本文關鍵詞：自由基清除劑Tempol的抗缺氧作用及其分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：1.通過整體動物實驗考察Tempol的抗缺氧作用,評價Tempol對缺氧小鼠的保護作用,初步闡述Tempol的抗缺氧機制。 2.建立PC12細胞、H9C2細胞缺氧模型,從神經(jīng)保護與心肌保護兩方面考察缺氧對細胞的損傷作用,篩選Tempol作用于兩種缺氧細胞的最佳濃度,初步探討Tempol對缺氧細胞保護的分子機制。 3.以HIF-1α為中心,通過研究HIF-1α、抗氧化體系、ROS、凋亡的關系,進一步探討Tempol保護缺氧H9C2細胞可能的分子機制。 方法：1.采用小鼠常壓密閉缺氧實驗,考察Tempol對缺氧小鼠存活時間的影響,確定Tempol的抗缺氧作用,然后采用低壓氧艙模擬急進高原缺氧環(huán)境,對小鼠心肌與腦組織相關缺氧與生化指標LD、LDH、SOD、MDA進行測定,初步闡述Tempol的抗缺氧機制。 2.在缺氧條件下培養(yǎng)PC12細胞、H9C2細胞,觀察缺氧對細胞形態(tài)的影響,評價缺氧對細胞的損傷情況；通過MTT法篩選Tempol作用于缺氧細胞的最佳濃度,對缺氧細胞內(nèi)ROS、SOD、MDA、LDH、T-AOC進行測定,采用實時熒光定量PCR法對缺氧細胞內(nèi)HIF-1α、VEGF、Caspase-3mRNA表達進行檢測,采用Western-blot法對缺氧細胞內(nèi)HIF-1α、VEGF蛋白表達進行檢測。 3.用YC-1阻斷HIF-1α表達,考察Tempol作用于缺氧H9C2細胞后,對ROS、HIF-1α、SOD、CAT以及細胞凋亡的影響,進一步研究Tempol可能的抗缺氧機制。 結(jié)果：1.小鼠常壓密閉缺氧實驗結(jié)果顯示,Tempol低、中、高劑量均能夠顯著的延長缺氧小鼠的存活時間(P0.01),高劑量組延長率達到了64.3%,延長時間比作為陽性藥的乙酰唑胺時間長,說明Tempol對缺氧小鼠具有較好的保護作用。 模擬高原缺氧實驗結(jié)果顯示,與正常組相比較,缺氧能夠升高心肌、腦組織內(nèi)LD、LDH、MDA的含量(P0.01),降低SOD的活性(P0.01),經(jīng)Tempol預處理后,缺氧小鼠組織內(nèi)LD、LDH、MDA含量有所降低(P0.01),SOD活性顯著的升高(P0.01)。 2.缺氧環(huán)境能明顯抑制PC12、H9C2細胞的活性,Tempol終濃度為1×10-(?)mol·L-1能夠顯著增加細胞的存活率(P0.01),降低培養(yǎng)基中LDH的含量(P0.01),有效保護細胞膜的完整性；能夠增加細胞內(nèi)SOD、T-AOC活力(P0.01),提高抗氧化能力,減少自由基與MDA的堆積(P0.01)：此外,Tempol還能夠降低心肌細胞系H9C2細胞內(nèi)特異性指標CK的活力(P0.01),減少細胞的凋亡,提高細胞的存活率。 與缺氧模型組相比較,Tempol在缺氧36h后能夠顯著升高PC12細胞HIF-la. VEGF mRNA與蛋白的表達水平(P0.01),在缺氧12h后能夠顯著的降低缺氧PC12細胞內(nèi)Caspase-3mRNA的表達(P0.01)。 與缺氧模型組相比較,Tempol在缺氧24h后能夠顯著升高缺氧H9C2細胞HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表達(P0.01),降低Caspase-3mRNA的表達(P0.01)。 3.YC-1終濃度為4×10-5mol·L-1寸能夠有效阻斷缺氧后H9C2細胞內(nèi)HIF-1α的表達,從而導致缺氧H9C2細胞內(nèi)VEGF. SOD. CAT表達也有所降低：Tempol能夠升高YC-1阻斷HIF-1α后H9C2細胞內(nèi)HIF-1α、VEGF、SOD、CAT mRNA與蛋白的表達,降低Caspase-3mRNA與蛋白的表達,降低細胞凋亡結(jié)論：1.動物缺氧實驗結(jié)果表明,Tempol具有抗缺氧作用,其機制可能是通過升高SOD的活性,降低LD、LDH、MDA的含量來實現(xiàn)的。 2Tempol對缺氧PC12細胞和H9C2細胞具有明顯的保護作用,其機制可能是通過清除胞內(nèi)產(chǎn)生的過多的ROS,增加胞內(nèi)抗氧化能力,降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的堆積,保護細胞膜的完整性,升高HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表達,降低Caspase-3的表達,降低細胞的凋亡來實現(xiàn)的。 3.Tempol對缺氧H9C2細胞的保護機制很可能是通過升高HIF-1α表達,激活部分VEGF、SOD、CAT的高表達,增加抗氧化能力,清除過多自由基,降低細胞的凋亡來實現(xiàn)的,具體機制有待更進一步的研究。
【關鍵詞】：Tempol PC12細胞 H9C2細胞 抗缺氧 抗氧化 HIF-1a ROS
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R966
【目錄】：

• 英文縮略詞表3-4
• 中文摘要4-6
• Abstract6-14
• 第一章 研究背景與研究內(nèi)容14-26
• 1.1 研究背景14-21
• 1.1.1 研究意義14-15
• 1.1.2 國內(nèi)外研究概況15-21
• 1.2 研究內(nèi)容和技術路線21-23
• 1.2.1 研究內(nèi)容21-22
• 1.2.2 技術路線22-23
• 參考文獻23-26
• 第二章 Tempol抗缺氧藥效學研究26-33
• 摘要26-27
• 2.1 材料27
• 2.1.1 主要材料27
• 2.1.2 主要儀器27
• 2.2 方法27-28
• 2.2.1 小鼠常壓密閉缺氧實驗27-28
• 2.2.2 模擬8000m急性高原缺氧實驗28
• 2.2.3 統(tǒng)計方法28
• 2.3 實驗結(jié)果28-30
• 2.3.1 小鼠常壓密閉缺氧實驗28-29
• 2.3.2 模擬8000m急性高原缺氧實驗29-30
• 2.4 結(jié)論30-32
• 參考文獻32-33
• 第三章 Tempol對缺氧PC12細胞的保護作用及其機制研究33-52
• 摘要33-34
• 3.1 材料34-35
• 3.1.1 主要材料34
• 3.1.2 主要儀器34-35
• 3.1.3 試劑的配制35
• 3.2 方法35-38
• 3.2.1 PC12細胞培養(yǎng)35
• 3.2.2 PC12細胞缺氧處理35
• 3.2.3 HE染色觀察Tempol對缺氧PC12細胞形態(tài)的影響35-36
• 3.2.4 MTT法檢測Tempol對缺氧PC12細胞活性的影響36
• 3.2.5 Tempol對缺氧PC12細胞中ROS含量的影響36
• 3.2.6 Tempol對缺氧PC12細胞LDH、SOD、MDA、T-AOC的影響36
• 3.2.7 Tempol對缺氧PC12細胞缺氧相關基因表達的影響36-37
• 3.2.8 Tempol對缺氧PC12細胞HIF-1α、VEGF蛋白表達的影響37
• 3.2.9 統(tǒng)計學方法37-38
• 3.3 結(jié)果38-49
• 3.3.1 缺氧對PC12細胞形態(tài)的影響38
• 3.3.2 MTT法檢測缺氧環(huán)境對PC12細胞活性的影響38-39
• 3.3.3 MTT法檢測Tempol對缺氧PC12細胞活力的影響39
• 3.3.4 HE染色觀察Tempol對缺氧PC12細胞形態(tài)的影響39-40
• 3.3.5 Tempol對缺氧PC12細胞ROS含量的影響40-42
• 3.3.6 Tempol對缺氧PC12細胞LDH的影響42
• 3.3.7 Tempol對缺氧PC12細胞SOD的影響42-43
• 3.3.8 Tempol對缺氧PC12細胞T-AOC的影響43-44
• 3.3.9 Tempol對缺氧PC12細胞MDA的影響44
• 3.3.10 Tempol對缺氧PC12細胞HIF-1α mRNA表達的影響44-45
• 3.3.11 Tempol對缺氧PC12細胞VEGF mRNA表達的影響45-46
• 3.3.12 Tempol對缺氧PC12細胞Caspase-3 mRNA表達的影響46-47
• 3.3.13 Tempol對缺氧PC12細胞HIF-1α、VEGF蛋白表達的影響47-49
• 3.4 結(jié)論49-51
• 參考文獻51-52
• 第四章 Tempol對缺氧H9C2細胞的保護作用及其機制研究52-70
• 摘要52-53
• 4.1 材料53-54
• 4.1.1 主要材料53
• 4.1.2 主要儀器53
• 4.1.3 試劑的配制53-54
• 4.2 方法54-55
• 4.2.1 H9C2細胞培養(yǎng)54
• 4.2.2 H9C2細胞缺氧處理54
• 4.2.3 缺氧H9C2細胞形態(tài)觀察54
• 4.2.4 MTT法檢測Tempol對缺氧H9C2細胞活性的影響54
• 4.2.5 Tempol對缺氧H9C2細胞ROS含量的影響54-55
• 4.2.6 Tempol對缺氧H9C2細胞LDH、SOD、MDA、T-AOC、CK的影響55
• 4.2.7 Tempol對缺氧H9C2細胞缺氧相關基因表達的影響55
• 4.2.8 統(tǒng)計學方法55
• 4.3 結(jié)果55-67
• 4.3.1 缺氧不同時間對H9C2細胞活力的影響56
• 4.3.2 MTT法檢測Tempol對缺氧H9C2細胞活性的影響56-57
• 4.3.3 Tempol對缺氧H9C2細胞形態(tài)的影響57
• 4.3.4 Tempol對缺氧H9C2細胞ROS含量的影響57-59
• 4.3.5 Tempol對缺氧H9C2細胞LDH的影響59-60
• 4.3.6 Tempol對缺氧H9C2細胞SOD的影響60
• 4.3.7 Tempol對缺氧H9C2細胞T-AOC的影響60-62
• 4.3.9 Tempol對缺氧H9C2細胞CK的影響62
• 4.3.10 Tempol對缺氧H9C2細胞HIF-1α mRNA表達的影響62-63
• 4.3.11 Tempol對缺氧H9C2細胞VEGF mRNA表達的影響63-64
• 4.3.12 Tempol對缺氧H9C2細胞Caspase-3 mRNA表達的影響64-65
• 4.3.13 Tempol對缺氧H9C2細胞HIF-1α、VEGF蛋白表達的影響65-67
• 4.4 結(jié)論67-69
• 參考文獻69-70
• 第五章 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)HIF-1α-抗氧化體系-ROS與細胞凋亡的影響70-89
• 摘要70-71
• 5.1 材料71
• 5.1.1 主要材料71
• 5.1.2 主要儀器71
• 5.1.3 試劑配制71
• 5.2 方法71-74
• 5.2.1 實驗分組71-72
• 5.2.2 阻斷劑YC-1濃度的篩選72
• 5.2.3 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后ROS的影響72
• 5.2.4 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后HIF-1α、VEGF、CAT、SOD、Caspase-3 mRNA的影響72-73
• 5.2.5 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后HIF-1α、VEGF、SOD、CAT、Caspase-3蛋白表達的影響73
• 5.2.6 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后細胞凋亡率的影響73-74
• 5.2.7 統(tǒng)計學方法74
• 5.3 結(jié)果74-85
• 5.3.1 阻斷劑YC-1濃度的篩選74-75
• 5.3.2 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后ROS的影響75-77
• 5.3.3 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后HIF-1α、VEGF、CAT、SOD、Caspase-3 mRNA的影響77-80
• 5.3.4 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后HIF-1α、VEGF、CAT、SOD、Caspase-3蛋白表達的影響80-84
• 5.3.5 Tempol對缺氧H9C2細胞內(nèi)YC-1阻斷HIF-1α后細胞凋亡率的影響84-85
• 5.4 結(jié)論85-88
• 參考文獻88-89
• 碩士期間發(fā)表的論文及參與的科研工作89-90
• 致謝90

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 趙遠鵬;但國蓉;董兆君;;低氧復合氰化鈉中毒對兔動脈血超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽和丙二醛的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2008年16期

2 魏水生;廖新學;楊春濤;藺際喟;楊戰(zhàn)利;蘭愛平;黃雪;王禮春;陳培熹;馮鑒強;;活性氧清除劑保護心肌細胞對抗化學性缺氧損傷[J];南方醫(yī)科大學學報;2009年10期

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4 陳宏泉;王國英;王桂芝;劉肅;李春陽;;Tempol對紫外線照射下豚鼠皮膚的防護作用[J];中國麻風皮膚病雜志;2006年09期

  本文關鍵詞：自由基清除劑Tempol的抗缺氧作用及其分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：340298