本文關(guān)鍵詞：核苷類抗生素Capuramycin與Albomycin結(jié)構(gòu)的優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的1對(duì)己內(nèi)酰胺環(huán)進(jìn)行替換和改造,獲得Capuramycin同系物,以期產(chǎn)生具更高成藥價(jià)值的前體化合物;闡明負(fù)責(zé)內(nèi)酰胺環(huán)連接的酶的催化機(jī)制,為未來以組合生物合成的方式構(gòu)建“非天然Capuramycin同系物庫”提供有益信息。2獲得的Albomycin生物合成信息,為此類化合物生物合成模式的建立提供依據(jù);研究負(fù)責(zé)鐵色素生物合成及耦合的酶,闡明其作用機(jī)制,為應(yīng)用基因工程、組合生物合成、以及半合成等策略建立一個(gè)“高鐵霉素”同系物庫提供依據(jù)。方法1目的基因的滅活與互補(bǔ),微生物發(fā)酵,A-503083F的分離純化,原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化,蛋白的異源表達(dá)及分離純化,體外酶催化,HPLC檢測(cè)酶活。2微生物發(fā)酵,目的基因的滅活與互補(bǔ),Albomycin鐵色素的分離純化及鑒定,原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化,鐵色素的異源表達(dá)及分離純化,HPLC檢測(cè)。結(jié)果1運(yùn)用基因敲除及組合生物學(xué)的技術(shù)手段成功獲得Capuramycin A-503083F的生產(chǎn)菌株;依據(jù)Capuramycin的化學(xué)結(jié)構(gòu),采用底物添加等手段優(yōu)化發(fā)酵條件,并采用SP-207、HW-40F及HPLC聯(lián)用分離純化獲得了503083F純品;對(duì)目的基因進(jìn)行異源表達(dá),并將目的產(chǎn)物進(jìn)行體外酶催化,對(duì)催化反應(yīng)進(jìn)行HPLC分析,已確證反應(yīng)發(fā)生。2依據(jù)Albomycin生物合成信息,分離純化獲得了Albomycin的鐵色素部分,為組合生物合成Albomycin鐵色素作標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照。運(yùn)用基因敲除及組合生物學(xué)的技術(shù)手段,對(duì)鐵色素生物合成基因簇進(jìn)行異源表達(dá),采用底物添加及調(diào)PH值等手段優(yōu)化了工程菌株發(fā)酵條件,為構(gòu)建鐵色素生物合成體系奠定基礎(chǔ)。結(jié)論1在發(fā)酵過程中采取底物添加及調(diào)PH值等手段可優(yōu)化菌株發(fā)酵條件。2采用宿主S.lividans TK-64可進(jìn)行Cap W和Albomycin鐵色素的異源表達(dá)。3本研究初步闡明負(fù)責(zé)內(nèi)酰胺環(huán)連接的酶的催化機(jī)制,并通過體外酶催化反應(yīng)獲得Capuramycin同系物,證明了體外構(gòu)建“非天然Capuramycin同系物庫”的可能性。4初步獲得的Albomycin鐵色素生物合成信息,為構(gòu)建“高鐵霉素”同系物庫提供有益信息。
【關(guān)鍵詞】：Capuramycin 內(nèi)酰胺環(huán) CapW 生物合成 Albomycin 鐵色素
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R914.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 引言10-14
• 第1章 新一代抗結(jié)核先導(dǎo)化合物Capuramycin內(nèi)酰胺環(huán)的生物方法改良14-33
• 1.1 材料與方法14-23
• 1.1.1 材料14-19
• 1.1.2 方法19-23
• 1.2 結(jié)果23-26
• 1.2.1 突變株的獲得23
• 1.2.2 野生株與突變株的HPLC結(jié)果對(duì)照23
• 1.2.3 對(duì)分離純化的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行HPLC分析23-24
• 1.2.4 將半制備收集液作質(zhì)譜圖進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證24
• 1.2.5 CapW的異源表達(dá)與分離純化融合蛋白的SDS-PAGE分析24-25
• 1.2.6 Capuramycin同系物的酶促合成HPLC分析25
• 1.2.7 對(duì)半制備收集液進(jìn)行質(zhì)譜分析25-26
• 1.3 討論26-31
• 1.3.1 由capU突變株富集 503083F的機(jī)制分析26-27
• 1.3.2 突變菌株的獲得27
• 1.3.3 發(fā)酵條件的優(yōu)化27
• 1.3.4 使用大孔吸附樹脂分離純化 503083F27-28
• 1.3.5 使用分子篩HW-40F進(jìn)一步分離純化 503083F28
• 1.3.6 冷凍干燥機(jī)干燥的必要性分析28
• 1.3.7 對(duì)分離純化的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行HPLC分析28-29
• 1.3.8 將收集液作質(zhì)譜圖進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證29
• 1.3.9 CapW的異源表達(dá)29
• 1.3.10 Capuramycin同系物的體外酶促合成進(jìn)行HPLC分析29
• 1.3.11 對(duì)半制備收集液進(jìn)行質(zhì)譜分析29-30
• 1.3.12 展望30-31
• 1.4 本章小結(jié)31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 第2章 “高鐵霉素”家族中典型代表Albomycin鐵色素的生物方法改良33-44
• 2.1 材料與方法33-37
• 2.1.1 材料33-34
• 2.1.2 方法34-37
• 2.2 結(jié)果37-38
• 2.2.1 已獲得的Albomycin生物合成相關(guān)信息37
• 2.2.2 對(duì)分離純化的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行HPLC分析37-38
• 2.2.3 對(duì)HPLC制備的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行紫外光譜分析38
• 2.2.4 對(duì)HPLC制備的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)譜分析38
• 2.3 討論38-41
• 2.3.1 Albomycin生物合成相關(guān)信息分析38-39
• 2.3.2 使用大孔吸附樹脂分離純化Albomycin鐵色素39
• 2.3.3 使用分子篩葡聚糖凝膠Bio Gel P-2 對(duì)Albomycin鐵色素的進(jìn)一步純化39
• 2.3.4 對(duì)分離純化的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行HPLC分析39-40
• 2.3.5 對(duì)分離純化的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行光譜分析40
• 2.3.6 對(duì)HPLC制備的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)譜確證40
• 2.3.7 展望40-41
• 2.4 本章小結(jié)41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 第3章 綜述 MraY轉(zhuǎn)位酶抑制劑——一類新型的抗菌藥物44-65
• 3.1 肽聚糖的生物合成44-46
• 3.2 篩選新型抗菌藥物的重要靶點(diǎn)——MraY轉(zhuǎn)位酶46-47
• 3.3 MraY轉(zhuǎn)位酶抑制劑47-58
• 3.3.1 核苷類抗生素48-57
• 3.3.2 其他抑制劑57-58
• 3.4 結(jié)論和展望58-59
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 結(jié)論65-66
• 致謝66-67
• 導(dǎo)師簡介67-68
• 作者簡介68-69
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集69

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉娟娟;核苷類抗生素Capuramycin與Albomycin結(jié)構(gòu)的優(yōu)化[D];華北理工大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：核苷類抗生素Capuramycin與Albomycin結(jié)構(gòu)的優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：365416