本文關(guān)鍵詞：殼聚糖對(duì)神經(jīng)毒物二氯二丁基錫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:二氯二丁基錫(DBT)作為化工原料被廣泛應(yīng)用于殺蟲劑和塑料穩(wěn)定劑,是一種神經(jīng)高毒性化合物。殼聚糖(CS)是天然無(wú)毒的多聚糖,具有抗菌、抗真菌、抗癌、抗糖尿病、抗炎、抗氧化和神經(jīng)保護(hù)等多種生物活性。本論文旨在通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究CS對(duì)DBT誘導(dǎo)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用以及其潛在的作用機(jī)制。方法:本文首先采用MTT法、乳酸脫氫酶(LDH)釋放實(shí)驗(yàn)及形態(tài)學(xué)觀察研究CS對(duì)DBT損傷后PC12細(xì)胞的保護(hù)作用。經(jīng)AO/EB熒光染色法和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平及線粒體膜電位(MMP)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白m RNA的表達(dá)量,并通過(guò)western blotting進(jìn)一步檢測(cè)Bcl-2、Bax、caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:CS預(yù)處理可以濃度依賴性增加DBT所引起的PC12細(xì)胞活力下降,減少DBT誘導(dǎo)LDH的釋放和形態(tài)學(xué)的改變。與DBT處理組相比,CS能夠明顯減少細(xì)胞的凋亡和胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生,部分恢復(fù)MMP。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)表明,DBT導(dǎo)致Bcl-2和Bcl-xL的m RNA表達(dá)水平降低,同時(shí)增加Bad、Bax、cytochome-c、Apaf-1、caspase-9和caspase-3的m RNA水平,而采用CS預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)上述基因表達(dá)的改變。在蛋白水平上,CS可以明顯上調(diào)DBT所致Bcl-2/Bax比值的下降,同時(shí)降低DBT誘導(dǎo)的caspase-9和cleaved caspase-3的高表達(dá)。結(jié)論:CS預(yù)處理能夠保護(hù)DBT誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡,且這種保護(hù)作用可能是通過(guò)ROS介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑。
【關(guān)鍵詞】：殼聚糖 二氯二丁基錫 神經(jīng)保護(hù) PC12細(xì)胞 線粒體凋亡途徑
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-19
• 1.1 細(xì)胞來(lái)源13
• 1.2 主要試劑13
• 1.3 主要儀器13-14
• 1.4 母液的配置14
• 1.5 MTT法測(cè)定細(xì)胞活力14-15
• 1.6 LDH釋放實(shí)驗(yàn)15
• 1.7 形態(tài)學(xué)觀察15
• 1.8 吖啶橙 (AO) /溴化乙錠 (EB) 熒光染色法15
• 1.9 Annexin V-FITC/PI雙染法15-16
• 1.10 ROS含量的測(cè)定16
• 1.11 線粒體膜電位檢測(cè)16
• 1.12 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)16-17
• 1.13 蛋白印記 (Western blotting)17
• 1.14 統(tǒng)計(jì)分析17-19
• 2 結(jié)果19-29
• 2.1 CS對(duì)PC12細(xì)胞的毒性作用19
• 2.2 CS對(duì)DBT誘導(dǎo)PC12毒性的保護(hù)作用19-21
• 2.3 CS對(duì)DBT誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用21-22
• 2.4 CS能降低DBT誘導(dǎo)PC12細(xì)胞ROS的產(chǎn)生和MMP的去極化22-24
• 2.5 CS對(duì)DBT誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因表達(dá)變化的影響24-28
• 2.6 CS對(duì)DBT誘導(dǎo)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)變化的影響28-29
• 3 討論29-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-39
• 綜述39-49
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 致謝49-50
• 在學(xué)期間參與的科研課題與研究成果50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

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本文編號(hào)：375065