本文關鍵詞：吡格列酮對高糖誘導下心肌細胞的抗炎作用及其機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 用高糖刺激乳鼠心肌細胞模擬糖尿病誘導的心肌細胞損傷，給予吡格列酮處理觀察高糖對心肌細胞炎癥因子的影響，以p38MAPK通路的激化情況和NF-κB活性的影響。 方法 1.乳鼠心肌細胞的分離與培養(yǎng)以及實驗分組 乳鼠心肌細胞原代分離培養(yǎng)48h后首度換液，再培養(yǎng)24h并進行無血清化6-8h后分成四組：1）正常對照組：使用5.5mmol/L的葡萄糖DMEM培養(yǎng)基作為對照組進行培養(yǎng)；2）高糖組：使用30mmol/L的葡萄糖DMEM培養(yǎng)基作為高糖組進行培養(yǎng)；3）低劑量組：使用30mmol/L的葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基加入終濃度10μmol/L的吡格列酮為低劑量組進行培養(yǎng)；4）高劑量組：使30mmol/L的葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基加入終濃度20μmol/L的吡格列酮為高劑量組進行培養(yǎng)，各組細胞均繼續(xù)培養(yǎng)48h后收集細胞及培養(yǎng)基上清進行指標測定。 2.指標檢測 LDH試劑盒測定培養(yǎng)基中LDH的含量，反應心肌細胞受損程度，ELISA法測定培養(yǎng)基上清中的炎癥因子IL-6、TNF-α的含量變化，反應心肌細胞中炎癥因子產(chǎn)生的情況，用細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒提取胞核蛋白，Western Blot法測定細胞胞核轉錄因子NF-κB亞基p65的蛋白表達情況，另將收集的細胞提取總蛋白同樣用Western Blot法檢測p-p38MAPK的蛋白表達情況。 結果 1.乳酸脫氫酶（LDH）含量的測定 結果顯示，高糖組細胞培養(yǎng)液中LDH的含量顯著上升（p0.01），，說明高糖對心肌細胞產(chǎn)生了損傷作用。細胞給予吡格列酮處理后培養(yǎng)液中LDH的含量顯著的下降（p0.05），說明吡格列酮對高糖誘導下的心肌細胞有保護作用。 2.炎癥因子IL-6、TNF-α含量的檢測 結果顯示，與正常對照組心肌細胞相比較，高糖組乳鼠心肌細胞的炎癥因子IL-6、TNF-α含量均明顯升高（p0.05；p0.01），提示高糖可引起心肌細胞炎癥性損傷；而給予吡格列酮處理后（低劑量組與高劑量組），心肌細胞的炎癥因子IL-6含量明顯下降（p0.05），TNF-α的含量也顯著減少（p0.05），表明吡格列酮處理能明顯減輕炎癥因子的產(chǎn)生。 3.轉錄因子NF-κB活性的測定 經(jīng)檢測，與正常組心肌細胞相比較，高糖組心肌細胞胞核NF-κB p65蛋白的表達均明顯增高（p0.01），而給予吡格列酮（低劑量與高劑量）后心肌細胞胞核NF-κB p65蛋白表達均明顯減少（p0.05）。 4. p38MAPK的激活 結果顯示，與正常組心肌細胞相比較，高糖組p-p38MAPK蛋白表達明顯升高（p0.01），而經(jīng)吡格列酮處理后（低劑量組與高劑量組）p-p38MAPK蛋白表達升高明顯得以改善（p0.05；p0.01）。 結論 1.高糖培養(yǎng)可誘導乳鼠心肌細胞的損傷，伴隨炎性因子的產(chǎn)生增加，NF-κB活性增加及p38MAPK通路激活。 2.吡格列酮處理高糖環(huán)境下培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞可使細胞炎性損傷減輕，轉錄因子NF-κB活性得以改善及p-p38MAPK蛋白表達降低。吡格列酮通過抑制p38MAPK通路的激活及轉錄因子NF-κB的活性，而減輕高糖引起的乳鼠心肌細胞炎性損傷。
【關鍵詞】：高糖 炎癥 心肌細胞 吡格列酮
【學位授予單位】：湖北科技學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-13
• 材料與方法13-25
• 1. 主要試劑與儀器13-14
• 1.1 主要試劑13-14
• 1.2 主要儀器和設備14
• 2. 實驗動物14-15
• 3. 主要試劑的配制15-18
• 4. 實驗方法18-25
• 結果25-27
• 討論27-31
• 結論31-32
• 參考文獻32-35
• 附圖35-39
• 綜述39-47
• 參考文獻44-47
• 致謝47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關鍵詞：吡格列酮對高糖誘導下心肌細胞的抗炎作用及其機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：422417