本文關(guān)鍵詞：幾種植物活性成分對(duì)β-乳球蛋白、胰蛋白酶的光譜性質(zhì)及構(gòu)象的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：植物活性成分如萜類、黃酮類、香豆素類、生物堿類等具有的生物活性能夠?qū)Ω鞣N生物起生理促進(jìn)作用,因此受到越來越多的關(guān)注。β-乳球蛋白是牛乳中重要的乳清蛋白,也是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的重要成員,能結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)疏水性小分子。胰蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶的一種,能夠高度專一的水解精氨酸和賴氨酸的羧基形成的肽鍵。胰蛋白酶在腸道環(huán)境中被其他腸激酶激活,同時(shí)胰蛋白酶也可以激活其他酶原。本論文采用多種光譜學(xué)技術(shù)包括紫外 可見吸收光譜法、熒光光譜法、圓二色譜法(CD)以及紅外光譜法(FT-IR)等并結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)和分子模擬手段,從分子水平上研究瑞香素、蛇床子素、補(bǔ)骨脂素(PSO)、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素(8-MOP)等4種植物活性成分與β-乳球蛋白、胰蛋白酶的結(jié)合性質(zhì)及其對(duì)β-乳球蛋白、胰蛋白酶構(gòu)象的影響,為闡明藥物小分子在體內(nèi)的吸收、代謝以及高活性的藥物小分子的設(shè)計(jì)與應(yīng)用開發(fā)提供有價(jià)值的參考,同時(shí)對(duì)了解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能的變化也具有重要的作用。本文主要內(nèi)容如下:1.簡要介紹了β-乳球蛋白和胰蛋白酶的結(jié)構(gòu)、功能及生理特性,同時(shí)概述了小分子與蛋白質(zhì)等生物大分子相互作用的主要方法及現(xiàn)狀,為本研究的開展提供了理論支持。2.在模擬生理?xiàng)l件下(pH 7.4),建立化學(xué)計(jì)量學(xué)多元曲線分辨 交替最小二乘法(MCR ALS)和紫外、熒光光譜學(xué)方法以及分子模擬的聯(lián)用的方法體系,探究了瑞香素、蛇床子素與β-乳球蛋白(BLG)的結(jié)合特性。熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,瑞香素、蛇床子素對(duì)BLG的熒光猝滅為靜態(tài)猝滅過程,且與BLG有單一的結(jié)合位點(diǎn)。熵變(ΔS°)和焓變(ΔH°)均為正值,表明瑞香素與BLG的結(jié)合主要由疏水作用驅(qū)動(dòng)。ΔS°和ΔH°都為負(fù)值,表明氫鍵和范德華力是蛇床子素與BLG的結(jié)合主要作用力,兩者之間結(jié)合距離為4.05 nm。最優(yōu)的分子對(duì)接結(jié)果顯示,瑞香素、蛇床子素均結(jié)合于BLG的疏水中央空腔,直觀地展現(xiàn)了瑞香素、蛇床子素與BLG復(fù)合物的立體結(jié)合姿態(tài)。3.建立了同步熒光光譜、圓二色譜聯(lián)合傅里葉紅外光譜技術(shù)體系,研究瑞香素、蛇床子素與BLG相互作用及2種活性成分對(duì)BLG構(gòu)象的影響。同步熒光光譜實(shí)驗(yàn)表明,瑞香素的存在影響了BLG色氨酸殘基的微環(huán)境,使得色氨酸所處微環(huán)境的疏水性降低,而蛇床子素的加入使酪氨酸殘基所處微環(huán)境極性降低,疏水性增加。隨后的圓二色譜和紅外光譜研究結(jié)果表明,瑞香素、蛇床子素的加入改變了BLG的構(gòu)象,使BLG二級(jí)結(jié)構(gòu)的含量發(fā)生變化,而且瑞香素的結(jié)合導(dǎo)致BLG的α-螺旋含量增加程度較蛇床子素大,BLG的結(jié)構(gòu)變得更加緊密。4.聯(lián)合應(yīng)用MCR-ALS、紫外-可見吸收光譜、熒光光譜和分子模擬等手段,研究了兩種結(jié)構(gòu)相似的香豆素類活性分子PSO、8-MOP對(duì)胰蛋白酶性質(zhì)的影響。結(jié)果表明,PSO、8-MOP對(duì)胰蛋白酶熒光猝滅均為生成復(fù)合物的靜態(tài)猝滅,疏水作用是PSO、8-MOP與胰蛋白酶相互作用的主要驅(qū)動(dòng)力,且它們?cè)谝鹊鞍酌干隙贾挥幸粋�(gè)結(jié)合位點(diǎn)。分子模擬和酶活測定結(jié)果表明,PSO、8-MOP主要結(jié)合在胰蛋白酶S1疏水空腔附近,接近催化三聯(lián)體(His57,Asp102和Ser195),從而誘導(dǎo)胰蛋白酶的結(jié)構(gòu)發(fā)生了部分改變,并導(dǎo)致酶活性降低。模擬胃腸道消化分析顯示,人工模擬胃液對(duì)PSO和8-MOP的損傷能力較強(qiáng)。5.在模擬生理酸度條件下,應(yīng)用三維熒光光譜、圓二色譜以及傅立葉變換紅外光譜研究了PSO、8-MOP與胰蛋白酶的相互作用及二者對(duì)胰蛋白酶構(gòu)象的影響。發(fā)現(xiàn)PSO/8-MOP與胰蛋白酶的結(jié)合,導(dǎo)致胰蛋白酶多肽鏈重排和肽鏈部分伸展,引起二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生不同程度的改變,即α-螺旋和β-折疊含量降低,β-轉(zhuǎn)角及無規(guī)則卷曲含量有所增加。
【關(guān)鍵詞】：瑞香素 蛇床子素 補(bǔ)骨脂素 β-乳球蛋白 胰蛋白酶 多元曲線分辨-交替最小二乘法
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R915
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 縮寫符號(hào)與代號(hào)11-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 引言12
• 1.2 蛋白質(zhì)的基本信息12-15
• 1.2.1 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)13-14
• 1.2.2 蛋白質(zhì)的功能14
• 1.2.3 β 乳球蛋白的結(jié)構(gòu)與功能14-15
• 1.2.4 胰蛋白酶的結(jié)構(gòu)與功能15
• 1.3 小分子與蛋白質(zhì)相互作用研究手段15-19
• 1.3.1 光譜學(xué)方法16-18
• 1.3.2 電化學(xué)方法18
• 1.3.3 化學(xué)計(jì)量學(xué)方法18-19
• 1.3.4 核磁共振技術(shù)19
• 1.3.5 分子模擬(Molecular modeling)19
• 1.4 選題意義與研究內(nèi)容19-22
• 1.4.1 選題意義19-20
• 1.4.2 研究內(nèi)容20-22
• 第2章 瑞香素、蛇床子素與β-乳球蛋白結(jié)合性質(zhì)研究22-35
• 2.1 引言22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分22-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料及軟件22-23
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 2.2.3 化學(xué)計(jì)量學(xué)方法：多元曲線分辨?交替最小二乘法(MCR?ALS)24-25
• 2.3 結(jié)果與討論25-33
• 2.3.1 瑞香素、補(bǔ)骨脂素與β-乳球蛋白的相互作用的紫外光譜25-26
• 2.3.2 MCR?ALS解析紫外光譜數(shù)據(jù)矩陣26-28
• 2.3.3 熒光猝滅機(jī)制分析28-30
• 2.3.4 熱力學(xué)參數(shù)的確定30-31
• 2.3.5 非輻射能量轉(zhuǎn)移31-32
• 2.3.6 分子模擬32-33
• 2.4 本章小結(jié)33-35
• 第3章 瑞香素、蛇床子素對(duì)β-乳球蛋白構(gòu)象的影響35-41
• 3.1 引言35
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分35-36
• 3.2.1 儀器與試劑35-36
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法36
• 3.3 結(jié)果與討論36-40
• 3.3.1 瑞香素/蛇床子素對(duì)β-乳球蛋白同步熒光光譜的影響36-38
• 3.3.2 瑞香素/蛇床子素對(duì)β-乳球蛋白圓二色譜的影響38-39
• 3.3.3 瑞香素/蛇床子素對(duì)β-乳球蛋白紅外光譜的影響39-40
• 3.4 本章小結(jié)40-41
• 第4章 補(bǔ)骨脂素、8?甲氧基補(bǔ)骨脂素與胰蛋白酶結(jié)合性質(zhì)的研究41-55
• 4.1 引言41-42
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分42-44
• 4.2.1 主要儀器與試劑42
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法42-44
• 4.3 結(jié)果與討論44-53
• 4.3.1 補(bǔ)骨脂素/8?甲氧基補(bǔ)骨脂素與胰蛋白酶相互作用的紫外吸收光譜44-45
• 4.3.2 MCR?ALS解析紫外光譜數(shù)據(jù)矩陣45-47
• 4.3.3 補(bǔ)骨脂素/8?甲氧基補(bǔ)骨脂素對(duì)胰蛋白酶熒光光譜的影響47-49
• 4.3.4 結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)49
• 4.3.5 熱力學(xué)參數(shù)與作用力49-50
• 4.3.6 結(jié)合位點(diǎn)的確定50-51
• 4.3.7 補(bǔ)骨脂素/8?甲氧基補(bǔ)骨脂素對(duì)胰蛋白酶活性的影響51-52
• 4.3.8 補(bǔ)骨脂素/8?甲氧基補(bǔ)骨脂素在模擬人體胃腸道中的穩(wěn)定性52-53
• 4.4 本章小結(jié)53-55
• 第5章 補(bǔ)骨脂素、8?甲氧基補(bǔ)骨脂素對(duì)胰蛋白酶構(gòu)象的影響55-63
• 5.1 引言55
• 5.2 實(shí)驗(yàn)部分55-56
• 5.2.1 儀器與試劑55-56
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法56
• 5.3 結(jié)果與討論56-61
• 5.3.1 三維熒光光譜分析56-59
• 5.3.2 圓二色譜分析59-60
• 5.3.3 傅里葉紅外光譜分析60-61
• 5.4 本章小結(jié)61-63
• 第6章 結(jié)論與展望63-65
• 6.1 結(jié)論63-64
• 6.2 展望64-65
• 致謝65-66
• 參考文獻(xiàn)66-74
• 攻讀碩士期間的研究成果74

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫國慶;康小紅;劉衛(wèi)星;;利用毛細(xì)管電泳法測定乳品中β-乳球蛋白含量的研究[J];中國食品衛(wèi)生雜志;2010年05期

2 張睿,袁敏偉,史炳照;從新鮮牛奶中提取β-乳球蛋白[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;1999年02期

3 李欣;文學(xué)方;武涌;陳紅兵;;食物過敏原水牛乳β-乳球蛋白的交叉反應(yīng)研究[J];食品工業(yè)科技;2010年08期

4 姜嫣嫣,陳潔,洪鳴凰,裴元英;聚乙二醇共價(jià)修飾β-乳球蛋白的合成和分離純化方法研究[J];中國藥學(xué)雜志;2005年14期

5 李永濤;張?zhí)m威;孔保華;;消除乳清蛋白中β-乳球蛋白致敏性的研究進(jìn)展[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年07期

6 鄭全玲;李艾黎;戚曉熙;郜雪飛;季曉梅;;不同時(shí)段嗜酸乳桿菌干預(yù)對(duì)β-乳球蛋白過敏緩解的作用[J];中國乳品工業(yè);2014年03期

7 盧婕妤;付躍佳;張玲;劉寧;;β-乳球蛋白共軛亞油酸復(fù)合物對(duì)LoVo細(xì)胞凋亡的影響[J];營養(yǎng)學(xué)報(bào);2014年04期

8 徐晉予;劉寧寧;夏薇;楊錚;許美玉;;低聚半乳糖糖基化對(duì)β-乳球蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生IgE的抑制作用[J];食品科技;2011年02期

9 李建杰;陳大瑋;閆浩;楊成彬;鄧?yán)?劉杰;劉志剛;黃鐘;;牛奶主要過敏原β-乳球蛋白的一基因片段的克隆、表達(dá)、純化及抗原性鑒定[J];中國食品衛(wèi)生雜志;2011年02期

10 李艾黎;孟祥晨;徐漸;邵紅;馬冬雪;;熱致死發(fā)酵乳桿菌對(duì)牛乳β-乳球蛋白過敏小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J];中國免疫學(xué)雜志;2012年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 金素鈺;鄭玉才;馬嵬;王永;;反相高效液相色譜法檢測綿羊β-乳球蛋白遺傳變異體[A];第十次全國畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 崔趁趁;TALEN介導(dǎo)的β-乳球蛋白基因敲除奶山羊的生產(chǎn)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 鐘俊楨;DHPM脅迫β-乳球蛋白構(gòu)象變化與過敏性關(guān)系研究[D];南昌大學(xué);2012年

3 吳序櫟;牛乳β-乳球蛋白的檢測及茶多酚對(duì)其免疫反應(yīng)性影響的研究[D];華南理工大學(xué);2012年

4 李欣;水牛乳中β-乳球蛋白的IgG結(jié)合表位的定位研究[D];南昌大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 侯麗英;β-乳球蛋白抗原表位譜的解析及關(guān)鍵抗原表位串聯(lián)體的重組表達(dá)與鑒定[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

2 徐洪軍;β-乳球蛋白致敏表位的適配體定位、酶解及脫敏研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 吳小莉;β-乳球蛋白纖維的凝膠及增稠特性研究[D];湖北工業(yè)大學(xué);2016年

4 劉昊雨;β-乳球蛋白的制備及其亞硒酸化物的結(jié)構(gòu)研究[D];天津科技大學(xué);2015年

5 徐曉明;亞硒酸化β-乳球蛋白抗衰老活性的研究[D];天津科技大學(xué);2015年

6 鄒麗;牛乳過敏原β-乳球蛋白制備、中試生產(chǎn)設(shè)計(jì)及其致敏性的細(xì)胞學(xué)評(píng)估[D];南昌大學(xué);2016年

7 劉英英;幾種植物活性成分對(duì)β-乳球蛋白、胰蛋白酶的光譜性質(zhì)及構(gòu)象的影響[D];南昌大學(xué);2016年

8 付敏;瞬變高壓與酶對(duì)鮮牛乳中β-乳球蛋白變性的影響[D];合肥工業(yè)大學(xué);2009年

9 姜俊;具有降低β-乳球蛋白抗原性乳酸菌篩選及其特性研究[D];江南大學(xué);2009年

10 吳鳳;β-乳球蛋白的分離提純及其酶源降膽固醇活性肽的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：幾種植物活性成分對(duì)β-乳球蛋白、胰蛋白酶的光譜性質(zhì)及構(gòu)象的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：440445