【摘要】：蕨麻是薔薇科(Rosaceae)委陵菜屬(Potentilla)具匍匐莖的多年生草本植物鵝絨委陵菜(Potentilla anserina L.)的膨大塊根,又名人參果、延壽草,藏語稱“卓老沙僧”、“戳瑪”,是藏醫(yī)常用草藥,1992年被收錄于青海省藥品標準。其野生資源分布非常廣泛,主要集中生長在中國的西部地區(qū),特別是在甘肅、青海、西藏等高寒、高海拔地區(qū)。蕨麻的應(yīng)用歷史可追溯到1000多年以前,它不僅可以作為一種營養(yǎng)價值很高的滋補美食用于制成多種小食品、飲料和酒類等食用,還是一種具有特色的民族草藥,具有生津止渴,健脾益胃,補血等功效。蕨麻化學(xué)成分豐富,含有多糖、三萜及其苷類、黃酮(醇)、鞣質(zhì)、香豆素、酚酸等多種結(jié)構(gòu)類型的化合物。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),蕨麻具有抗氧化、抗衰老、抗炎、抗高脂血癥、保肝和免疫調(diào)節(jié)等生物活性。為了進一步地明確蕨麻的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),研究蕨麻的活性成分并進行質(zhì)量規(guī)范化研究,本課題組對蕨麻的甲醇提取部位進行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。通過各種現(xiàn)代色譜分離技術(shù),包括減壓硅膠柱色譜、中壓反相ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、半制備高效液相色譜、高壓快速制備色譜等手段,從蕨麻甲醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部位中,共分離得到19個單體化合物。根據(jù)1D-NMR、2D-NMR和MS等數(shù)據(jù),以及與文獻數(shù)據(jù)參照對比,鑒定了它們的結(jié)構(gòu)。其中新化合物2個,從本屬中首次發(fā)現(xiàn)10個,結(jié)果如下:crotonine(PL-1)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(PL-2)、野薔薇苷(PL-3)、刺梨苷(PL-4)、arjunetin(PL-5)、覆盆子酸(PL-6)、人參皂苷Rg_1(PL-7)、號角樹酸3-甲酯(PL-8)、2-氧代坡模酸(PL-9)、坡模酸(PL-10)、dehydrodigallic acid monomethyl ester(PL-11)、對羥基苯甲酸(PL-12)、沒食子酸(PL-13)、Dehydrodigallic acid dimethyl ester(PL-14)、(+)-環(huán)橄欖樹脂(PL-15)、(+)-橄欖樹脂素(PL-16)、(+)-環(huán)橄欖樹脂-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(PL-17)、3-methoxylonicerinol(PL-18)、(7α,8α,8'α)-4-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-4-羥基-2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3-羥甲基四氫呋喃(PL-19)。其中,化合物PL-1、PL-2、PL-6、PL-7、PL-8、PL-11、PL-14、PL-15、PL-16、PL-17為首次從委陵菜屬植物中分離得到的,化合物PL-18和PL-19為新化合物。研究資料顯示,野薔薇苷是蕨麻當中的指標性成分,具有抗氧化、增強細胞清除氧自由基的能力,可以改善線粒體功能,抑制細胞凋亡等。于是,本課題組通過高壓快速制備色譜,對蕨麻中的野薔薇苷進行了富集,為下一步藥理活性研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。順鉑(CDDP),是一個眾所周知的抗腫瘤藥物,在過去的幾十年當中已廣泛用于治療各種惡性腫瘤。然而,順鉑以劑量依賴性方式誘導(dǎo)產(chǎn)生的嚴重腎毒性也使其臨床應(yīng)用受到了限制。有研究發(fā)現(xiàn),順鉑誘導(dǎo)腎損傷過程中會產(chǎn)生過量的自由基和脂質(zhì)過氧化物,隨后激活多種促炎細胞因子發(fā)生反應(yīng),引起不可逆的腎損傷,提示氧化應(yīng)激和炎癥在順鉑產(chǎn)生腎毒性過程中發(fā)揮了十分關(guān)鍵的作用。因此,抗氧化劑可能成為預(yù)防和治療順鉑誘導(dǎo)腎毒性的潛在候選物。在藥理活性研究方面,本課題組選取了從蕨麻當中富集得到的野薔薇苷,考察它對順鉑誘導(dǎo)的腎損傷是否具有保護作用及其可能的作用機制。在體外實驗中,選取HEK-293 T人胚腎細胞作為研究對象,建立順鉑(100μM)誘導(dǎo)損傷模型。MTT結(jié)果顯示,野薔薇苷可以明顯減弱順鉑對HEK-293 T細胞的毒性,且其作用呈現(xiàn)出劑量依賴性關(guān)系。給予100μM順鉑處理24小時后,HEK-293 T細胞存活率降至59.9%,而給予25μM野薔薇苷的處理組,HEK-293 T細胞的存活率可以提高到78.06%(0.001P0.01);利用流式細胞儀檢測細胞內(nèi)ROS水平變化,實驗結(jié)果表明野薔薇苷(100μM)能夠顯著抑制順鉑(100μM)引起的HEK-293 T細胞內(nèi)ROS水平的升高,抑制率為32.58%,提示野薔薇苷拮抗順鉑誘導(dǎo)的細胞毒性可能與其清除氧化自由基能力有關(guān)。在動物實驗中,以SPF級Balb/c雄性小鼠為研究對象,建立順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷模型。通過血生化測定,發(fā)現(xiàn)給予野薔薇苷(12 mg·kg~(-1))可顯著降低順鉑(15 mg·kg~(-1))急性腎損傷模型小鼠血清中的尿素氮(Urea)、肌酐(Crea)、肌酸激酶(CK)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量;但小鼠腎臟組織的HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),順鉑模型組與正常組腎組織結(jié)構(gòu)相似,未發(fā)現(xiàn)較明顯的損傷。在此研究基礎(chǔ)上,本課題組又建立肉瘤細胞S180荷瘤Balb/c雄性小鼠模型,采用野薔薇苷聯(lián)合順鉑治療荷瘤小鼠,結(jié)果提示野薔薇苷(12 mg·kg~(-1))在拮抗順鉑腎臟毒性的同時,對其抗腫瘤作用沒有影響。本課題的研究成果為以后對蕨麻的進一步藥理學(xué)研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ),同時為開發(fā)蕨麻當中的皂苷類成分作為臨床治療癌癥的輔佐藥物提供了初步的實驗數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285

【參考文獻】

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本文編號：2632021