發(fā)布時(shí)間：2017-06-05 00:00

  本文關(guān)鍵詞：吡格列酮對(duì)高糖誘導(dǎo)下心肌細(xì)胞的抗炎作用及其機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 用高糖刺激乳鼠心肌細(xì)胞模擬糖尿病誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷，給予吡格列酮處理觀察高糖對(duì)心肌細(xì)胞炎癥因子的影響，以p38MAPK通路的激化情況和NF-κB活性的影響。 方法 1.乳鼠心肌細(xì)胞的分離與培養(yǎng)以及實(shí)驗(yàn)分組 乳鼠心肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)48h后首度換液，再培養(yǎng)24h并進(jìn)行無(wú)血清化6-8h后分成四組：1）正常對(duì)照組：使用5.5mmol/L的葡萄糖DMEM培養(yǎng)基作為對(duì)照組進(jìn)行培養(yǎng)；2）高糖組：使用30mmol/L的葡萄糖DMEM培養(yǎng)基作為高糖組進(jìn)行培養(yǎng)；3）低劑量組：使用30mmol/L的葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基加入終濃度10μmol/L的吡格列酮為低劑量組進(jìn)行培養(yǎng)；4）高劑量組：使30mmol/L的葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基加入終濃度20μmol/L的吡格列酮為高劑量組進(jìn)行培養(yǎng)，各組細(xì)胞均繼續(xù)培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞及培養(yǎng)基上清進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。 2.指標(biāo)檢測(cè) LDH試劑盒測(cè)定培養(yǎng)基中LDH的含量，反應(yīng)心肌細(xì)胞受損程度，ELISA法測(cè)定培養(yǎng)基上清中的炎癥因子IL-6、TNF-α的含量變化，反應(yīng)心肌細(xì)胞中炎癥因子產(chǎn)生的情況，用細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒提取胞核蛋白，Western Blot法測(cè)定細(xì)胞胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB亞基p65的蛋白表達(dá)情況，另將收集的細(xì)胞提取總蛋白同樣用Western Blot法檢測(cè)p-p38MAPK的蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果 1.乳酸脫氫酶（LDH）含量的測(cè)定 結(jié)果顯示，高糖組細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH的含量顯著上升（p0.01），，說(shuō)明高糖對(duì)心肌細(xì)胞產(chǎn)生了損傷作用。細(xì)胞給予吡格列酮處理后培養(yǎng)液中LDH的含量顯著的下降（p0.05），說(shuō)明吡格列酮對(duì)高糖誘導(dǎo)下的心肌細(xì)胞有保護(hù)作用。 2.炎癥因子IL-6、TNF-α含量的檢測(cè) 結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組心肌細(xì)胞相比較，高糖組乳鼠心肌細(xì)胞的炎癥因子IL-6、TNF-α含量均明顯升高（p0.05；p0.01），提示高糖可引起心肌細(xì)胞炎癥性損傷；而給予吡格列酮處理后（低劑量組與高劑量組），心肌細(xì)胞的炎癥因子IL-6含量明顯下降（p0.05），TNF-α的含量也顯著減少（p0.05），表明吡格列酮處理能明顯減輕炎癥因子的產(chǎn)生。 3.轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性的測(cè)定 經(jīng)檢測(cè)，與正常組心肌細(xì)胞相比較，高糖組心肌細(xì)胞胞核NF-κB p65蛋白的表達(dá)均明顯增高（p0.01），而給予吡格列酮（低劑量與高劑量）后心肌細(xì)胞胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)均明顯減少（p0.05）。 4. p38MAPK的激活 結(jié)果顯示，與正常組心肌細(xì)胞相比較，高糖組p-p38MAPK蛋白表達(dá)明顯升高（p0.01），而經(jīng)吡格列酮處理后（低劑量組與高劑量組）p-p38MAPK蛋白表達(dá)升高明顯得以改善（p0.05；p0.01）。 結(jié)論 1.高糖培養(yǎng)可誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞的損傷，伴隨炎性因子的產(chǎn)生增加，NF-κB活性增加及p38MAPK通路激活。 2.吡格列酮處理高糖環(huán)境下培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞可使細(xì)胞炎性損傷減輕，轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性得以改善及p-p38MAPK蛋白表達(dá)降低。吡格列酮通過(guò)抑制p38MAPK通路的激活及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性，而減輕高糖引起的乳鼠心肌細(xì)胞炎性損傷。
【關(guān)鍵詞】：高糖 炎癥 心肌細(xì)胞 吡格列酮
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-13
• 材料與方法13-25
• 1. 主要試劑與儀器13-14
• 1.1 主要試劑13-14
• 1.2 主要儀器和設(shè)備14
• 2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14-15
• 3. 主要試劑的配制15-18
• 4. 實(shí)驗(yàn)方法18-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 附圖35-39
• 綜述39-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：422417