【摘要】：海帶(Laminaria japonica)和刺參(Stichopusjaponicus)是有重要的食用和藥用價(jià)值的海洋資源,多糖是海帶和刺參中一類主要的生物活性成分。本課題以從海帶中提取的巖藻聚糖硫酸酯F1、F2及從刺參中提取的多糖HS為研究對(duì)象,以RAW264.7巨噬細(xì)胞為靶細(xì)胞,探索了F1、F2、HS對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,主要研究?jī)?nèi)容如下:1、對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)活性物質(zhì)的影響采用MTT增殖實(shí)驗(yàn)研究了F1、F2、HS對(duì)細(xì)胞存活率的影響,結(jié)果表明:在166.7 μg/ml時(shí),F1、HS、F2對(duì)巨噬細(xì)胞增殖率的作用效果為:HS(31.9%)F2(23.1%)F1(20.7%)。采用吖啶橙熒光染色法檢測(cè)了F1、F2、HS對(duì)細(xì)胞中核酸代謝活性的影響,結(jié)果表明:在166.7μg/ml時(shí),F1 HS、F2對(duì)巨噬細(xì)胞核酸熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)效果為:HS(1.89)F1(1.85)F2(1.60)。采用溶菌酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)F1、F2、HS對(duì)分泌性溶菌酶活性的影響,結(jié)果表明:在166.7μg/ml時(shí),F1、HS、F2對(duì)巨噬細(xì)胞溶菌酶活性的增強(qiáng)效果為:HS(272.1 U/L)F1(267.7U/L)F2(235U/L)。采用中性紅法檢測(cè)了F1、F2、HS對(duì)細(xì)胞吞噬活性的影響,結(jié)果表明:在166.7 μg/ml時(shí),F1、HS、F2對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)的作用效果為:HS(1.89)F1(1.85)F2(1.60)。2、對(duì)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響采用ELISA法檢測(cè)了 F1、F2、HS對(duì)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在166.7 μg/ml時(shí),對(duì)巨噬細(xì)胞分泌IL-1β的增強(qiáng)效果為:HS(65.5 U/L)F1(59.1U/L)F2(56.4U/L);對(duì)巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的增強(qiáng)效果為:HS(351.4 U/L)F1(334.5 U/L)F2(320.5 U/L);對(duì)巨噬細(xì)胞分泌IL-12的增強(qiáng)效果為:HS(21.6U/L)F1(20.5U/L)F2(18.6U/L);對(duì)巨噬細(xì)胞分泌 IL-6 的增強(qiáng)效果為:HS(64.7 U/L)F1(63.6U/L)F2(60.3 U/L);對(duì)巨噬細(xì)胞分泌 iNOS 的增強(qiáng)效果為:HS(4.0 U/L)F1(3.8 U/L)F2(3.4 U/L)。3、對(duì)巨噬細(xì)胞中細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響采用RT-PCR法研究了F1、F2、HS對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-αmRNA及IL-6mRNA表達(dá)的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在166.7μg/ml時(shí),對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-αmRNA表達(dá)相對(duì)比例的增強(qiáng)效果為:HS(1.82)F1(1.75)F2(1.31),與ELISA檢測(cè)結(jié)果一致;對(duì)巨噬細(xì)胞IL-6mRNA表達(dá)相對(duì)比例的增強(qiáng)效果為:HS(2.1)F1(1.8)F2(1.7),與ELISA檢測(cè)結(jié)果一致。綜上所述,在166.7μg/ml,F1、HS、F2均可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)活性,且增強(qiáng)效果為:HSF1F2。雖然在166.7 μg/ml時(shí),F2對(duì)巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性的增強(qiáng)作用最小,但在500μg/ml時(shí),F2對(duì)巨噬細(xì)胞的促增殖作用明顯高于F1及HS。雖然實(shí)際血藥濃度無(wú)法達(dá)到500μg/ml,但以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為將F2繼續(xù)分離得到分子量更小但促增殖活性更高的多糖提供了可能。并為協(xié)同使用成本較低的幾種海帶巖藻聚糖硫酸酯后的免疫調(diào)節(jié)效果超過(guò)成本較高的刺參多糖提供了可能性。本課題對(duì)比研究了海帶巖藻聚糖硫酸酯(F1、F2)和刺參多糖(HS)對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用,為海帶巖藻聚糖硫酸酯和刺參多糖在免疫調(diào)節(jié)方面的新應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2611674