羥基-2-甲基-4-色原酮(5-hydroxy-2-methyl-4H-chromen-4-one)(DE-5)、3,4-二氫-5-甲氧基-2-甲基苯并二氫吡喃酮(3,4-dihydro-5-methoxy-2-methyl-2H-1-benzopyran-4-ol)(DE-6)、5-甲氧基-2-甲基二氫色原酮(2,3-dihydro-5-methoxy-2-methylchromen-4-one)(DE-7)。分離得到的化合物中包括色原酮類化合物4個(gè),香豆素類化合物1個(gè),麥角甾類化合物1個(gè),吡喃酮類化合物1個(gè),其中化合物DE-1、DE-2為新化合物。細(xì)胞毒活性測(cè)定結(jié)果表明化合物DE-3對(duì)癌細(xì)胞株H1299、H460、HGC-27、A549和MNK-45均表現(xiàn)出較弱的細(xì)胞毒活性,IC_(50)值分別為25.2±2.9μmol/L、32.3±4.2μmol/L、29.2±1.2μmol/L、33.9±3.7μmol/L、18.0±7.0μmol/L。第二部分:為了進(jìn)一步開發(fā)冬蟲夏草的藥用價(jià)值,也為冬蟲夏草的資源合理利用提供新的思路,考慮到植物內(nèi)生真菌種類龐大,次級(jí)代謝產(chǎn)物種類繁多、結(jié)構(gòu)多樣新穎,能為獲得更多活性成分提供又一途徑。本論文對(duì)從冬蟲夏草中分離得到的一株內(nèi)生菌P.herquei,對(duì)其液體發(fā)酵后得到的次級(jí)代謝產(chǎn)物乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分研究。本論文運(yùn)用微生物學(xué)手段,對(duì)新鮮采挖的冬蟲夏草進(jìn)行目標(biāo)內(nèi)生菌純化分離,再對(duì)目標(biāo)內(nèi)生菌進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng);隨后再利用溶劑萃取、柱色譜、薄層色譜、制備色譜等方法,對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行提取分離;對(duì)得到的化學(xué)成分,采用NMR、MS、ECD計(jì)算等手段對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。我們從冬蟲夏草內(nèi)生菌P.herquei發(fā)酵液中共分離得到14個(gè)化合物,經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定,它們分別為:(S)-6-(仲丁基)-5-(羥甲基)-4-甲氧基-2H-吡喃-2-酮((S)-6-(s ec-butyl)-5-(hydroxymethyl)-4-methoxy-2H-pyran-2-one)(PH-1)、(5S,7R)-7-乙基-4,5-二甲氧基-7-甲基-5,7-二氫-2H-呋喃并[3,4-b]吡喃-2酮((5S,7R)-7-ethyl-4,5-dimethoxy-7-methyl-5,7-dihydro-2H-furo[3,4-b]pyran-2-one)(PH-2)、(5R,7R)-7-乙基-4,5-二甲氧基-7-甲基-5,7-二氫-2H-呋喃并[3,4-b]吡喃-2酮((5R,7R)-7-ethyl-4,5-dimethoxy-7-methyl-5,7-dihydro-2H-furo[3,4-b]pyran-2-one)(PH-3)、2',4'-二羥基-3',5'-二甲基苯乙酮(2',4'-dihydroxy-3',5'-dimethylacetophenone)(PH-4)、香草醛(vanillin)(PH-5)、3-氧代-α-紫羅蘭酮(3-oxo-α-ionone)(PH-6)、3,3,5-三甲基-4-(3-氧代-1-丁烯基)-1-環(huán)己酮(3,3,5-trimethyl-4-(3-oxobut-1-en-1-yl)cyclohexan-1-one)(PH-7)、對(duì)羥基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde)(PH-8)、對(duì)羥基苯乙酮(p-hydroxyacetophenone)(PH-9)、對(duì)羥基苯乙酸甲酯(methyl p-hydroxyphenylacetate)(PH-10)、環(huán)(脯氨酸-異亮氨酸)(cyclo-(Pro-Ile))(PH-11)、環(huán)(脯氨酸-纈氨酸)(cyclo-(Pro-Val))(PH-12)、4-甲氧基苯乙酸(4-methoxyphenylacetic acid)(PH-13)、環(huán)(4-甲基脯氨酸-纈氨酸)(cyclo-(4-methyl-Pro-Val))(PH-14)。分離得到的化合物中包括苯乙酮及其衍生物4個(gè),環(huán)二肽類化合物3個(gè),吡喃酮及其衍生物3個(gè),紫羅蘭酮類化合物2個(gè),苯甲醛類化合物2個(gè),其中化合物PH-1、PH-2、PH-3為新化合物。
【圖文】：

13圖 2 光炭輪菌菌絲體的化學(xué)成分分離流程圖Fig. 2 Isolation process flow chart of chemical constituents from D. eschscholtzii

圖 3 光炭輪菌菌絲體乙酸乙酯萃取部位化學(xué)成分Fig. 3 Chemical constituents from ethyl acetate extract of D. eschscholtzii mycelia構(gòu)鑒定論文從光炭輪菌菌絲體的乙酸乙酯萃取部位中共分離得到 7 個(gè)純化譜學(xué)手段，對(duì)它們進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定了 2 個(gè)新化合物：一個(gè)為吡：(E)-6-(3-壬烯基)-2H-吡喃-2-酮（DE-1）、一個(gè)為色原酮類化合-8-甲氧基-2-甲基 4-色原酮（DE-2）；另外還有 3 個(gè)色原酮類化合-甲基-4-色原酮（DE-5）、3,4-二氫-5-甲氧基-2-甲基苯并二氫吡喃5-甲氧基-2-甲基二氫色原酮（DE-7）；1 個(gè)香豆素類化合物：5-甲DE-4）；1 個(gè)麥角甾類化合物：4,6,8(14),22-四烯-3-麥角甾酮（DE合物 DE-1
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2688807