本文關(guān)鍵詞：多西他賽影響內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為及抑制其遷移機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)一直是威脅人類(lèi)健康的幾大殺手之一,目前最好的治療手段是在病變部位置入藥物洗脫支架(DESs),可一定程度上減少血管再狹窄的幾率。但臨床結(jié)果表明,DESs雖降低了血管再狹窄,卻大大延遲了支架內(nèi)皮化的時(shí)間,治療效果不理想。究其原因,DESs上攜帶的抗增殖類(lèi)藥物的使用,這類(lèi)藥物多為紫杉醇及其衍生物等,他們大多無(wú)細(xì)胞特異性,在抑制中膜細(xì)胞增殖的同時(shí);也抑制了內(nèi)膜細(xì)胞的增殖,使損傷的內(nèi)膜未能快速修復(fù)。然而這些藥物延遲內(nèi)皮化的詳細(xì)機(jī)理卻不清楚,特別是如何延遲內(nèi)皮細(xì)胞快速遷移至損傷位點(diǎn)的機(jī)制�；诖�,本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)為細(xì)胞模型,體外探究紫杉醇的類(lèi)似物多西他賽(DTX)對(duì)HUVECs的影響及其作用機(jī)制,重點(diǎn)關(guān)注細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移的經(jīng)典信號(hào)通路ROCK是否參與了DTX相關(guān)的HUVECs遷移。試圖揭示DTX延遲內(nèi)皮化的原因,探究快速內(nèi)皮化潛在靶點(diǎn),且為DTX的臨床應(yīng)用提供更廣泛的理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1 DTX影響HUVECs生物學(xué)行為的濃度依賴(lài)性:細(xì)胞增殖結(jié)果表明,中等劑量的DTX(0.5 ng/ml,5 ng/ml)即可顯著抑制HUVECs的增殖且具有濃度和時(shí)間依賴(lài)性;流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明,高劑量的DTX(50 ng/ml)出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞毒性,顯著促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡(包括早期凋亡,晚期凋亡和壞死);細(xì)胞粘附結(jié)果表明,DTX僅延遲了細(xì)胞的粘附時(shí)間并未影響其粘附總數(shù);單個(gè)HUVECs(活細(xì)胞工作站)和群體細(xì)胞(劃痕法和transwell法)的運(yùn)動(dòng)和遷移結(jié)果表明,低劑量的DTX(0.05 ng/ml)可顯著抑制單個(gè)細(xì)胞和群體細(xì)胞的遷移。表明DTX抑制HUVECs遷移的效應(yīng)更加敏感。2 DTX影響細(xì)胞增殖和的凋亡相關(guān)基因的表達(dá):采用免疫熒光和免疫印跡方法分別對(duì)反映細(xì)胞增殖情況的蛋白PCNA和表征細(xì)胞凋亡的蛋白p53的表達(dá)水平進(jìn)行了定性定量分析。研究結(jié)果表明:DTX濃度愈高,PCNA的表達(dá)越低且p53的表達(dá)越高,說(shuō)明DTX通過(guò)促進(jìn)促凋亡基因p53的表達(dá)加速了細(xì)胞的凋亡,這種效應(yīng)在DTX的濃度為50 ng/ml時(shí)最為顯著。3 DTX抑制HUVECs遷移的機(jī)制:DTX顯著抑制了黏著斑蛋白Integrinβ1的表達(dá),降低了ROCK信號(hào)通路中MLC的磷酸化水平,且在ROCK的抑制劑Y-27632預(yù)處理細(xì)胞后這種效應(yīng)愈加顯著,還大大降低了細(xì)胞的遷移數(shù)目。說(shuō)明DTX可能是通過(guò)Integrinβ1-ROCK-(p)MLC信號(hào)通路抑制細(xì)胞的遷移。4 DTX影響了HUVECs的功能:免疫熒光和免疫印跡定性定量研究表明,中等劑量的DTX(5 ng/ml)顯著抑制了HUVECs細(xì)胞間粘附因子PECAM-1的表達(dá),表明其在一定程度上減弱了細(xì)胞間緊密程度,使得細(xì)胞間的粘附力降低。此外,DTX還顯著降低了HUVECs分泌NO的能力,表明DTX破壞了血管正常的收縮和舒張。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)皮化延遲 多西他賽 內(nèi)皮細(xì)胞 細(xì)胞行為 遷移機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-7
• 主要縮略詞表7-11
• 1 緒論11-21
• 1.1 內(nèi)皮化延遲是誘發(fā)血管再狹窄的重要原因11
• 1.2 抑制血管再狹窄的藥物11-13
• 1.2.1 抗再狹窄藥物的分類(lèi)11-13
• 1.2.2 抗增殖藥物的應(yīng)用瓶頸13
• 1.3 多西他賽在心血管疾病中的研究現(xiàn)狀13-17
• 1.3.1 多西他賽的作用機(jī)制13-14
• 1.3.2 多西他賽抑制內(nèi)膜增生14-15
• 1.3.3 多西他賽抑制血管新生15-16
• 1.3.4 多西他賽抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移16-17
• 1.4 研究?jī)?nèi)容、意義及技術(shù)路線17-19
• 1.4.1 研究?jī)?nèi)容17-18
• 1.4.2 問(wèn)題的提出和研究意義18-19
• 1.5 技術(shù)路線19-21
• 2 多西他賽影響內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為的濃度依賴(lài)性21-29
• 2.1 引言21
• 2.2 儀器、耗材和試劑21-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法22-23
• 2.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)22
• 2.3.2 細(xì)胞的增殖22-23
• 2.3.3 細(xì)胞的凋亡23
• 2.3.4 統(tǒng)計(jì)分析23
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-27
• 2.4.1 多西他賽對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴(lài)行為23-26
• 2.4.2 多西他賽促進(jìn)細(xì)胞凋亡且成濃度依賴(lài)性26-27
• 2.5 小結(jié)與討論27-29
• 3 多西他賽對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞鋪展，，運(yùn)動(dòng)和遷移的影響29-39
• 3.1 引言29
• 3.2 儀器、耗材和試劑29-30
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 3.3.1 細(xì)胞的粘附30
• 3.3.2 群體細(xì)胞的遷移30-31
• 3.3.3 單個(gè)細(xì)胞的遷移31-32
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-37
• 3.4.1 多西他賽延遲了內(nèi)皮細(xì)胞的粘附32-34
• 3.4.2 多西他賽抑制群體細(xì)胞遷移呈濃度依賴(lài)性34-36
• 3.4.3 多西他賽抑制單個(gè)細(xì)胞的遷移呈濃度依賴(lài)性36-37
• 3.5 小結(jié)與討論37-39
• 4 多西他賽影響血管內(nèi)皮細(xì)胞鋪展，運(yùn)動(dòng)和遷移的機(jī)制39-53
• 4.1 引言39-40
• 4.2 材料、試劑和儀器40-41
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法41-43
• 4.3.1 免疫熒光41-42
• 4.3.2 免疫印跡42-43
• 4.3.3 細(xì)胞的遷移43
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-49
• 4.4.1 多西他賽抑制細(xì)胞中Integrin β1 的表達(dá)且降低了MLC的磷酸化水平43-46
• 4.4.2 多西他賽通過(guò)降低內(nèi)皮細(xì)胞MLC的磷酸化水平抑制其遷移46-47
• 4.4.3 多西他賽通過(guò)抑制PCNA的表達(dá)抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖47-49
• 4.4.4 多西他賽通過(guò)P53基因的表達(dá)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡49
• 4.5 小結(jié)與討論49-53
• 5 多西他賽對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響53-63
• 5.1 引言53
• 5.2 材料、試劑和儀器53-55
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法55-56
• 5.3.1 免疫熒光和免疫印跡55
• 5.3.2 VEGF分泌的ELISA檢測(cè)55
• 5.3.3 NO的分泌情況55
• 5.3.4 總抗氧化（SOD）能力55-56
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-60
• 5.4.1 多西他賽破壞了內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接56-59
• 5.4.2 多西他賽可影響內(nèi)皮細(xì)胞功能59-60
• 5.5 小結(jié)與討論60-63
• 6 總結(jié)和展望63-65
• 6.1 總結(jié)63-64
• 6.2 展望64-65
• 致謝65-67
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 附錄73-75
• A. 作者攻讀碩士期間發(fā)表的論文目錄73
• B. 作者攻讀碩士學(xué)位期間參與的科研項(xiàng)目73-75

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  本文關(guān)鍵詞：多西他賽影響內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為及抑制其遷移機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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