【摘要】：癌癥嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康,每3例確診癌癥病例中有1例是皮膚癌,全世界每年發(fā)生200多萬(wàn)例皮膚癌病例,其中惡性黑色素瘤的死亡率極高。紫外線的輻射是皮膚癌發(fā)生的重要因素之一。隨著臭氧層的破壞,越來(lái)越多的紫外線到達(dá)地面,人體長(zhǎng)期暴露在紫外光下尤其是中波紫外線(UVB),會(huì)引起皮膚衰老、DNA損傷、光老化甚至癌變。目前人參有效成分抗腫瘤、抗紫外線的研究已成為熱點(diǎn)。但人參及其提取物中的重金屬、農(nóng)藥和溶劑殘留等會(huì)帶來(lái)安全風(fēng)險(xiǎn),人參生長(zhǎng)過(guò)程緩慢且大面積占用森林土地,為解決伐林栽參、老參地問(wèn)題,科研人員以人參莖葉為外植體誘導(dǎo)出人參發(fā)根,工廠化生產(chǎn)人參皂苷。人參發(fā)根研究多集中于發(fā)根誘導(dǎo)、培養(yǎng)條件優(yōu)化、生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物。尚未發(fā)現(xiàn)人參發(fā)根抗黑色素瘤、抗紫外線的作用研究。所以本實(shí)驗(yàn)選擇富含人參皂苷、多糖、氨基酸有效成分,而無(wú)農(nóng)藥、無(wú)重金屬及質(zhì)量穩(wěn)定的人參發(fā)狀根及其培養(yǎng)液為原料,首先,通過(guò)HPLC、苯酚-硫酸法,對(duì)其有效成分進(jìn)行測(cè)定;其次,采用Cu~(2+)螯合能力、PPO、FRAP三種方法對(duì)人參發(fā)根進(jìn)行抗氧化功效評(píng)價(jià);再次,對(duì)人參發(fā)根的體外抗黑色素瘤活性進(jìn)行研究;最后,依據(jù)功效評(píng)價(jià)結(jié)果,研制一款具有護(hù)膚作用的人參發(fā)根護(hù)膚液,對(duì)其抗紫外線功效、機(jī)理進(jìn)行研究,以期為人參發(fā)根藥理作用進(jìn)一步研究及其應(yīng)用,提供理論依據(jù)和參考。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1、人參發(fā)根抗氧化能力顯著,隨著濃度的增大,人參發(fā)根的Cu~(2+)螯合率逐漸接近VC,在100 mg/mL時(shí)人參發(fā)根的Cu~(2+)螯合率與VC差異不顯著(P0.05);人參發(fā)根與VC有相同的酶活力清除趨勢(shì),40-100 mg/mL時(shí)兩者差異不顯著(P0.05);人參發(fā)根的總抗氧化能力在100 mg/mL時(shí)達(dá)到0.8774 mmol FeSO_4/g。2、人參發(fā)根抑制黑色素瘤A375細(xì)胞增殖(P0.05);抑制A375細(xì)胞中TYR的活性(P0.05);使細(xì)胞中黑色素生成減少;降低細(xì)胞遷移、侵襲能力;和對(duì)照組相比人參發(fā)根組、人參組及達(dá)卡巴嗪組均出現(xiàn)明顯的凋亡細(xì)胞,人參發(fā)根組較人參組和達(dá)卡巴嗪組晚期凋亡率高(P0.05),其機(jī)理是將皮膚癌細(xì)胞的周期阻滯在S、G2/M期實(shí)現(xiàn)的。人參發(fā)根促進(jìn)人皮膚角質(zhì)層細(xì)胞HaCaT增殖,促進(jìn)細(xì)胞劃痕愈合,對(duì)HaCaT細(xì)胞起到保護(hù)作用效果強(qiáng)于人參(P0.05),達(dá)卡巴嗪因?qū)aCaT細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖。3、人參發(fā)根護(hù)膚液的制備工藝:取90mL去離子水加入5mL甘油、5mL丙二醇攪拌均勻,加入0.1g透明質(zhì)酸鈉混勻后在高速攪拌下緩慢加入0.1g卡波姆,用10%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH,作為基質(zhì),與人參發(fā)根醇提物配制成10 mg/mL的人參發(fā)根護(hù)膚液。4、人參發(fā)根提高了小鼠皮膚中Hyp含量、GSH-Px活性,降低MDA含量,增加CAT、SOD活力(P0.05);人參發(fā)根組小鼠皮膚中IL-6、TNF-α含量均減少,以人參發(fā)根高劑量組最好(P0.05);人參組、人參發(fā)根中、高劑量組有效改善UVB所致的小鼠皮膚損傷、脫屑現(xiàn)象,降低小鼠表皮層厚度,減少炎性浸潤(rùn)及角質(zhì)層過(guò)度角化,保護(hù)膠原纖維;模型組小鼠皮膚中的MMP-1、MMP-3蛋白表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組(P0.05),人參組、人參發(fā)根低、中、高劑量組MMP-1、MMP-3蛋白表達(dá)水平顯著下降(P0.05)。
【圖文】：

Rb1 0.0105±0.0006Rg2 0.0029±0.0010Rc 0.0021±0.000320(R)-Rh1 0Rb2 0.0047±0.0008Rb3 0.0114±0.0110F1 0Rd 0.0070±0.0005Rk3 0F2 0.0040±0.0018Rh4 0.0075±0.0046Rg3 0原人參三醇 0Compound K 0.0073±0.0013Rg5 0Rh2 0原人參二醇 0.0153±0.0016加和值 0.1607±0.0110

18圖 1.3 標(biāo)準(zhǔn)品、樣品氨基酸含量色譜圖Fig.1.3 HPLC chromatograms of 20 amino acid standard and the samples注：1-20 依次為：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Asn）、絲氨酸（Ser）、谷氨酰胺（G（Gly）、組氨酸（His）、精氨酸（Arg）、蘇氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）、酪氨酸（T（Val）、甲硫氨酸（Met）、胱氨酸（Cys&Cys）和半胱氨酸（Cys）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙色氨酸（Trp）、賴(lài)氨酸（Lys）1.4 討論人參主要通過(guò)有效成分人參皂苷、多糖、氨基酸發(fā)揮抗氧化、抗皮膚癌、護(hù)近年來(lái)人參的用途越來(lái)越廣泛。但人參是多年生植物，我國(guó)多采用伐林栽參、大面積占用土地，為解決伐林栽參、老參地問(wèn)題，科研人員用發(fā)根農(nóng)桿菌從人參導(dǎo)出人參發(fā)根，對(duì)人參發(fā)根進(jìn)行培養(yǎng)裝置研究、培養(yǎng)條件優(yōu)化。對(duì)人參發(fā)根進(jìn)行養(yǎng)，，工廠化生產(chǎn)人參有效成分。對(duì)本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的人參發(fā)根及培養(yǎng)基中有效成分結(jié)果表明人參發(fā)根及其培養(yǎng)基中含有人參的主要有效成分。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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1 王小雪;黨磊;張美姿;郭飛馬;龐欣;;輔酶Q10納米微乳的制備及其體外抗紫外輻射研究[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2015年34期

2 楊歷輝;張逸;李東霞;;中藥抗皮膚惡性腫瘤的實(shí)驗(yàn)機(jī)制研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2015年30期

3 劉佳;陳丹娜;曾琛;張敬敬;;人參莖葉總皂苷對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠腦組織的抗氧化作用[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2015年13期

4 姜福瓊;鄧丹琪;王劍松;劉馨;張佩蓮;周曉鴻;;重樓皂苷Ⅱ?qū)375人黑素瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];皮膚病與性病;2015年03期

5 劉敏;武曉瑞;李勇枝;鄭虎占;李英賢;;人參提取物改善模擬航天應(yīng)激狀態(tài)下大鼠氧化應(yīng)激水平的研究[J];山東中醫(yī)雜志;2015年05期

6 潘利文;宋捷;;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ體內(nèi)外的抗黑色素瘤研究[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2015年08期

7 周思思;王榆元;劉丹;張一e

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