本文關(guān)鍵詞：Wnt5a信號通路介導(dǎo)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑引起的神經(jīng)炎癥研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)作為高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)的一個核心組成部分,被廣泛用于抑制人類免疫缺陷病毒(HIV)的復(fù)制和增殖。然而,長期服用NRTI類藥物可引發(fā)神經(jīng)毒性,主要表現(xiàn)為神經(jīng)炎癥和多種神經(jīng)認知障礙,如阿耳茨海默氏病、帕金森氏病和慢性疼痛等。盡管NRTI用于治療艾滋病已有數(shù)十年,但目前對于NRTI引發(fā)神經(jīng)炎癥的具體機制還是不甚明了。Wnt5a是非經(jīng)典Wnt信號的主要配體之一,在組織發(fā)育和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮重要作用。最近的研究發(fā)現(xiàn),Wnt5a參與和調(diào)控多種神經(jīng)炎癥反應(yīng)。所以我們推測Wnt5a在NRTI導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥中可能起到關(guān)鍵性作用。本研究不僅有助于理解NRTI在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中對神經(jīng)炎癥發(fā)生的影響,而且將為治療HIV-1相關(guān)的神經(jīng)炎癥提供潛在的藥物靶點。為了探究NRTI的治療對中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同組織中炎癥因子表達情況的影響,我們分別用NRTI類藥物AZT(100 mg/kg;sc./days)、3TC(50 mg/kg;sc./days)和D4T(10 mg/kg;sc./days)對C57Bl/6小鼠進行2、5、10和14天的處理,并于NRTI類藥物給藥結(jié)束時收集中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織。通過Western blotting分析NRTI處理不同時間后小鼠大腦皮層、海馬和脊髓組織中炎癥因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表達水平。Western blotting結(jié)果表明NRTI處理后,炎癥因子在三種神經(jīng)組織中都顯著性增加。我們分別使用GFAP和CD11b標記星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞,進一步研究NRTI通過激活哪一類神經(jīng)細胞來調(diào)控免疫反應(yīng)。免疫染色結(jié)果表明,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中NRTI可以顯著激活星形膠質(zhì)細胞,然而小膠質(zhì)細胞則沒有被明顯激活。確定NRTI在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中引起神經(jīng)炎癥后,我們通過HE染色進一步研究了NRTI對中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織病變的影響情況。組織形態(tài)學(xué)分析表明,短期使用NRTI類藥物未引起海馬和脊髓組織發(fā)生顯著病變。近期有報道發(fā)現(xiàn)Wnt5a在皮層最初形成時對IL-1β和TNF-α具有重要的調(diào)節(jié)作用,我們推測引起神經(jīng)炎癥的NRTI誘導(dǎo)Wnt5a表達。通過Western blotting和免疫組織化學(xué)染色的方法檢測到中樞神經(jīng)系統(tǒng)中NRTI可明顯上調(diào)Wnt5a,初步表明NRTI可能激活Wnt5a。為了進一步研究Wnt5a對NRTI誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的作用,我們利用Wnt5a的特異性拮抗劑BOX5來抑制Wnt5a。Western blotting結(jié)果表明,BOX5可以顯著性降低NRTI誘導(dǎo)的炎癥因子上調(diào)。而且,免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明,BOX5顯著性抑制了NRTI對星型膠質(zhì)細胞的激活作用。綜上所述,NRTI類藥物導(dǎo)致了神經(jīng)炎癥,并且是通過Wnt5a信號通路介導(dǎo)的。
【關(guān)鍵詞】：核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 神經(jīng)炎癥 星型膠質(zhì)細胞 Wnt5a
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略語9-14
• 第一章 緒論14-24
• 1. 引言14-22
• 1.1 HIV-1 研究現(xiàn)狀14-15
• 1.2 NRTI研究現(xiàn)狀15-17
• 1.3 神經(jīng)炎癥研究概況17-19
• 1.4 Wnt 5a研究進展19-22
• 2. 實驗設(shè)計方案22-24
• 2.1 實驗的目的和意義22-23
• 2.2 實驗設(shè)計流程圖23-24
• 第二章 NRTI 誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥研究24-44
• 1. 實驗材料與試劑24-28
• 2. 實驗方法28-31
• 2.1 實驗分組28-29
• 2.2 實驗組織的獲取29
• 2.3 Western blotting檢測炎癥因子的表達29-31
• 3. 實驗結(jié)果與分析31-42
• 3.1 NRTI對大腦皮層的炎癥因子表達影響31-35
• 3.2 NRTI對海馬炎癥因子表達影響35-39
• 3.3 NRTI對脊髓炎癥因子表達影響39-42
• 4. 討論42-44
• 第三章 NRTI對中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細胞活性的影響44-50
• 1. 實驗材料及試劑44-45
• 2. 實驗方法45-47
• 2.1 實驗分組45
• 2.2 實驗組織的獲取45-46
• 2.3 石蠟切片制備46
• 2.4 免疫組織化學(xué)染色檢測膠質(zhì)細胞的活化46-47
• 3. 實驗結(jié)果及分析47-49
• 3.1 NRTI對星型膠質(zhì)細胞活性的影響47-48
• 3.2 NRTI對小膠質(zhì)細胞活性的影響48-49
• 4. 討論49-50
• 第四章 NRTI對中樞神經(jīng)系統(tǒng)海馬和脊髓形態(tài)結(jié)構(gòu)變化的影響50-53
• 1. 實驗材料與試劑50
• 2. 實驗方法50-51
• 2.1 實驗分組50
• 2.2 實驗組織獲取50
• 2.3 石蠟切片制備50
• 2.4 HE染色觀察海馬和脊髓的形態(tài)結(jié)構(gòu)50-51
• 3. 實驗結(jié)果及分析51
• 3.1 海馬的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化51
• 3.2 脊髓的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化51
• 4. 討論51-53
• 第五章 NRTI對中樞神經(jīng)系統(tǒng)Wnt5a表達的影響53-58
• 1. 實驗材料與試劑53
• 2. 實驗方法53-54
• 2.1 實驗分組53
• 2.2 實驗組織的獲取53
• 2.3 Western blotting檢測Wnt5a的表達53
• 2.4 免疫組織化學(xué)染色檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)Wnt5a變化53-54
• 3. 實驗結(jié)果及分析54-57
• 3.1 NRTI對大腦皮層Wnt5a表達的影響54-55
• 3.2 NRTI對海馬Wnt5a表達的影響55
• 3.3 NRTI對脊髓Wnt5a表達的影響55-56
• 3.4 免疫組織化學(xué)染色檢測Wnt5a變化56-57
• 4. 討論57-58
• 第六章 BOX5對NRTI引起神經(jīng)炎癥的影響58-68
• 1. 實驗材料與試劑58
• 2. 實驗方法58-59
• 2.0 實驗分組58
• 2.1 鼻腔滴注BOX558-59
• 2.2 實驗組織的獲取59
• 2.3 Western blotting檢測炎癥因子和Wnt5a的表達59
• 2.4 免疫組織化學(xué)染色檢測星型膠質(zhì)細胞的活化59
• 3. 實驗結(jié)果及分析59-66
• 3.1 BOX5對大腦皮層NRTI引起神經(jīng)炎癥的影響59-62
• 3.2 BOX5對海馬NRTI引起神經(jīng)炎癥的影響62-64
• 3.3 BOX5對脊髓NRTI引起神經(jīng)炎癥的影響64-66
• 3.4 BOX5對中樞神經(jīng)系統(tǒng)NRTI活化星型膠質(zhì)細胞的影響66
• 4. 討論66-68
• 第七章 結(jié)論68-69
• 參考文獻69-75
• 致謝75

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  本文關(guān)鍵詞：Wnt5a信號通路介導(dǎo)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑引起的神經(jīng)炎癥研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：346228