【摘要】：目的使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)建立慢性神經(jīng)退行性疾病的炎癥反應(yīng)的細(xì)胞模型,通過(guò)采用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫組化等實(shí)驗(yàn)方法來(lái)探究青蒿素(Artemisinin,ART)對(duì)該模型炎癥介質(zhì)釋放的影響,旨在研究青蒿素對(duì)慢性神經(jīng)退行性疾病神經(jīng)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抑制作用及其機(jī)制。方法常規(guī)培養(yǎng)傳代小鼠BV2小膠質(zhì)細(xì)胞,將處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)狀態(tài)良好的BV2細(xì)胞用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。使用不同濃度的青蒿素(ART)來(lái)處理經(jīng)過(guò)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞。采用CCK8法來(lái)檢測(cè)ART對(duì)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的作用濃度。通過(guò)ELISA來(lái)檢測(cè)ART對(duì)促炎因子白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的分泌水平的影響。采用Western blot來(lái)檢測(cè)NF-κB蛋白(P65)、IKBα的表達(dá)水平,以及ART對(duì)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(i NOS)和環(huán)氧合酶2(COX-2)的基因表達(dá)的影響。結(jié)果通過(guò)CCK8法檢測(cè)出當(dāng)ART的劑量范圍為0.1至10μmol/L時(shí)其對(duì)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞不具有明顯的毒性作用,為方便進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)操作,因此選擇1μmol/L作為ART的有效作用濃度。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在使用ART預(yù)先處理過(guò)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞中,促炎因子IL-1β、TNF-α的分泌水平顯著降低。Western blot的結(jié)果顯示,ART預(yù)處理組細(xì)胞中的NF-κB(P65)、IKBα的蛋白表達(dá)水平顯著升高,炎癥誘導(dǎo)酶i NOS、COX-2的表達(dá)水平則顯著降低。結(jié)論ART可以調(diào)節(jié)LPS活化的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞中炎性因子的分泌及炎癥誘導(dǎo)酶的表達(dá),發(fā)揮其抗炎作用,這一抗炎作用可能是通過(guò)對(duì)NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

1 不同濃度的 ART 對(duì) BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞活性的影注: * P ＜ 0.05，，與對(duì)照組相比cts of different concentrations of ART on the viability BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)炎性因子釋放的影響測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，LPS 誘導(dǎo)后的 BV2 小TNF-α 的分泌水平明顯升高（P＜0.01）；與 LPS 組相/L）促炎因子 IL-1β、TNF-α 的分泌水平顯著降低（

圖 3 Western blot 檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi) P65、IKBα、iNOS、COX2 的表a、b、c、d 分別為 P65、IKBα、iNOS、COX-2 相對(duì)表達(dá)量注：* P ＜0.01 與對(duì)照組相比，**P＜0.01 與 LPS 組相比，#P＜0.05 與對(duì)比，##P＜0.05 與 LPS 組相比Fig.3 The expression levels of P65, IKBα, iNOS and COX2 in each grodetected by Western blot
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 抗晶晶;王輝;;蒲公英三萜類物質(zhì)的抗炎作用研究進(jìn)展[J];中國(guó)野生植物資源;2015年01期

本文編號(hào)：2664742