本文關(guān)鍵詞：基于嘌呤堿基電化學(xué)信號(hào)的抗癌藥物篩選方法的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究人乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞在黃嘌呤氧化酶(XO)作用前后的電化學(xué)行為,建立酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng),然后利用該體系完成環(huán)磷酰胺作用下細(xì)胞中嘌呤堿基代謝變化的測(cè)試,為酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用于抗癌藥物篩選實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。方法本文以MCF-7細(xì)胞作為細(xì)胞模型,以離子液體與多壁碳納米管復(fù)合修飾電極(MWNTs-IL/GCE)作為工作電極,采用線性掃描伏安法(LSV)研究了嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品和MCF-7細(xì)胞在XO作用前后的電化學(xué)行為,建立了四種嘌呤濃度與信號(hào)強(qiáng)度之間的線性回歸曲線,采用高效液相色譜法對(duì)MCF-7細(xì)胞的電化學(xué)信號(hào)歸屬進(jìn)行了驗(yàn)證,基于此建立酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng);采用酶催化電化學(xué)方法和常規(guī)MTT法對(duì)照研究藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞活性的影響,來驗(yàn)證酶催化電化學(xué)方法的準(zhǔn)確性與可行性。結(jié)果原位裂解后的MCF-7細(xì)胞在MWNTs-IL/GCE電極上產(chǎn)生兩個(gè)敏感的電化學(xué)信號(hào),分別歸屬為黃嘌呤(X)和鳥嘌呤(G)的氧化(0.623 V),以及次黃嘌呤(HX)和腺嘌呤(A)的氧化(0.953 V);檢測(cè)最佳條件:pH值7.4,50℃恒溫水浴裂解30 min;然后在XO的作用下,X和HX將完全被催化成尿酸(UA)和過氧化氫(H2O2),剩余信號(hào)分別為G和A,基于原信號(hào)與剩余信號(hào)可以計(jì)算出X和HX的信號(hào)強(qiáng)度,進(jìn)而根據(jù)四種嘌呤濃度與信號(hào)強(qiáng)度之間的線性回歸曲線可以計(jì)算出每種嘌呤的濃度,從而建立了酶催化電化學(xué)檢測(cè)體系;然后利用該體系完成了抗癌藥物篩選實(shí)驗(yàn)。在進(jìn)行給藥實(shí)驗(yàn)時(shí),通過對(duì)給藥組和對(duì)照組的對(duì)比,明顯的發(fā)現(xiàn)給藥組的電化學(xué)信號(hào)減弱,同時(shí)通過與MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比,證實(shí)了電化學(xué)方法的準(zhǔn)確性。結(jié)論本課題采用電化學(xué)法檢測(cè)到MCF-7細(xì)胞有兩個(gè)明顯信號(hào)峰,以這兩個(gè)信號(hào)峰為指標(biāo),通過引入黃嘌呤氧化酶建立了酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng),通過這個(gè)酶催化電化學(xué)檢測(cè)方法,能夠同時(shí)獲得MCF-7細(xì)胞中四種嘌呤堿基濃度。采用酶催化電化學(xué)方法研究藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞活性影響的結(jié)果與常規(guī)MTT法所得到結(jié)果一致,說明酶催化電化學(xué)方法可以應(yīng)用到與嘌呤代謝相關(guān)的生化檢測(cè)、特別是抗癌藥物篩選實(shí)驗(yàn)中。
【關(guān)鍵詞】：MCF-7 黃嘌呤氧化酶 環(huán)磷酰胺 離子液體多壁碳修飾玻碳電極 細(xì)胞活性
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 第1章 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1.1 細(xì)胞電化學(xué)11-13
• 1.1.1 細(xì)胞電化學(xué)在抗癌領(lǐng)域的發(fā)展11-12
• 1.1.2 生物傳感器的的發(fā)展與應(yīng)用12-13
• 1.2 復(fù)合修飾電極13-16
• 1.2.1 碳納米管的發(fā)展與應(yīng)用13-14
• 1.2.2 離子液體的發(fā)展與應(yīng)用14-15
• 1.2.3 碳納米管-離子液體復(fù)合修飾電極的發(fā)展與應(yīng)用15-16
• 1.3 黃嘌呤氧化酶16-17
• 1.3.1 黃嘌呤氧化酶的研究歷史和進(jìn)展16
• 1.3.2 黃嘌呤氧化酶的一些特性16
• 1.3.3 黃嘌呤氧化酶的生理功能16-17
• 1.4 環(huán)磷酰胺的抗癌作用17-19
• 第2章 酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的構(gòu)建19-34
• 2.1 儀器與材料19-20
• 2.1.1 儀器19
• 2.1.2 試劑與材料19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制20
• 2.2.2 復(fù)合修飾電極的制備20-21
• 2.2.3 微反應(yīng)電極系統(tǒng)的建立21
• 2.2.4 測(cè)定方法21-22
• 2.3 結(jié)果與討論22-33
• 2.3.1 高效液相法對(duì)細(xì)胞內(nèi)電活性物質(zhì)的確定22-24
• 2.3.2 微反應(yīng)電極系統(tǒng)與正常電極系統(tǒng)對(duì)比24-25
• 2.3.3 黃嘌呤和次黃嘌呤濃度與峰面積之間的關(guān)系25-28
• 2.3.4 腺嘌呤和鳥嘌呤濃度與峰面積之間的關(guān)系28-31
• 2.3.5 酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的構(gòu)建31-32
• 2.3.6 修飾電極對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響32-33
• 2.4 小結(jié)33-34
• 第3章 酶催化電化學(xué)法對(duì)抗癌藥物篩選的研究34-48
• 3.1 儀器與材料34-36
• 3.1.1 儀器34-35
• 3.1.2 試劑與材料35-36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法36-40
• 3.2.1 玻璃儀器的預(yù)處理36
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備溶液的配制36-37
• 3.2.3 細(xì)胞的培養(yǎng)37-38
• 3.2.4 電化學(xué)法對(duì)細(xì)胞的檢測(cè)38-39
• 3.2.5 環(huán)磷酰胺對(duì)細(xì)胞的抑制作用39
• 3.2.6 MTT的檢測(cè)39-40
• 3.3 結(jié)果與討論40-47
• 3.3.1 MCF-7 細(xì)胞的培養(yǎng)40
• 3.3.2 黃嘌呤氧化酶對(duì)四種嘌呤的作用40-42
• 3.3.3 黃嘌呤氧化酶對(duì)MCF-7 細(xì)胞中嘌呤的催化42-43
• 3.3.4 腺嘌呤檢出限的測(cè)定43-44
• 3.3.5 細(xì)胞加藥實(shí)驗(yàn)44-45
• 3.3.6 電化學(xué)法與MTT法對(duì)比45-46
• 3.3.7 細(xì)胞活性的影響因素46-47
• 3.3.8 黃嘌呤氧化酶對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響47
• 3.4 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-50
• 4.1 酶催化電化學(xué)檢測(cè)方法的建立48-49
• 4.2 酶催化電化學(xué)法對(duì)抗癌藥物篩選的研究49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 致謝56-57
• 英文縮寫57-58
• 附圖58-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)成果62

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  本文關(guān)鍵詞：基于嘌呤堿基電化學(xué)信號(hào)的抗癌藥物篩選方法的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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