本文關(guān)鍵詞：哈爾滿的體內(nèi)外代謝與藥代動力學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:駱駝蓬總生物堿中的哈爾滿堿是治療阿爾茨海默癥(Alzheimer’s disease,AD)的潛在藥物,因此在前期研究的基礎(chǔ)上進行哈爾滿生物堿在大鼠的體內(nèi)外代謝與藥代動力學研究。方法:1)采用差速離心法制備大鼠肝微粒體,并對所制備的大鼠肝微粒體進行蛋白含量測定。2)采用UPLC-ESI-MS/MS法同時測定9種探針代謝產(chǎn)物的濃度,對大鼠肝微粒體中9種細胞色素P450酶的活性進行標定,并對大鼠肝微粒體中9種細胞色素P450亞型酶的代謝動力學進行了研究。3)采用UPLC-ESI-MS/MS法,對大鼠肝微粒體中II相葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性進行標定。4)采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀,對哈爾滿生物堿在大鼠肝微粒體及肝S9中的I、II相代謝產(chǎn)物進行鑒定與研究。5)采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀,對哈爾滿生物堿在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進行鑒定與研究。6)采用UPLC-ESI-MS/MS法,對哈爾滿生物堿及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的藥代動力學進行研究。結(jié)果:1)采用差速離心法,經(jīng)過勻漿、兩次離心及洗滌,成功制備得到了大鼠肝微粒體。經(jīng)計算,所得的大鼠肝微粒體的得率為32mg microsome protein/g liver。2)在優(yōu)化的色譜及質(zhì)譜條件下,對9種細胞色素P450酶催化產(chǎn)生的探針代謝產(chǎn)物進行了分析與測定,實驗結(jié)果表明大鼠肝微粒體內(nèi)沒有CYP2A6亞型酶的活性。此外,在對大鼠肝微粒體中9種細胞色素P450亞型酶的代謝動力學的研究中,采用GraphPad(Prism 5)進行數(shù)據(jù)擬合后,計算得到各亞型酶催化探針反應(yīng)的動力學參數(shù)Km和Vmax值及其酶促動力學曲線。根據(jù)Eadie-Hofstee作圖,可以得出,CYP3A4催化的睪酮羥基化符合希爾方程描述的動力學特征,而其他7種亞型酶催化的反應(yīng)均符合米氏方程所描述的典型的酶促反應(yīng)動力學特征。3)在優(yōu)化的色譜及質(zhì)譜條件下,我們對大鼠肝微粒體內(nèi)II相代謝酶UGT2B7催化產(chǎn)生的探針代謝產(chǎn)物進行了分析與測定,結(jié)果表明本實驗室所制備的大鼠肝微粒體具有UGT2B7亞型酶的活性。4)采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀,對哈爾滿生物堿在大鼠肝微粒體及肝S9中的I、II相代謝產(chǎn)物進行鑒定與研究,研究結(jié)果顯示,一共鑒定了9個體外代謝產(chǎn)物,其中包括4個I相代謝產(chǎn)物,5個II相代謝產(chǎn)物(3個葡萄糖醛酸化物和2個硫酸化物)。5)采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀,對哈爾滿生物堿在大鼠體內(nèi)的I、II相代謝產(chǎn)物進行鑒定與研究,研究結(jié)果顯示,一共鑒定了20個體內(nèi)代謝產(chǎn)物,其中尿液中11個代謝產(chǎn)物,糞便中16個代謝產(chǎn)物,膽汁中16個代謝產(chǎn)物以及血漿中10個代謝產(chǎn)物;此外,結(jié)果還顯示膽汁和糞便清除是主要的排泄途徑。6)哈爾滿生物堿及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的藥代動力學研究結(jié)果表明,在靜脈(1.0mg/kg)和口服(30.0mg/kg)給予哈爾滿生物堿后,哈爾滿及其10個代謝產(chǎn)物同時被檢測。本研究中,通過半定量方法計算代謝產(chǎn)物的濃度,成功計算得到哈爾滿及其10個代謝產(chǎn)物的藥時曲線及藥代動力學參數(shù)。此外,計算所得哈爾滿的絕對生物利用度為19.41%。研究還結(jié)果表明,硫酸化是哈爾滿生物堿在大鼠體內(nèi)的主要代謝途徑。結(jié)論:通過數(shù)據(jù)整合與代謝輪廓分析,推測得到了哈爾滿生物堿在大鼠的體內(nèi)外過程與代謝途徑,體內(nèi)外一共鑒定了21個哈爾滿堿的代謝產(chǎn)物(I相和II相),并了解了哈爾滿生物堿及其10個代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的藥代動力學過程。
【關(guān)鍵詞】：哈爾滿 大鼠肝微粒體 代謝 藥代動力學
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 研究內(nèi)容15-87
• 1 大鼠肝微粒體的制備及蛋白含量的測定15-18
• 1.1 儀器與試藥15-16
• 1.2 方法與結(jié)果16-17
• 1.3 討論17-18
• 2 大鼠肝微粒體中細胞色素P450酶的反應(yīng)表征及活性標定18-28
• 2.1 儀器與試藥19
• 2.2 方法與結(jié)果19-23
• 2.3 討論23-28
• 3 大鼠肝微粒體中葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)表征及活性標定28-31
• 3.1 儀器與試藥28-29
• 3.2 方法與結(jié)果29-30
• 3.3 討論30-31
• 4 大鼠肝微粒體及肝S9中哈爾滿生物堿代謝產(chǎn)物的鑒定31-48
• 4.1 儀器與試藥31-32
• 4.2 方法與結(jié)果32-47
• 4.3 討論47-48
• 5 哈爾滿生物堿在大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物的鑒定48-65
• 5.1 儀器與試藥48-49
• 5.2 方法與結(jié)果49-64
• 5.3 討論64-65
• 6 哈爾滿生物堿在大鼠體內(nèi)的藥代動力學研究65-87
• 6.1 儀器與試藥65-66
• 6.2 方法與結(jié)果66-81
• 6.3 討論81-87
• 小結(jié)87-88
• 致謝88-89
• 參考文獻89-96
• 綜述96-132
• 參考文獻114-132
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學位論文132-133
• 導師評閱表133

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李靜;;認知功能障礙老年人血清性激素水平檢測[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2007年05期

2 李婷婷;;何首烏對增強青少年記憶、抗疲勞作用進行研究的文獻再評價[J];中外醫(yī)療;2011年14期

3 羅紅波;楊金升;石向群;李蕓;楊期東;張志強;尹榕;;Aβ誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡通路的啟動及二苯乙烯苷的影響[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2011年06期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 鮑娟;GGA誘導AD大鼠海馬HSP70表達及其抗細胞凋亡機制的研究[D];中南大學;2008年

2 羅紅波;二苯乙烯苷對AD鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響及機制研究[D];中南大學;2008年

3 路艷;補腎法對骨髓抑制模型骨髓干細胞的調(diào)控機理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2012年

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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4 王晶;補元聰腦湯對老年性癡呆大鼠行為學及膽堿能系統(tǒng)的干預作用[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2010年

5 陳俊;腦肽對小鼠學習記憶的改善作用及機制初探[D];沈陽藥科大學;2008年

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本文編號：364915