本文關(guān)鍵詞：林生地霉體內(nèi)及體外藥物敏感性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:林生地霉(Geotricum sivicola)作為地霉屬中較罕見(jiàn)的一個(gè)種,是新近發(fā)現(xiàn)的條件致病菌。自2002年及2005年,我科先后從一例膿癬患者皮損處,及一例中毒性表皮壞死松解癥患者血液中分離出林生地霉后,首次證實(shí)了林生地霉可以感染人類(lèi)甚至引起系統(tǒng)感染[1-2]。據(jù)報(bào)道,近年來(lái)?xiàng)l件致病菌引起人類(lèi)感染的病例逐年增加,這一現(xiàn)象緣于免疫低下宿主群體數(shù)目的逐漸龐大、抗生素的不合理使用、放化療技術(shù)的廣泛應(yīng)用和各種侵入性檢查及外科手術(shù)的發(fā)展,所以條件致病菌,尤其是罕見(jiàn)條件致病菌引起的感染事件應(yīng)引起足夠重視。在臨床工作中條件致病菌感染的治療效果欠佳,雖然目前藥品市場(chǎng)上有多種抗真菌藥物可供選擇,但各類(lèi)藥物對(duì)不同真菌的敏感性差異較大,耐藥菌株的報(bào)道亦逐年增多。所以,及時(shí)發(fā)現(xiàn)條件致病菌種,并研究尋找對(duì)其敏感的藥物,以指導(dǎo)日后相關(guān)臨床工作顯得尤為重要。我科已將林生地霉的生物學(xué)特性、致病性等進(jìn)行了較詳盡的研究,但關(guān)于林生地霉感染的敏感性藥物,在國(guó)內(nèi)及國(guó)際上尚無(wú)相關(guān)依據(jù)。本研究一方面采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法,通過(guò)比較各用藥組小鼠脾臟組織真菌逆培養(yǎng)陽(yáng)性率的變化及脾臟組織載菌量的變化,以分析在動(dòng)物體內(nèi)林生地霉對(duì)臨床常用抗真菌藥物的敏感性。另一方面,采用了美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)于2002年修訂完成的M27-A2方案推薦的肉湯稀釋法[3]對(duì)各抗真菌藥物,即特比萘芬(TER)、兩性霉素B(Am B)、氟胞嘧啶(5-FC)、氟康唑(FCZ)和伊曲康唑(ICZ)對(duì)林生地霉的最低抑菌濃度(MIC值)進(jìn)行測(cè)定。林生地霉屬酵母樣真菌,可用NCCLS推薦的抗真菌藥物對(duì)酵母樣真菌敏感性的界定標(biāo)準(zhǔn)來(lái)對(duì)實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果進(jìn)行評(píng)判,從而得到林生地霉在體外對(duì)該五種抗真菌藥物的敏感性。此方法為目前世界上公認(rèn)的最具權(quán)威性的藥敏實(shí)驗(yàn)方法。本實(shí)驗(yàn)對(duì)林生地霉的藥物敏感性進(jìn)行深化研究,對(duì)臨床上林生地霉感染的治療具有一定的指導(dǎo)意義。方法:1動(dòng)物體內(nèi)的藥敏實(shí)驗(yàn)1.1林生地霉感染動(dòng)物模型的制作將小鼠隨機(jī)分為特比萘芬治療組、兩性霉素B治療組、5-氟胞嘧啶治療組、氟康唑治療組、伊曲康唑治療組和未治療組,每一小組又分為逆培養(yǎng)陽(yáng)性率觀察組和組織載菌量觀察組,通過(guò)給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法,制作免疫低下小鼠模型,后將菌懸液通過(guò)腹腔注射的途徑接種到小鼠體內(nèi),制作成為林生地霉感染的動(dòng)物模型[4]。1.2給藥途徑及給藥量各抗真菌藥物因?yàn)椴煌o藥途徑會(huì)導(dǎo)致在動(dòng)物體內(nèi)吸收率不同,所以選擇其吸收率最高的給藥途徑,結(jié)合藥典給出的用藥劑量,自菌懸液接種2小時(shí)后給藥,1天1次,連續(xù)5天[5]。1.3組織真菌逆培養(yǎng)給藥結(jié)束后將小鼠處死,分離其脾臟組織,行組織真菌逆培養(yǎng),計(jì)算其各組逆培養(yǎng)陽(yáng)性率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。1.4組織載菌量測(cè)定將各組小鼠處死后解剖,將脾臟于組織研磨器中研碎,行組織載菌量測(cè)定,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2抗真菌藥物對(duì)林生地霉MIC值的測(cè)定2.1菌懸液的制備將菌種復(fù)蘇并轉(zhuǎn)種后在無(wú)菌條件下,用生理鹽水沖洗平面,在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù),再用RPMI-1640液體培養(yǎng)基稀釋,最終得到濃度為1~5×105cfu/ml的林生地霉菌懸液及質(zhì)控菌株菌懸液作為接種物。2.2抗真菌藥物接種液的制備根據(jù)NCCLS M27-A2方案,將各抗真菌藥物分別溶解,配成各藥物的貯存液,保存于-20℃冰箱里備用,使用時(shí)常溫下解凍并用RPMI-1640液體培養(yǎng)基倍比稀釋為10個(gè)遞減濃度為藥物的接種濃度。2.3藥液及菌懸液的接種將遞減濃度的各組藥液依次加入96孔板的1~10列,將不含藥物的培養(yǎng)基加入11~12列,后將菌懸液依次加入1~11列中,同時(shí)在第12列再加入液體培養(yǎng)基,即96孔板中1~10列為藥物實(shí)驗(yàn)組,11列為生長(zhǎng)對(duì)照組,12列為空白對(duì)照組。在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天后讀取數(shù)據(jù)。2.4結(jié)果判讀結(jié)合NCCLS M27-A2方案給出的建議,判讀5種抗真菌藥物對(duì)受試菌及質(zhì)控菌的MIC值,將測(cè)得的質(zhì)控菌的MIC值與其參考范圍進(jìn)行對(duì)比,在參考范圍內(nèi)才可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)有效,并將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果:1動(dòng)物體內(nèi)藥敏實(shí)驗(yàn)1.1組織真菌逆培養(yǎng)陽(yáng)性率比較特比萘芬治療組、兩性霉素B治療組及5-氟胞嘧啶治療組與未治療組比較均有明顯差異(P0.05),而氟康唑治療組及伊曲康唑治療組的逆培養(yǎng)陽(yáng)性率與未治療組比較無(wú)明顯差(P0.05);其中,特比萘芬組陽(yáng)性率較其他組均低,兩兩比較均有顯著性差異(P0.05)(Table 3)。1.2組織載菌量比較特比萘芬治療組、兩性霉素B治療組、5-氟胞嘧啶治療組及氟康唑治療組與未治療組脾臟載菌量比較,載菌量均較低,有明顯差異(P0.05),而伊曲康唑治療組與未治療組載菌量比較,無(wú)明顯差異(P0.05);特比萘芬治療組與5-氟胞嘧啶治療組、氟康唑治療組比較,載菌量最低,有明顯差異(P0.05);5-氟胞嘧啶治療組與氟康唑治療組小鼠脾臟載菌量比較,無(wú)明顯差異(P0.05)(Table 4)。2抗真菌藥物對(duì)林生地霉的MIC值(μg/ml)特比萘芬:0.01、兩性霉素B:0.4、5-氟胞嘧啶:2、氟康唑:2.69、伊曲康唑:0.25。林生地霉對(duì)它們的敏感性分別為:對(duì)特比萘芬、兩性霉素B、5-氟胞嘧啶、氟康唑均為敏感,對(duì)伊曲康唑?yàn)閯┝恳蕾囆悦舾?Table5)。結(jié)論:1特比萘芬、兩性霉素B及5-氟胞嘧啶均可有效降低林生地霉感染的脾臟組織逆培養(yǎng)陽(yáng)性率,其中以特比萘芬效果最強(qiáng),而氟康唑和伊曲康唑則無(wú)明顯作用。2特比萘芬、兩性霉素B、5-氟胞嘧啶及氟康唑均可顯著降低林生地霉感染的脾臟組織載菌量,其中以特比萘芬效果最為顯著,而伊曲康唑在降低脾臟組織載菌量方面無(wú)明顯作用。3在體外藥敏實(shí)驗(yàn)中,林生地霉對(duì)特比萘芬、兩性霉素B、5-氟胞嘧啶及氟康唑均敏感,而對(duì)伊曲康唑則表現(xiàn)為劑量依賴性敏感。
【關(guān)鍵詞】：林生地霉 動(dòng)物體內(nèi)藥敏實(shí)驗(yàn) 肉湯稀釋法 最低抑菌濃度 敏感性
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫(xiě)12-13
• 前言13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-28
• 附表28-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述 林生地霉的生物學(xué)特性與致病性的實(shí)驗(yàn)室研究39-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：林生地霉體內(nèi)及體外藥物敏感性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：353789