發(fā)布時(shí)間：2020-05-27 23:53

【摘要】：【目的】采用正交試驗(yàn)優(yōu)化南重樓中4種重樓皂苷的超聲提取工藝;采用HPLC法測定滇產(chǎn)7種重樓屬藥用植物中4種重樓皂苷的含量及可見分光光度法測定重樓中總皂苷的含量。通過改良寇氏法測定南重樓的LD50;比較滇產(chǎn)7種重樓屬藥用植物的止血、鎮(zhèn)痛作用,為擴(kuò)大資源提供依據(jù)。【方法】采用正交試驗(yàn),以4種重樓皂苷含量為指標(biāo),考察提取溶劑的單次料液比、單次提取時(shí)間、初始提取溫度、提取次數(shù)等因素的影響,優(yōu)化超聲提取工藝;采用HPLC法測定滇產(chǎn)7種重樓屬藥用植物中4種重樓皂苷的含量及可見分光光度法測定其總皂苷的含量。采用改良寇氏法測定南重樓的半數(shù)致死量(LD50);取雄雌各半昆明種小鼠160只,體重18~22g,隨機(jī)分組16組,各組分別為正常組、重樓高、低劑量組(2g/kg、1g/kg)、陽性藥云南白藥組(0.667g/kg);以上各組分別給予各受試物1次/d,連續(xù)7d,采用毛細(xì)管法和斷尾法分析觀察受試藥的止血作用。取雄雌各半昆明種小鼠170只,體重18~22g,隨機(jī)分組17組,各組分別為正常組、模型用藥組、模型陽性藥組、模型組;采用肝素和華法林小鼠模型研究重樓的凝血途徑。取雄雌各半昆明種小鼠160只,體重18~22g,隨機(jī)分組16組,各組分別為正常組、重樓高、低劑量組(2g/kg、1g/kg)、陽性藥阿司匹林組(20mg/kg);采用醋酸扭體法分析觀察受試藥的鎮(zhèn)痛作用。【結(jié)果】南重樓中4重樓皂苷的最佳提取工藝為15倍的溶媒,每次提取20min,初始提取溫度為40℃,提取3次;所考察因素中提取次數(shù)對重樓皂苷的提取率影響最大,其次為初始提取溫度、甲醇單次液料比、單次提取時(shí)間。4種重樓皂苷的總含量最高為長柱重樓1.649%,南重樓次之為1.457%,多葉重樓為0.902%,黑籽重樓為0.306%,滇重樓為0.261%;而大理重樓的總含量最低為0.125%,其次為毛重樓0.175%;總皂苷含量最高為長柱重樓47.991mg/g,滇重樓的總皂苷含量為32.789mg/g次之,其次為大理重樓的32.617mg/g,南重樓的為30.215mg/g,黑籽重樓的為13.340mg/g;總皂苷含量最低的為毛重樓的4.722mg/g,其次是多葉重樓的12.289mg/g。通過改良寇氏法計(jì)算得出南重樓醇提物的LD50為10.5g/kg;由毛細(xì)管法和斷尾法可知:1g/kg組對BT的作用效果:滇重樓長柱重樓大理重樓多葉重樓毛重樓南重樓黑籽重樓;2g/kg組對BT的作用效果:滇重樓長柱重樓南重樓多葉重樓黑籽重樓毛重樓大理重樓;1g/kg組對CT的作用效果:滇重樓毛重樓南重樓大理重樓黑籽重樓長柱重樓多葉重樓;2g/kg組對CT的作用效果:滇重樓大理重樓南重樓毛重樓多葉重樓黑籽重樓長柱重樓;肝素和華法林小鼠模型結(jié)果表明,重樓的高、低劑量組均能不同程度的縮短由肝素和華法林造成的凝血功能障礙小鼠的APTT、PT時(shí)間。醋酸扭體法結(jié)果表明,1g/kg組對鎮(zhèn)痛的作用效果:滇重樓南重樓大理重樓長柱重樓黑籽重樓多葉重樓毛重樓,2g/kg組對鎮(zhèn)痛的作用效果:滇重樓柱重樓南重樓大理重樓黑籽重樓多葉重樓毛重樓�！窘Y(jié)論】最優(yōu)提取方法可行,重復(fù)性好,穩(wěn)定可靠,可用于南重樓中4種重樓皂苷的提取;含量測定方法線性關(guān)系良好,操作簡單,重復(fù)性好,穩(wěn)定可靠,可用于測定重樓的含量。南重樓具有低毒,且滇產(chǎn)7種重樓屬藥用植物均有一定的止血、鎮(zhèn)痛作用;可初步推斷重樓的止血途徑為共同凝血途徑,即內(nèi)源性凝血途徑和外源性凝血途徑共同參與的過程。
【圖文】：

圖 1-1 混合對照品溶液及樣品溶液的高效液相色譜圖A 混合對照品；B 樣品；1 重樓皂苷 VI；2 重樓皂苷 VII；3 重樓皂苷 II；4 重樓皂苷 I2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按 1.3.4.2 測定，以進(jìn)樣量(X, μg)為橫坐標(biāo)、峰面積 Y 為縱坐標(biāo)得出重樓皂苷 I、II、VI、VII 的線性回歸方程分別為：YI=366.44XI+3.07，，(r=0.999 9)；YII=377.60XII+2.42，(r=0.999 9)；YVI=340.35XVI+1.63，(r=0.999 9)；YVII=344.22XVII+0.37，(r=0.999 9)，表明重樓皂苷 I、II、VI、VII 在 0.64~12.80μg、0.46-9.20μg、0.26~5.20μg、0.23~4.60μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.1.3 精密度試驗(yàn)連續(xù)進(jìn)樣 5 次，重樓皂苷 I、II、VI、VII 峰面積的 RSD 分別為 2.38%、2.06%、2.17%、2.10%，表明該方法精密度良好。2.1.4 穩(wěn)定性考察按 1.3.4.4 操作，重樓皂苷 I、II、VI、VII 峰面積的 RSD 分別為 2.02%、2.71%、

大理大學(xué)碩士學(xué)位論文 滇產(chǎn) 7 種重樓屬藥用植物主要成分含量分析及止血、鎮(zhèn)痛藥效學(xué)研究置 10ml 容量瓶中定容，過濾，備用。2.1.3 方法學(xué)考察[20]2.1.3.1 色譜條件根據(jù)藥典方法[21]進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，色譜柱為 AgilentC-18 柱(4.6mm×250mm，5μm)，檢測波長為 203nm，柱溫 25℃；流動(dòng)相乙腈(A)-水(B)梯度洗脫(0~14min，30%~40%A；14~40min，40%A；40~70min，40~60%A)，流速為 0.9ml/min，進(jìn)樣量 5μl。理論塔板數(shù)按重樓皂苷 I、II、VI、VII 計(jì)算均不低于 10 000。見圖 1-2。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R284

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2684348