發(fā)布時間：2020-05-29 18:29

【摘要】：目的:通過建立大鼠重型顱腦損傷模型,觀察大鼠血清白細(xì)胞介素(interleukin IL)-6、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor TNF-α)、S100B蛋白含量的改變,以及大鼠腦組織神經(jīng)生長因子(NGF)、BCL-2蛋白、BAX蛋白的表達(dá),探討甘草及甘草酸對重型顱腦損傷大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。方法:將90只SPF級SD雄性大鼠隨機(jī)分為5組:正常對照組、假手術(shù)組、模型非用藥組、模型甘草水煎組、模型甘草酸組。每組各18只。建立大鼠重型顱腦損傷模型,造模成功后6h對各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分,甘草水煎組、甘草酸組分別予以2ml藥物灌胃,正常對照組、假手術(shù)組、模型非用藥組大鼠予以等量生理鹽水灌胃,每日一次。各組分別于灌胃后24h、72h、168h三個時間段取材,每組取6只大鼠。取材時先心臟采血4?mL,采用酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)檢測血清中IL-6、TNF-α、S100B蛋白含量;內(nèi)固定后斷頭取腦,光鏡下觀察大鼠腦組織病理學(xué)改變,同時采用免疫組織化學(xué)法測定大鼠腦組織NGF、BCL-2蛋白、BAX蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)模型非用藥組與正常組比較,在三個時間段神經(jīng)功能缺損評分均明顯升高(P0.05);甘草水煎組及甘草酸組在三個時間段神經(jīng)功能缺損評分與模型非用藥組比較明顯降低(P0.05),但甘草水煎組及甘草酸組神經(jīng)功能缺損評分在三個時間段比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)正常對照組、假手術(shù)組大鼠大腦腦組織細(xì)胞排列均勻,胞核染色為藍(lán)色,呈橢圓形,可見核仁,輪廓清楚,未見神經(jīng)細(xì)胞變性壞死及炎癥細(xì)胞的浸潤。模型非用藥組可見細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞核固縮、碎裂明顯,同時可見明顯的組織細(xì)胞水腫及大量神經(jīng)細(xì)胞壞死。甘草水煎組、甘草酸組大鼠腦組織疏松,細(xì)胞排列無序,神經(jīng)細(xì)胞少見,少量的細(xì)胞核固縮、炎癥細(xì)胞浸潤,部分細(xì)胞水腫,膠質(zhì)細(xì)胞增生。(3)除假手術(shù)組外,模型非用藥組、甘草水煎組和甘草酸組在三個時間段血清IL-6、TNF-α、S100B蛋白的含量均較正常組明顯增加(P0.05)。造模成功后24h,與正常對照組比較,模型非用藥組大鼠血清IL-6、TNF-α、S100B蛋白的含量即出現(xiàn)升高,同時在72h達(dá)到高峰,168h有所回落,但仍高于正常對照組;給予中藥甘草和甘草酸干預(yù)后,三個時間段大鼠血清IL-6、TNF-α、S100B蛋白的含量均低于模型非用藥組,差異明顯(P0.05)。但甘草水煎組和甘草酸在相同時間段比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(4)正常組和假手術(shù)組大鼠在腦組織中均有少量NGF表達(dá),兩組之間無差異(P0.05)。造模成功后24h,模型非用藥組大鼠腦組織中NGF表達(dá)即增加,一直持續(xù)至168h,但三個時間段差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。甘草水煎組和甘草酸組在24h與模型非用藥組比較NGF表達(dá)無差異,在第72h兩組表達(dá)明顯增加,差異顯著(P0.05),在168h達(dá)到高峰,但兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(5)除假手術(shù)組外,模型非用藥組、甘草水煎組和甘草酸組在各個時間段BCL-2蛋白的表達(dá)均增高,差異明顯(P0.05)。在模型非用藥組中,在72h中表達(dá)稍有回落,但三個時間段的差異不明顯(P0.05)。甘草水煎組在第24h即增加,并在168h達(dá)到高峰。甘草酸組在24h與模型非用藥組表達(dá)無差異,但在72h開始表達(dá)增加,一直持續(xù)至168h(P0.05)。甘草水煎組和甘草酸組在24h大鼠腦組織BCL-2蛋白陽性細(xì)胞的表達(dá)無差異(P0.05),但在第72h、168h,甘草水煎組BCL-2蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增加(P0.05)。(6)正常組、假手術(shù)組大鼠腦組織均有少量BAX蛋白表達(dá),兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),模型非用藥組、甘草水煎組和甘草酸組三個時間段BAX蛋白表達(dá)明顯增高(P0.05)。造模成功后第24h模型非用藥組大鼠即出現(xiàn)BAX蛋白表達(dá),在72h達(dá)到高峰,在168h稍有回落。甘草水煎組和甘草酸組亦在72h出現(xiàn)高值,但較模型非用藥組明顯降低(P0.05),并且隨著用藥時間的延長在第168h明顯降低(P0.05)。但甘草水煎組和甘草酸組內(nèi)比較無差異(P0.05)結(jié)論:甘草及甘草酸對重型顱腦損傷大鼠均具有神經(jīng)保護(hù)作用,其機(jī)制與降低繼發(fā)性炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān);與甘草酸相比,甘草的神經(jīng)保護(hù)作用更明顯,提示甘草中還有其他活性成分參與對受損神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。
【圖文】：

21圖 1 HE 染色 200x 倍光鏡大鼠腦組織病理表現(xiàn)：A：正常組；B：假手術(shù)組；C：模型非用藥組 72h；D：甘草水煎組 72h；E：甘草酸組 72h；Figurel 1 HE staining×200,The result of brain tissue pathology examinations: A: normal control group;B:sham operation group;C: model group at 72h;D: The liquorice water decoction group at 72h;E: Theglycyrrhizic acid group at 72h.

25圖 2 各組大鼠 NGF 表達(dá)比較（SP 法，Χ200 倍）：A：正常組；B：假手術(shù)組；C：模型非用藥組 72hD：甘草水煎組 72h；E：甘草酸組 72h。Figurel 2 Immunohistochemical staining，×200,The result of brain tissue pathology examinations: Anormal control group;B: sham operation group;C: model group at 72h;D: The liquorice water decoctiogroup at 72h;E: The glycyrrhizic acid groupgroup at 72h.7 甘草和甘草酸在顱腦損傷大鼠腦組織 BCL-2 蛋白表達(dá)除假手術(shù)組外，模型非用藥組、甘草水煎組和甘草酸組在各個時間段BCL-2 蛋白的表達(dá)均增高，差異明顯（P<0.05）。在模型非用藥組中，在 72表達(dá)稍有回落，，但三個時間段的差異不明顯（P>0.05）。甘草水煎組在第 24即增加，并在 168h 達(dá)到高峰。甘草酸組在 24h 與模型非用藥組表達(dá)無差異
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2687316