本文關(guān)鍵詞：凝集素修飾的苦參堿納米粒對人結(jié)腸癌細胞HT29的作用評價，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本課題選擇前期研究制備的凝集素修飾的苦參堿納米粒(WGA-MT-NPS)作為研究對象,利用凝集素對癌細胞的特異性親和作用,對結(jié)腸癌HT29細胞的作用進行評價,了解WGA-MT-NPS對癌細胞的作用機理,為口服結(jié)腸癌生物黏附靶向給藥系統(tǒng)的研究奠定基礎(chǔ)。方法:(1)WGA-MT-NPS的制備表征及凝集活性考察制備WGA-MT-NPS,以粒徑、粒度分布、電位對其進行評價,并考察凝集素修飾在苦參堿納米粒上之后的活性變化。(2)WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌HT29細胞增殖的影響采用四唑鹽比色法(MTT),以O(shè)D值為指標研究MT-NPS用WGA修飾前后對結(jié)腸癌HT29細胞的細胞增殖的抑制作用。(3)WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29凋亡的影響采用Annexin V-FITC/PI雙染法,利用流式細胞儀考察各組MT-NPS與WGA-MT-NPS對HT29細胞凋亡的影響,并利用Flow Jo軟件進行分析。(4)WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29細胞周期的影響采用PI染色法,利用流式細胞儀考察各組MT-NPS與WGA-MT-NPS對HT29細胞周期的影響,并利用ModFit軟件進行分析。(5)WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29和人正常結(jié)腸上皮細胞NCM460的不同親和作用研究用fWGA-MT-NPS分別作用于HT29細胞和NCM460細胞,利用熒光染料染色,在共聚焦顯微鏡下觀察藥物與兩種細胞的親和作用情況。結(jié)果:按照最佳工藝制備出的三批MT-NPS粒徑分別為102.6nm、104.6nm和101.6nm,電位分別為-17.5mV、-12.2mV、-12.5 mV,三批WGA-MT-NPS粒徑分別為234.7nm、235.1nm和231.9nm電位分別為-9.51mV、-7.85mV、-7.54 mV,經(jīng)考察WGA修飾在MT-NPS上后,凝集素的凝血活性沒有發(fā)生變化;WGA-MT-NPS相對于HT29癌細胞增殖的抑制作用更強,且有明顯的量效關(guān)系;相同含藥濃度下WGA-MT-NPS相對于MT-NPS,結(jié)腸癌細胞HT29的凋亡率更高;藥物將細胞周期阻滯在G0/G1期,阻礙了細胞DNA的合成,且WGA-MT-NPS比MT-NP G0/G1期有更高的細胞量;共聚焦顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),結(jié)腸癌細胞HT29視野中的綠色熒光強度明顯強于人正常結(jié)腸上皮細胞NCM460。結(jié)論:WGA對納米粒修飾后,仍保持了其特異糖基結(jié)合活性;WGA-MT-NPS對HT29細胞增殖的抑制作用比MT-NPS更強,并具備更強的促進其凋亡作用和細胞周期阻滯作用;HT29細胞對WGA-MT-NPS的攝取明顯強于正常結(jié)腸上皮細胞NCM460。說明WGA對MT-NPS修飾后具有較為明顯的結(jié)腸癌細胞靶向性和選擇性殺傷作用。
【關(guān)鍵詞】：麥胚凝集素 HT29細胞 細胞增殖 流式細胞儀 激光共聚焦顯微鏡
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943;R96
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 第一章 苦參堿納米粒和凝集素修飾的苦參堿納米粒的制備表征及凝集活性考察12-20
• 1. 實驗儀器、試劑和材料12-13
• 1.1 實驗儀器12
• 1.2 實驗試劑12-13
• 1.3 實驗材料13
• 2. 苦參堿納米粒（MT-NPS）的制備與表征13-16
• 2.1 MT-NPS的制備方法13
• 2.2 MT-NPS的表征13-15
• 2.3 MT-NPS的包封率和載藥量的測定15-16
• 3. 凝集素修飾的苦參堿納米粒（WGA-MT-NPS）的制備與表征16-18
• 3.1 WGA-MT-NPS的制備方法16
• 3.2 WGA-MT-NPS的表征16-18
• 3.3 WGA對MT-NPS修飾率的測定18
• 4. 麥胚凝集素修飾后凝集活性考察18-20
• 第二章 結(jié)腸癌細胞HT29生長曲線的測定及WGA-MT-NPS對其增殖的影響20-33
• 1. 實驗儀器、試劑和材料20-21
• 1.1 實驗儀器20
• 1.2 實驗試劑20-21
• 1.3 實驗材料21
• 2. HT29細胞的培養(yǎng)21-24
• 2.1 試劑配制21
• 2.2 HT29細胞培養(yǎng)常規(guī)觀察21
• 2.3 HT29細胞懸液的制備21-22
• 2.4 HT29細胞傳代22
• 2.5 HT29細胞凍存22
• 2.6 HT29細胞復(fù)蘇22-23
• 2.7 HT29細胞計數(shù)23-24
• 3. 結(jié)腸癌細胞HT29生長曲線的測定24-27
• 3.1 實驗方法24-25
• 3.2 實驗結(jié)果25-27
• 4. WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29增殖的影響27-33
• 4.1 實驗方法27-29
• 4.2 實驗結(jié)果29-33
• 第三章 WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29凋亡的影響33-39
• 1. 實驗儀器、試劑和材料33-34
• 1.1 實驗儀器33
• 1.2 實驗試劑33-34
• 1.3 實驗材料34
• 2. 實驗方法34-35
• 2.1 WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29凋亡的影響34
• 2.2 實驗步驟34-35
• 3. 實驗結(jié)果35-39
• 第四章 WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29周期的影響39-47
• 1. 實驗儀器、試劑和材料39-40
• 1.1 實驗儀器39
• 1.2 實驗試劑39
• 1.3 實驗材料39-40
• 2. 實驗方法40-41
• 2.1 WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29周期的影響40
• 2.2 實驗步驟40-41
• 3. 實驗結(jié)果41-47
• 第五章 WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29和人正常結(jié)腸上皮細胞NCM460的不同親和作用研究47-53
• 1. 實驗儀器、試劑和材料47-48
• 1.1 實驗儀器47
• 1.2 實驗試劑47-48
• 1.3 實驗材料48
• 2. 實驗內(nèi)容48-53
• 2.1 FITC標記麥胚凝集素修飾苦參堿納米粒（f WGA-MT-NPS）的制備49
• 2.2 fWGA-MT-NPS與細胞作用時間篩選49-51
• 2.3 WGA-MT-NPS對結(jié)腸癌細胞HT29和人正常結(jié)腸上皮細胞NCM460的不同親和作用研究51-53
• 結(jié)果與討論53-55
• 致謝55-56
• 參考文獻56-59
• 附錄1 文獻綜述59-66
• 參考文獻63-66
• 附錄2 論文發(fā)表情況66

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 詹海勇;詹瓊;詹冬雪;李國平;黃聰武;;結(jié)腸癌患者血漿瘦素水平與臨床病理分期及體質(zhì)指數(shù)的關(guān)系[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年14期

2 聶家艷;黃杰安;唐國都;劉詩權(quán);;舒林酸對人結(jié)腸癌細胞凋亡及相關(guān)基因表達譜的作用[J];世界華人消化雜志;2008年25期

3 林蘭;劉建文;;胸腺肽制劑及臨床應(yīng)用研究現(xiàn)狀[J];中國藥事;2009年07期

4 高碩徽;趙吉生;李暢;蘇妍卓;;LIMK1/Cofilin在瘦素誘導(dǎo)的結(jié)腸癌SW620細胞遷移中的作用[J];中國老年學(xué)雜志;2011年06期

  本文關(guān)鍵詞：凝集素修飾的苦參堿納米粒對人結(jié)腸癌細胞HT29的作用評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：387095