本文關(guān)鍵詞：小菜蛾抗菌肽的分離純化及PLGA納米載體給藥，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：小菜蛾抗菌肽是一種相對(duì)分子質(zhì)量為4500的α螺旋形的陽(yáng)離子抗菌肽,實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),CA具有較好的抗肝細(xì)胞癌活性,可能的機(jī)制是肝癌細(xì)胞因?yàn)榱字＝z氨酸,O型糖基化粘蛋白等負(fù)離子的過(guò)高表達(dá)導(dǎo)致肝癌細(xì)胞膜帶有負(fù)電荷,CA能特異性與肝癌細(xì)胞膜結(jié)合,通過(guò)滲透作用和蛋白調(diào)節(jié)作用使細(xì)胞膜裂解和線(xiàn)粒體腫脹,從而導(dǎo)致細(xì)胞色素C釋放和細(xì)胞的凋亡。CA的抗肝腫瘤活性顯示出極好的高效低毒性。但CA易受溫度pH等外界因素的影響而變性失活,也能發(fā)生自身聚集,或者與其他粒子無(wú)法逆轉(zhuǎn)的結(jié)合而失去生物活性,所以其半衰期特別短,另外CA在小菜蛾幼蟲(chóng)體內(nèi)的含量極低,提取純化困難,兩方面的因素極大的限制了CA的臨床應(yīng)用。本課題組擬用PLGA作為載體材料制備出CA的PLGA納米粒,一方面解決CA在體內(nèi)外不穩(wěn)定性問(wèn)題,提高CA在體內(nèi)的半衰期。另一方面利用制備出的納米粒本身大小的特點(diǎn),實(shí)現(xiàn)納米粒的被動(dòng)靶向,增強(qiáng)CA的抗肝腫瘤效果。本文以課題已有的CA提取純化工藝為基礎(chǔ),對(duì)提取純化工藝進(jìn)行優(yōu)化。以降低純化成本,提高純化效率為目的,增加預(yù)純化處理過(guò)程,并對(duì)預(yù)純化中的重要工藝參數(shù)進(jìn)行了正交優(yōu)化。結(jié)果顯示,經(jīng)預(yù)純化處理后,純化周期大大縮短和純化工藝中所用的樹(shù)脂的量也大大減少,并且提高了單次提取物的處理量。經(jīng)預(yù)純化處理后,提取物中總多肽含量40%,且CA含量占總多肽的60%以上�？垢文[瘤活性研究表明,該工藝條件對(duì)小菜蛾抗菌肽的生物活性影響較小。同時(shí)發(fā)現(xiàn),小菜蛾中有一類(lèi)具有抗肝癌活性的多肽,其中主要活性成分為小菜蛾抗菌肽CA。在預(yù)純化工藝中,PBS溶液的使用,不僅避免了有機(jī)溶劑的殘留問(wèn)題,而且最大限度的降低了工藝成本,為抗菌肽的制劑研究和工藝產(chǎn)業(yè)化提供參考。納米給藥系統(tǒng)具有降低藥物毒性和刺激性、延緩藥物降解、延長(zhǎng)藥物釋放時(shí)間、靶向釋放等優(yōu)點(diǎn),將藥物包封于其中,可實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)藥物釋放速率,改變藥物在體內(nèi)的分布、提高藥物生物利用度等目的,具有巨大的應(yīng)用前景。因此,本文選用PLGA為載體材料,CA為模型藥物,以改良后的S/W/O/W復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法結(jié)合高壓勻質(zhì)法制備小菜蛾抗菌肽PLGA納米粒(CA-PLGA-NPs),通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和重要影響因素的正交試驗(yàn),以2、6、14 d的累積釋放率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)CA-PLGA-NPs的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化和篩選,并對(duì)其粒徑、多分散指數(shù)(PDI)、電位等理化性質(zhì)進(jìn)行表征,同時(shí)用透射電鏡(TEM)和掃描電鏡(SEM)觀察CA-PLGA-NPs的基本形態(tài),并對(duì)其進(jìn)行體外釋藥行為考察。理化性質(zhì)研究結(jié)果表明,CA-PLGA-NPs呈球形或類(lèi)球形,粒徑、PDI、載藥量、包封率分別為(358.76±22.51)nm、0.1681±0.0122、(10.50±0.28)%、(60.92±1.58)%。體外釋放研究表明,CA-PLGA-NPs緩釋性能良好,突釋現(xiàn)象不明顯,2-10d內(nèi)達(dá)到釋藥穩(wěn)定期,同時(shí)通過(guò)方程擬合發(fā)現(xiàn),CA-PLGA-NPs與weibull方程擬合效果最好。本文以CA抗HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的特性作為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用對(duì)比實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)CA-PLGA-NPs的制備工藝、載體材料和降解產(chǎn)物等參數(shù)對(duì)CA抗癌活性的影響。實(shí)驗(yàn)中使用不同時(shí)間段納米粒的溶出液作為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用原料藥,結(jié)果表明,載體材料及其降解產(chǎn)物對(duì)HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。(CA-PLGA-NPs的制備工藝、載體材料及其降解產(chǎn)物等參數(shù)對(duì)CA活性的影響不明顯。
【關(guān)鍵詞】：小菜蛾抗菌肽 CA-PLGA-NPs 體外釋放 抗HepG2細(xì)胞活化
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• ABSTRACT4-9
• 引言9-18
• 第一章 CA的提取純化工藝研究18-29
• 1 儀器與材料18
• 2 方法18-28
• 2.1 提取純化工藝研究18-20
• 2.2 小菜蛾總多肽含量測(cè)定20-22
• 2.3 小菜蛾抗菌肽含量測(cè)定方法的建立22-25
• 2.4 CA抗肝腫瘤細(xì)胞活性的研究25
• 2.5 提取分析與預(yù)純化25-28
• 3 本章小結(jié)28-29
• 第二章 CA-PLGA-NPs制備工藝的研究29-44
• 1 儀器與材料29-30
• 2 方法30-38
• 2.1 CA-PLGA-NPs的制備30-31
• 2.2 CA-PLGA-NPs粒徑和Zeta電位的測(cè)定31
• 2.3 CA-PLGA-NPs載藥量和包封率的測(cè)定31-32
• 2.4 對(duì)照品溶液的制備32
• 2.5 供試品溶液的制備32
• 2.6 陰性對(duì)照溶液的制備32
• 2.7 專(zhuān)屬性考察32-33
• 2.8 CA-PLGA-NPs的形態(tài)觀察33
• 2.9 CA-PLGA-NPs的體外釋放方法33
• 2.10 CA-PLGA-NPs的制備工藝因素考察33-38
• 2.11 CA-PLGA-NPs體外釋藥動(dòng)力學(xué)38
• 2.12 CA-PLGA-NPs穩(wěn)定性考察38
• 3 結(jié)果38-42
• 3.1 正交試驗(yàn)的優(yōu)化結(jié)果38-39
• 3.2 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果39
• 3.3 CA-PLGA-NPs的粒徑和zeta電位測(cè)定結(jié)果39
• 3.4 CA-PLGA-NPs的包封率、載藥量和體外釋放39-40
• 3.5 CA-PLGA-NPs體外釋放動(dòng)力學(xué)40-41
• 3.6 CA-PLGA-NPs的形態(tài)觀察41-42
• 3.7 CA-PLGA-NPs的穩(wěn)定性考察42
• 4 本章小結(jié)42-44
• 第三章 CA-PLGA-NPs的體外抗HepG2細(xì)胞活性研究44-48
• 1 儀器與材料44
• 2 方法44-46
• 2.1 實(shí)驗(yàn)用藥的制備44
• 2.2 CA-PLGA-NPs抗HepG2細(xì)胞活性的研究44-46
• 3 本章小結(jié)46-48
• 結(jié)論與討論48-50
• 結(jié)語(yǔ)展望50-51
• 致謝51-52
• 參考文獻(xiàn)52-60
• 在讀期間公開(kāi)發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專(zhuān)著及科研成果60-61

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