本文關(guān)鍵詞：蟾蜍毒素衍生物腫瘤靶向偶聯(lián)物研究和作用于線粒體化合物的抗腫瘤作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分 蟾蜍毒素衍生物腫瘤靶向偶聯(lián)物研究抗體-藥物偶聯(lián)物(AAntibody-drug conjugates,ADCs)是一類新型腫瘤靶向治療藥物,由抗體、效應(yīng)分子和接頭三部分組成。ADC通過(guò)將抗體與效應(yīng)分子的偶聯(lián),以抗體為制導(dǎo)系統(tǒng)把效應(yīng)分子運(yùn)送到靶部位,提高效應(yīng)分子的靶向性,增加對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,減少對(duì)其他組織器官的毒副作用。同時(shí),ADC還能很好地應(yīng)對(duì)單抗耐藥性的缺點(diǎn)。目前,FDA已經(jīng)批準(zhǔn)2種ADC藥物上市,另外,國(guó)內(nèi)外也有幾十種ADC處于臨床試驗(yàn)階段。BF211是一種蟾蜍毒素衍生物,在體內(nèi)外都具有良好的抑瘤效果,但是缺乏腫瘤細(xì)胞靶向性導(dǎo)致其毒副作用過(guò)大限制了其使用。我們?cè)O(shè)計(jì)將其通過(guò)合適的接頭與抗體/多肽偶聯(lián),增加其靶向性降低其毒副作用。首先,我們選擇硫醚鍵、PEG、二肽及四肽接頭與BF211相連并對(duì)其抑制腫瘤增殖效果進(jìn)行評(píng)價(jià),選出了能夠偶聯(lián)且不影響B(tài)F211活性的二肽接頭,并證明增加一個(gè)PABC隔離區(qū)能夠獲得更好的剪切效率和使用效果。將BF211與靶向肝癌細(xì)胞的靶向肽A54相連得到化合物CXM-03035,酶切實(shí)驗(yàn)證明CXM-03035能夠在蛋白酶作用下切割釋放出BF211并發(fā)揮細(xì)胞毒作用。我們通過(guò)一系列細(xì)胞和酶水平實(shí)驗(yàn),證明BF211能夠通過(guò)合適的方法偶聯(lián)作為ADC的效應(yīng)分子,并選出了加了一個(gè)PABC隔離區(qū)的二肽作為接頭與靶向肽/抗體偶聯(lián),為接下來(lái)的BF211靶向偶聯(lián)和其他的ADC研究提供了基礎(chǔ)和借鑒。第二部分 作用于線粒體化合物的抗腫瘤作用研究線粒體是人體最重要的細(xì)胞器之一,為細(xì)胞的生命活動(dòng)提供能量,還參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、鈣離子儲(chǔ)存、細(xì)胞分化與生長(zhǎng)、細(xì)胞自噬、凋亡等生命過(guò)程,其參與多種凋亡途徑,在細(xì)胞凋亡調(diào)控中處于中心地位。線粒體作為細(xì)胞代謝網(wǎng)絡(luò)和信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控中心表現(xiàn)出多種重要的生理功能,以線粒體為靶標(biāo)的藥物研究已成為新藥研發(fā)的熱點(diǎn)之一。線粒體膜電位直接衡量線粒體的狀態(tài)和功能,與正常細(xì)胞相比,大部分腫瘤細(xì)胞的膜電位偏高。因此將化合物累積在腫瘤細(xì)胞中,通過(guò)破壞線粒體膜電位從而引發(fā)細(xì)胞凋亡的發(fā)生進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡的發(fā)生是一種新的抑瘤策略。前期研究中,通過(guò)基于線粒體膜電位的高通量篩選模型從4000個(gè)小分子化合物庫(kù)中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)苗頭化合物L(fēng)GH00278,其能夠在低濃度降低線粒體膜電位。我們對(duì)LGH00278進(jìn)行修飾改造,希望能夠得到能夠降低線粒體膜電位并具有細(xì)胞毒作用的化合物用于抗腫瘤治療。對(duì)LGH00278從兩個(gè)方面進(jìn)行改造得到兩個(gè)系列的化合物,并對(duì)其細(xì)胞毒作用和降線粒體膜電位效果進(jìn)行評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)它們能夠降低線粒體膜電位且抑制腫瘤細(xì)胞增殖,且二者之間存在一定相關(guān)性。挑選其中幾個(gè)效果較好、有研究?jī)r(jià)值的化合物進(jìn)一步研究,發(fā)現(xiàn)他們能顯著降低線粒體膜電位并引起細(xì)胞凋亡的發(fā)生從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖,初步驗(yàn)證了我們改造得到的化合物符合當(dāng)初設(shè)計(jì)初衷。通過(guò)以上工作,我們獲得了一系列新的具有研究應(yīng)用價(jià)值的化合物,并為以后作用于線粒體膜電位抗癌研究提供了基礎(chǔ)和支持。
【關(guān)鍵詞】：抗體藥物偶聯(lián)物 BF211 二肽接頭 靶向肽 抗腫瘤作用 線粒體 膜電位 細(xì)胞凋亡 抗腫瘤作用
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-17
• 第一部分 蟾蜍毒素衍生物腫瘤靶向偶聯(lián)物研究17-70
• 第一章 緒論17-37
• 1 ADC介紹17-33
• 1.1 ADC概念、發(fā)展史18-19
• 1.2 研究現(xiàn)狀及前沿19-22
• 1.2.1 經(jīng)上市的藥物19-20
• 1.2.2 臨床階段化合物及研發(fā)熱點(diǎn)20-22
• 1.3 ADC設(shè)計(jì)優(yōu)化22-33
• 1.3.1 ADC靶點(diǎn)的選擇22-26
• 1.3.2 抗體部分26-28
• 1.3.3 效應(yīng)分子部分28-30
• 1.3.4 接頭部分30-33
• 2 課題設(shè)計(jì)介紹33-36
• 2.1 BF211-HCl33-36
• 2.2 十三肽A5436
• 3 論文研究目標(biāo)及整體設(shè)計(jì)36-37
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法37-41
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料37-40
• 2.1.1 細(xì)胞株37
• 2.1.2 化合物及試劑37-38
• 2.1.3 主要耗材38-39
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器39-40
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)40
• 2.2.2 SRB法檢測(cè)體外細(xì)胞增殖40
• 2.2.3 組織蛋白酶酶切產(chǎn)物檢測(cè)40-41
• 2.2.4 統(tǒng)計(jì)分析41
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-57
• 3.1 BF211連接不同接頭的化合物體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活性評(píng)價(jià)41-49
• 3.1.1 與不可斷裂硫醚鍵及PEG接頭連接評(píng)價(jià)42-44
• 3.1.2 與四肽GFLP接頭連接評(píng)價(jià)44-47
• 3.1.3 與二肽接頭(vc)連接評(píng)價(jià)47-49
• 3.2 靶向化合物CXM-03035研究49-55
• 3.2.1 CXM-03035組織蛋白酶B酶切產(chǎn)物檢測(cè)49-52
• 3.2.2 CXM-03035抑制腫瘤細(xì)胞增殖及靶向性研究52-55
• 3.3 討論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-70
• 第二部分 作用于線粒體化合物的抗腫瘤作用研究70-114
• 第一章 緒論70-80
• 1 線粒體及相關(guān)藥物研究進(jìn)展70-77
• 1.1 線粒體70-77
• 1.1.1 線粒體與細(xì)胞凋亡71-73
• 1.1.2 線粒體膜電位73-74
• 1.1.3 線粒體與疾病74-77
• 2 化合物來(lái)源及介紹77-80
• 2.1 化合物來(lái)源77-79
• 2.2 論文研究目標(biāo)與整體設(shè)計(jì)79-80
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法80-87
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料80-84
• 2.1.1 細(xì)胞株80
• 2.1.2 主要試劑80-82
• 2.1.3 主要耗材82-83
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器83-84
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法84-87
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)84
• 2.2.2 SRB法檢測(cè)體外細(xì)胞增殖84
• 2.2.3 Western-blot檢測(cè)細(xì)胞蛋白表達(dá)84-85
• 2.2.4 線粒體膜電位檢測(cè)85-86
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析86-87
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果87-95
• 3.1 化合物生物學(xué)效果評(píng)價(jià)及構(gòu)效分析87-95
• 3.1.1 化合物細(xì)胞毒性作用評(píng)價(jià)87-90
• 3.1.2 化合物構(gòu)效分析90-93
• 3.1.3 化合物細(xì)胞毒性作用及降低線粒體膜電位作用93-95
• 第四章 化合物作用機(jī)制探討95-105
• 4.1 化合物不引發(fā)細(xì)胞自噬96-98
• 4.2 化合物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡98-100
• 4.3 化合物對(duì)凋亡蛋白的影響100-101
• 4.4 化合物對(duì)HCT-116細(xì)胞線粒體膜電位影響101-103
• 4.5 討論103-105
• 參考文獻(xiàn)105-114
• 碩士期間科研成果114-115
• 致謝115-116

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 管鳳潔;蟾蜍毒素衍生物腫瘤靶向偶聯(lián)物研究和作用于線粒體化合物的抗腫瘤作用研究[D];華東師范大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：蟾蜍毒素衍生物腫瘤靶向偶聯(lián)物研究和作用于線粒體化合物的抗腫瘤作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：378369