本文關鍵詞：NOX2調控的Complexin Ⅱ在缺血性中風后谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性中的作用及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的：谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最高的興奮性氨基酸,盡管缺血性腦損傷的病理生理機制至今尚未完全明確,有足夠的證據(jù)證明谷氨酸介導的興奮性神經(jīng)毒性參與了這一損傷過程。作為一種神經(jīng)遞質,生理情況下谷氨酸通過SNARE復合體介導的方式由突觸前膜釋放至突觸間隙,SNAREs (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor-attachment protein receptor,可溶性N-己基順丁烯二酰亞胺敏感因子結合蛋白)是由突觸囊泡膜蛋白(vesicle-associated membrane protein, VAMP)、突觸膜蛋白(soluble N-ethylmaleimide sensitive factor attachment protein-25, SNAP25)口突觸融合蛋白-1(Syntaxin-1)組成的多元復合體�，F(xiàn)已明確,突觸以鈣依賴性胞裂外排方式釋放神經(jīng)遞質依賴于SNARE復合體的裝配過程,而這種裝配過程又受其結合蛋白的影響,其中Complexinsl的作用非常重要。但在Complexins調控下SNARE復合體介導的神經(jīng)遞質釋放過程是否在缺血性腦損傷中發(fā)揮作用,目前國內外文獻尚未見報道。由于目前尚未發(fā)現(xiàn)針對Complexins的特異性阻斷劑,我們通過研究Complexins及其介導的興奮性神經(jīng)毒性機制與引起腦缺血再灌注損傷的其他病理生理機制之間的關系來尋找干預Complexins通路的有效治療措施。眾所周知,自由基介導的氧化應激途徑也是腦缺血再灌注損傷的重要病理生理機制,另有證據(jù)表明,在創(chuàng)傷性腦損傷模型中,抗氧化劑會逆轉Complexins的表達變化,據(jù)此我們推測在腦缺血再灌注損傷中,Comlexins-SNARE復合體介導的興奮性氨基酸谷氨酸釋放的機制有可能受氧化應激機制調控。方法：采用大腦中動脈阻塞法建立局灶性腦缺血及再灌注損傷模型,并通過細胞糖氧剝奪法建立腦皮層神經(jīng)細胞缺血及再灌注損傷模型,體內外分別應用基因敲低和RNA干擾等方法來研究SNARE復合體調控蛋白Complexins在缺血性腦損傷中的作用。通過行為學、形態(tài)學、分子生物學、高效液相熒光、免疫組織化學等方法,觀察腦缺血及再灌注損傷后Complexins的表達變化,并明確其對腦缺血再灌注損傷后SNARE復合體及谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性的影響。為了尋求對Complexins在缺血性腦損傷后作用的有效干預途徑,我們通過使用NOX2基因敲除動物以及體外RNA干擾等方法研究了缺血性腦損傷后Complexins介導的興奮性神經(jīng)毒性機制受NADPH氧化酶NOX2催化亞基介導的氧化應激反應的調控。結果：與假手術對照組相比,缺血腦組織皮層半暗帶中Complexin Ⅰ和Complexin Ⅱ的表達均顯著升高。由于Complexin Ⅱ主要定位于興奮性神經(jīng)突觸,對于興奮性氨基酸谷氨酸的釋放具有更為重要的作用,本研究繼而使用攜有靶向Complexin-Ⅱ shRNA的慢病毒進行體內外基因敲低,進一步明確了Complexin Ⅱ在缺血性腦損傷及SNARE復合體的裝配和谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性中的作用。體外實驗的結果也驗證了這一過程。進一步利用NOX2基因敲除動物以及體外RNA干擾等方法,我們發(fā)現(xiàn)NOX2基因缺失可以明顯減輕腦缺血再灌注損傷,并可以逆轉谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性及Complexin Ⅱ的表達。結論：本課題首次揭示了Complexins在缺血性腦損傷后谷氨酸介導的興奮性神經(jīng)毒性機制中的作用和分子生物學機制,有望為充實、完善缺血性腦損傷的病理生理學機制提供新的內容,并首次證明了該作用受NADPH氧化酶NOX2介導的氧化應激通路所調控,從而為臨床防治缺血性腦血管病提供新的靶點和思路,具有重要的理論意義和實際應用價值。
【關鍵詞】：Complexins SNARE復合體 谷氨酸 腦缺血再灌注損傷 NADPH氧化酶
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號說明11-13
• 前言13-17
• 實驗材料17-24
• 一、實驗動物17
• 二、實驗藥品和試劑17-19
• 三、藥品及試劑的配制方法19-22
• 四、基本儀器設備22-24
• 實驗方法24-36
• 一、腦缺血再灌注損傷模型的制備24-26
• 二、實驗步驟和觀察指標26-34
• 三、統(tǒng)計學處理34-36
• 實驗結果36-39
• 討論39-43
• 結論43-44
• 附錄44-65
• 參考文獻65-68
• 致謝68-69
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文69-70
• 學位論文評閱及答辯情況表70

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  本文關鍵詞：NOX2調控的Complexin Ⅱ在缺血性中風后谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性中的作用及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：458482