發(fā)布時(shí)間：2017-05-23 06:23

  本文關(guān)鍵詞：全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合卡馬西平抗癲癇機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 考察全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合卡馬西平對(duì)青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠抑制作用；研究天麻素與卡馬西平在青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)之間的相互影響；通過免疫組化和Western-blot方法研究全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合卡馬西平,對(duì)癲癇大鼠海馬體P-gP表達(dá)的影響；通過實(shí)時(shí)定量熒光PCR研究全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合卡馬西平,對(duì)癲癇大鼠海馬體中MDR1和Abcc1基因表達(dá)的影響。 方法 1、將SD大鼠分為6組,每組6只,分別為空白對(duì)照組,卡馬西平組、卡馬西平聯(lián)合全天麻膠囊組、卡馬西平聯(lián)合天麻素組、全天麻膠囊組、天麻素組�？瞻讓�(duì)照組大鼠給予生理鹽水,其它各組給予對(duì)應(yīng)藥物,每日一次,連續(xù)給藥7天,腹腔注射720萬單位/kg青霉素,連續(xù)2h觀察各組大鼠癲癇發(fā)作情況,并記錄發(fā)作的等級(jí)、持續(xù)時(shí)間,潛伏時(shí)間,死亡率。 2、將青霉素誘導(dǎo)癲癇SD大鼠分為5組,每組18只,即為卡馬西平組、卡馬西平聯(lián)合全天麻膠囊組、卡馬西平聯(lián)合天麻素組、全天麻膠囊組、天麻素組,在灌胃第一天、第七天、第十五天,在各組大鼠中隨機(jī)選取6只大鼠,在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)采集血樣和腦組織,處理后用HPLC分析血藥濃度和腦藥濃度,用DAS2.0藥動(dòng)學(xué)軟件計(jì)算各組大鼠藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。 3、將青霉素誘導(dǎo)癲癇SD大鼠分為6組,每組18只,分別為空白模型對(duì)照組,卡馬西平組、卡馬西平聯(lián)合全天麻膠囊組、卡馬西平聯(lián)合天麻素組、全天麻膠囊組、天麻素組,另選取正常組大鼠6只為空白對(duì)照組,給予生理鹽水和相對(duì)應(yīng)的藥物灌胃處理,在灌胃第一天、第七天、第十五天,在各組大鼠中隨機(jī)選取6只,用規(guī)定的方法處理,分離大鼠海馬體,進(jìn)行免疫組化、wetern-blot、實(shí)時(shí)定量熒光PCR和普通病理學(xué)分析。結(jié)果 1、卡馬西平聯(lián)合全天麻膠囊及天麻素對(duì)青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠的發(fā)作級(jí)別、潛伏時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、死亡率均有顯著影響,聯(lián)合組優(yōu)于單用組,研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合全天麻膠囊組比聯(lián)合天麻素組抑制效果更加明顯,全天麻膠囊組、天麻素組較卡馬西平組抑制效果差,其中全天麻膠囊組抑制效果優(yōu)于天麻素組。 2、全天麻膠囊及天麻素對(duì)卡馬西平體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)有影響,卡馬西平對(duì)天麻素的體內(nèi)血藥藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)有影響。隨著給藥天數(shù)的增加,卡馬西平最大血藥濃度和腦藥濃度呈下降趨勢,聯(lián)合應(yīng)用全天麻膠囊后這種下降趨勢減弱�？R西平腦內(nèi)濃度受全天麻膠囊影響,天麻素腦內(nèi)濃度不受卡馬西平影響。 3、灌胃給予卡馬西平,青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠海馬體P-糖蛋白表達(dá)量增加,聯(lián)合應(yīng)用全天麻膠囊組,P-糖蛋白表達(dá)較卡馬西平組、天麻素組降低；普通病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),卡馬西平對(duì)于青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠損傷細(xì)胞無修復(fù)作用,聯(lián)合應(yīng)用全天麻膠囊后,修復(fù)作用明顯,天麻素?zé)o修復(fù)作用。 4、癲癇大鼠海馬體P-gp表達(dá)較正常大鼠增加；隨著給藥時(shí)間增加,卡馬西平組、天麻素組及兩者合用組,P-gp表達(dá)增加,天麻素誘導(dǎo)P-gp表達(dá)增加明顯弱于卡馬西平,加入全天麻膠囊后,P-gp的表達(dá)增加的趨勢明顯減弱。 5、隨著給藥時(shí)間增加,卡馬西平組、卡馬西平聯(lián)合天麻素組、天麻素組MDR1a基因表達(dá)增加,給藥第七天,MDR1b基因下降,在第十五天,增加。全天麻膠囊調(diào)低MDR1a及MDR1b基因,天麻素則調(diào)高M(jìn)DR1a及MDR1b基因水平。隨著給藥時(shí)間的增加各組MRP1/Abcc1基因表達(dá)上調(diào),卡馬西平組上調(diào)顯著。 結(jié)論 全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合卡馬西平,對(duì)青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠有顯著抑制作用,抑制效果較卡馬西平組好；全天麻膠囊及天麻素對(duì)卡馬西平的藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)有影響,可促進(jìn)卡馬西平在大鼠體內(nèi)分布。全天麻膠囊對(duì)青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠海馬體損傷細(xì)胞有修復(fù)作用。全天麻膠囊能影響海馬體中P-gp的表達(dá),及MDR1和MRP1/Abcc1基因表達(dá)。這對(duì)研究抗癲癇中藥作用機(jī)制,提供新的思路和理論支撐。
【關(guān)鍵詞】：卡馬西平 全天麻膠囊 天麻素 青霉素 癲癇模型 P-GP 藥代動(dòng)力學(xué) Western-blot 實(shí)時(shí)定量熒光PCR 免疫組織化學(xué)法
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R742.1;R965
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-12
• 引言12-18
• 1 多藥耐藥研究進(jìn)展12-14
• 2 中醫(yī)藥治療癲癇研究進(jìn)展14-16
• 3 中西藥聯(lián)合治療癲癇研究進(jìn)展16-18
• 第二章 立題依據(jù)與研究內(nèi)容18-22
• 2.1 立題依據(jù)18-20
• 2.2 研究內(nèi)容20-22
• 第三章 全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合應(yīng)用卡馬西平對(duì)青霉素所致癲癇模型小鼠的抑制作用22-25
• 1 材料與方法22
• 1.1 材料22
• 2 方法22-23
• 2.1 分組23
• 2.2 給藥23
• 2.3 造模23
• 2.4 癲癇模型發(fā)作等級(jí)評(píng)判23
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-24
• 3.1 對(duì)癲癇模型的抑制作用結(jié)果23-24
• 4 討論24-25
• 第四章 全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合應(yīng)用卡馬西平的藥動(dòng)學(xué)25-40
• 1 材料及方法25-26
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物25
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥物25
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器25-26
• 2 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 2.1 分組26
• 2.2 造模26
• 2.3 給藥方法26
• 2.4 樣品采集26-27
• 3 HPLC法測定大鼠血液及腦組織中天麻素及卡馬西平方法學(xué)考察27-30
• 3.1 色譜條件27
• 3.2 大鼠血液前處理27
• 3.3 大鼠腦組織前處理27
• 3.4 對(duì)照品溶液的制備27-28
• 3.5 線性關(guān)系考察28-29
• 3.6 方法專屬性29
• 3.7 精密度29-30
• 3.8 加樣回收率30
• 3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件30
• 4 結(jié)果30-38
• 4.1 HPLC法測定大鼠血液及腦組織中天麻素及卡馬西平方法學(xué)考察結(jié)果31-38
• 5 討論38-40
• 第五章 免疫組織化學(xué)法檢測全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合應(yīng)用卡馬西平對(duì)于青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠海馬體P-糖蛋白表達(dá)的影響及普通病理學(xué)檢查40-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑40-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑40
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器40-41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組41
• 2.2 造模41
• 2.3 給藥方法41
• 2.4 標(biāo)本采集41-42
• 3 免疫組織化學(xué)法檢測全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合應(yīng)用卡馬西平對(duì)于青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠海馬體P-糖蛋白表達(dá)的影響42-44
• 3.1 石蠟片的制備42-43
• 3.2 海馬體組織免疫組織化學(xué)染色43
• 3.3 結(jié)果判定43
• 3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43-44
• 4 病理學(xué)檢查44
• 5 結(jié)果44-52
• 5.1 大鼠海馬體免疫組織化學(xué)法檢查結(jié)果44-46
• 5.2 p-gp陽性產(chǎn)物在各組大鼠海馬體內(nèi)的表達(dá)的光密度平均值46-48
• 5.3 病理學(xué)檢查結(jié)果48-52
• 第六章 蛋白免疫印跡法檢測全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合應(yīng)用卡馬西平對(duì)于青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠海馬體P-糖蛋白表達(dá)的影響52-59
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和方法52-53
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物52
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑52-53
• 1.3 相關(guān)試液配置53
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器53
• 2 實(shí)驗(yàn)方法53-56
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組53
• 2.2 造模53
• 2.3 給藥方法53-54
• 2.4 標(biāo)本采集54
• 2.5 蛋白質(zhì)的提取54-55
• 2.6 蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺電泳55-56
• 3 結(jié)果56-58
• 3.1 各組大鼠海馬體P-gp表達(dá)Western blot圖譜56
• 3.2 各組大鼠海馬體P-gp表達(dá)量56-58
• 4 討論58-59
• 第七章 全天麻膠囊及天麻素與卡馬西平聯(lián)用后對(duì)于青霉素誘導(dǎo)的癲癇大鼠海體多藥耐藥基因MDR1和Abcc1表達(dá)的影響59-67
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和方法59-60
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物59
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑59
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器59-60
• 2 實(shí)驗(yàn)方法60-63
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組：同實(shí)驗(yàn)第六章60
• 2.2 造模：同實(shí)驗(yàn)第六章60
• 2.3 給藥方法：同實(shí)驗(yàn)第六章60
• 2.4 標(biāo)本采集：同實(shí)驗(yàn)第六章60
• 2.5 組織總RNA提取60
• 2.7 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)60-63
• 3 結(jié)果63-67
• 3.1 熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測MDR1基因表達(dá)結(jié)果63-65
• 3.2 熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測Abcc1基因表達(dá)結(jié)果65-67
• 4 討論67
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 研究結(jié)論71-72
• 在學(xué)期間的研究成果72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：全天麻膠囊及天麻素聯(lián)合卡馬西平抗癲癇機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：387047