本文關鍵詞：檳榔堿對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 采用不同濃度的檳榔堿處理3T3-L1前脂肪細胞，觀察它對脂肪細胞分化的影響，并初步探討其機制。 方法 (1)采用MTT(噻唑藍, Methylthiazolyl tetrazolium)法檢測檳榔堿對3T3-L1前脂肪細胞的細胞毒性作用。 (2)用傳統(tǒng)的“雞尾酒”法(即含胰島素、地塞米松和異丁基甲基黃嘌呤(isobutyl methyl xanthine, IBMX)的混合誘導劑)將3T3-L1前脂肪細胞誘導分化，在誘導分化的第0天用或不用100μmol/L檳榔堿處理72h，于誘導分化的第9~11天，用油紅O染色，觀察拍照，并用異丙醇提取脂質吸附的油紅O染料，測定OD值以定量脂質含量。 (3)在誘導分化第3天和第11天，提取細胞的總RNA，RT-PCR檢測3T3-L1前脂肪細胞分化相關基因表達，包括誘導分化早期基因Pref-1(前脂肪細胞因子,preadipocyte factor1,)、C/EBPα和C/EBPβ(CCAAT增強子結合蛋白α和β, CCAAT-enhancer binding protein-alpha and beta)，脂肪生成相關基因Fas (脂肪酸合成酶,fatty acid synthase,)、adrp(脂肪分化相關蛋白, adipose differentiation-related protein/adipophilin)和plin (圍脂滴蛋白, perilipin)，誘導分化成熟標志基因PPARγ2(過氧化物酶體增殖物激活受體, peroxisome proliferator-activated receptor gamma2)、Glut4(葡萄糖轉運體4, glucose transporter type4)。 結果 (1)檳榔堿對3T3-L1前脂肪細胞具有一定的細胞毒性。在0-800μmol/L濃度范圍內細胞相對存活率隨濃度增大而明顯降低，具有濃度依賴性。100μmol/L檳榔堿處理3T3-L1前脂肪細胞24h、48h、72h和96h，細胞存活率之間無明顯差異，約為70%。當檳榔堿濃度≥200μmol/L時，檳榔堿處理48h、72h、96h細胞存活率均顯著低于24h，均小于20%，，而48h、72h和96h之間的細胞活性無顯著性差異。 (2)油紅O染色顯示檳榔堿處理組(Are,100μmol/L Arecoline)中含有“戒環(huán)”樣脂滴成熟脂肪細胞的數(shù)目明顯少于對照組(Control,0μmol/LArecoline)。脂肪細胞脂質含量定量結果顯示：檳榔堿處理組脂質含量較對照組減少24.2%。 (3)100μmol/L檳榔堿對前脂肪細胞因子Pref-1基因表達無顯著影響，但可顯著降低誘導分化第3天和11天的C/EBPα和C/EBPβ基因表達。在誘導分化第3天和第11天，與對照組相比，檳榔堿處理組C/EBPα基因表達水平分別降低10.7%和7.6%；而C/EBPβ基因表達水平分別降低13.8%和40.5%。 (4)100μmol/L檳榔堿不影響脂肪酸合成酶基因Fas的表達，但顯著降低Adrp和plin的mRNA水平。在誘導分化第3天和第11天，與對照組相比，檳榔堿處理組Adrp基因表達水平分別下降17.8%和5.1%；而plin基因表達水平分別下降9.2%和15.0%。 (5)隨著3T3-L1前脂肪細胞分化成熟，脂肪細胞分化成熟基因PPARγ2和Glut4的表達水平顯著升高，但100μmol/L檳榔堿可顯著降低PPARγ2和Glut4的表達。在誘導分化第3天和第11天，與對照組相比，檳榔堿處理組PPARγ2的基因表達分別減少21.9%和26.2%；而Glut4基因表達分別減少12.2%和43.9%。 結論 檳榔堿可顯著抑制3T3-L1前脂肪細胞的分化成熟，其機制可能與其下調C/EBPα基因和C/EBPβ基因、 Adrp基因和plin基因、PPARγ2基因和Glut4基因的表達有關。
【關鍵詞】：檳榔堿 3T3-L1前脂肪細胞 分化
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R96
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-26
• 1. 細胞16
• 2. 試劑16
• 3. 實驗儀器與設備16-17
• 4. 試劑配制17-19
• 5. 實驗方法19-25
• 6. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析25-26
• 結果26-35
• 1. 3T3-L1 前脂肪細胞分化26-27
• 2. 檳榔堿對 3T3-L1 前脂肪細胞的毒性作用27-28
• 3. 檳榔堿對脂質形成的影響28-30
• 4. 檳榔堿對 3T3-L1 前脂肪細胞分化相關基因表達的影響30-35
• 4.1 總 RNA 濃度和質量分析30-31
• 4.2 檳榔堿對分化早期基因(Pref-1、C/EBPα和 C/EBPβ基因)表達的影響31-32
• 4.3 檳榔堿對脂肪生成基因(Fas、Adrp 和 plin 基因)表達的影響32-34
• 4.4 檳榔堿對脂肪分化成熟基因(PPARγ2 和 Glut4 基因)表達的影響34-35
• 討論35-39
• 1. 檳榔堿濃度的選擇36
• 2. 檳榔堿對 3T3-L1 前脂肪細胞分化的影響36-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-46
• 綜述46-52
• 參考文獻50-52
• 附錄52-53
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：檳榔堿對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：440428