本文關(guān)鍵詞：硫化氫供體腦缺血后促進(jìn)神經(jīng)功能修復(fù)的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的在小鼠大腦中動脈阻塞模型中,利用硫化氫供體ADT-OH延遲給藥能否通過激活A(yù)MPK通路,增強(qiáng)缺血再灌注后腦內(nèi)小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞由M1型極化狀態(tài)向M2型極化狀態(tài)轉(zhuǎn)變,從而促進(jìn)卒中小鼠的長期腦修復(fù)及功能修復(fù)。方法利用線栓法制作小鼠大腦中動脈栓塞模型,缺血1 h后再灌注。小鼠再灌注24 h后,ADT-OH給藥組腹腔注射ADT-OH(50mg/kg),溶劑對照組注射同等劑量溶劑,直至手術(shù)后30天。ADT-OH給藥組小鼠與溶劑對照組小鼠每日進(jìn)行小鼠神經(jīng)功能缺損評分(m Nss)和轉(zhuǎn)角試驗評分(Corner test),并且在手術(shù)后第3、7、14、28天進(jìn)行轉(zhuǎn)棒實驗(Rota-rod test),以此3種行為學(xué)實驗作為依據(jù),對小鼠神經(jīng)功能恢復(fù)進(jìn)行評價。30天后收取腦組織,以Western Blot方法檢測缺血再灌注后第3天及第14天的ADT-OH給藥組、溶劑對照組小鼠大腦皮層中AMPK磷酸化水平;以Real-time PCR方法測定缺血再灌注后第3、7、14、30天ADT-OH給藥組、溶劑對照組小鼠大腦皮層組織中M1型炎癥因子(CD32、IL-1β、TNF-α)和M2極化標(biāo)志因子(CD206、Arginase 1)m RNA表達(dá)量水平的變化;以ELISA方法測定缺血再灌注后第3、14天ADT-OH給藥組、溶劑對照組小鼠大腦皮層組織中M2型炎癥因子(IL-10)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白質(zhì)表達(dá)量水平的變化;以免疫組織化學(xué)方法檢測缺血再灌注后第30天ADT-OH給藥組、溶劑對照組小鼠大腦皮層組織缺血半暗帶區(qū)域血管新生。采用LPS誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞的M1極化,研究ADT-OH能否通過促進(jìn)BV-2細(xì)胞的M2極化,引發(fā)腦血管內(nèi)皮(b End 3)細(xì)胞的體外血管新生。采用神經(jīng)元細(xì)胞缺糖缺氧(OGD)模型刺激BV-2細(xì)胞誘發(fā)炎癥反應(yīng),模擬卒中后腦內(nèi)微環(huán)境,研究ADT-OH能否在類似卒中后微環(huán)境下影響腦血管內(nèi)皮細(xì)胞(b End 3)細(xì)胞的體外血管新生。利用TTC染色法比較缺血再灌注96 h ADT-OH給藥組和溶劑對照組梗死面積差異,利用腦萎縮率比較缺血再灌注30天藥組和溶劑對照組腦萎縮差異,探究ADT-OH的延遲給藥能否對梗死面積保護(hù)產(chǎn)生影響。結(jié)果小鼠大腦中動脈栓塞模型中,行為學(xué)實驗結(jié)果表明,ADT-OH(50mg/kg)延遲給藥能夠顯著改善小鼠腦缺血后的長期神經(jīng)功能恢復(fù)。由Western Blot結(jié)果顯示,ADT-OH給藥組小鼠在第3天以及第14天時,腦皮層組織中AMPK的磷酸化水平明顯高于溶劑對照組小鼠(P0.05)。Real-time PCR結(jié)果顯示,缺血再灌注第3、7、14、30天時,與溶劑對照組小鼠相比,ADT-OH組小鼠大腦皮層組織中,M1型炎癥因子(CD32、IL-1β、TNF-α)m RNA表達(dá)水平在各個時間點上表達(dá)水平明顯降低(P0.05);而與此同時M2型炎癥因子(CD206、Arginase 1)在相同時間點上表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。ELISA結(jié)果顯示在再灌注3天、14天時,ADT-OHADT-OH給藥組小鼠大腦皮層M2因子IL-10較之溶劑對照組小鼠有明顯升高(P0.05)腦組織切片免疫組化結(jié)果顯示,缺血再灌注30天后,ADT-OH給藥組大腦皮層萎縮邊緣區(qū)血管新生明顯多于溶劑對照組。在LPS刺激BV-2細(xì)胞或神經(jīng)元OGD后條件上清液刺激誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞M1極化的兩種炎癥模型中,ADT-OH共處理能很明顯的誘導(dǎo)b End 3細(xì)胞在體外生成血管樣結(jié)構(gòu),然而ADT-OH本身卻無促血管新生功能;ELISA結(jié)果顯示在再灌注3天、14天時,ADT-OH給藥組小鼠大腦皮層中促血管生成因子v EGF較之溶劑對照組小鼠有明顯升高(P0.05)。結(jié)論小鼠大腦中動脈栓塞模型中,硫化氫供體ADT-OH的延遲給藥能夠促進(jìn)缺血小鼠腦修復(fù)及長期神經(jīng)功能的康復(fù),作用機(jī)制是ADT-OH在腦缺血后激活A(yù)MPK從而促進(jìn)缺血部位的小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞由M1型活化狀態(tài)向M2型活化狀態(tài)極化,從而促進(jìn)缺血區(qū)血管新生和組織修復(fù)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：ADT-OH 硫化氫供體 AMPK MCAO 小膠質(zhì)細(xì)胞 M2型活化 血管新生
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 材料和方法12-21
• 1、實驗材料12-13
• 2、實驗方法13-21
• 實驗結(jié)果21-35
• 1. ADT-OH延遲給藥能夠顯著改善MCAO小鼠長期神經(jīng)功能康復(fù)21-22
• 2. ADT-OH增加MCAO后小鼠血清中硫化氫含量22-23
• 3. ADT-OH增強(qiáng)MCAO后缺血區(qū)AMPK磷酸化水平23-24
• 4. ADT-OH抑制MCAO后缺血區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞M1 型極化24-27
• 5. ADT-OH促進(jìn)MCAO后缺血區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞M2 型極化27-29
• 6. ADT-OH延遲給藥對MCAO后梗死區(qū)無明顯保護(hù)作用29-30
• 7. ADT-OH在腦缺血后通過小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮促血管新生作用30-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 英文縮寫詞表51-52
• 致謝52-53

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本文編號：398043