發(fā)布時(shí)間：2017-05-01 22:16

  本文關(guān)鍵詞：RIN1與脊髓背角Spinophilin之間的相互作用及其調(diào)控機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:Spinophilin能夠與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)、蛋白磷酸酶-1(PP1)、突觸后致密質(zhì)-95(PSD-95)等多種信號(hào)分子、骨架蛋白相互作用。作為一種錨定蛋白,Spinophilin能將其結(jié)合的蛋白(binding partners)定位在特定的亞細(xì)胞區(qū)域,決定著這些結(jié)合蛋白的作用特異性。前期資料顯示:Spinophilin表達(dá)于脊髓背角,能夠抑制興奮性谷氨酸受體介導(dǎo)的痛覺突觸傳遞,有效緩解外周組織損傷誘發(fā)的痛覺超敏。RIN1(Ras and Rab Interacting protein-1)是一種多功能的胞內(nèi)信號(hào)蛋白,對(duì)調(diào)節(jié)ERK1/2、小GTP酶Rab5、酪氨酸激酶c-ABL等信號(hào)分子的活性至關(guān)重要,但RIN1的脊髓功能尚遠(yuǎn)不清楚。本文探討了Spinophilin與RIN1之間的相互作用及其調(diào)控特征。方法:本研究用免疫共沉淀法,探討了Spinophilin和RIN1在脊髓背角中的相互作用;通過大鼠鞘內(nèi)注射N-甲基-D-天門冬氨酸(N-methyl-D-aspartate;NMDA)、代謝型谷氨酸受體1/5(metabotropic glutamate receptors 1/5;m Glu R1/5)激動(dòng)劑DHPG、以及后足底皮下注射完全佛氏佐劑(Complete Freund’s Adjuvant;CFA),探討了NMDA受體、m Glu R1/5受體以及外周炎性損傷對(duì)脊髓背角Spinophilin和RIN1之間的相互作用的影響。結(jié)果:(1)免疫印跡實(shí)驗(yàn)顯示:RIN1表達(dá)于大鼠脊髓背角;(2)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)顯示:抗Spinophilin的特異性抗體,能夠從大鼠脊髓背角中共沉淀出RIN1;抗RIN1的特異性抗體,也能夠共沉淀出Spinophilin,提示:RIN1和Spinophilin之間存在著分子間的、直接或間接的相互作用;(3)正常成年大鼠后足底皮下注射CFA(20μl),能夠明顯降低Von Frey纖維誘發(fā)的縮足閾值,誘發(fā)痛覺超敏;同時(shí),抗Spinophilin的特異性抗體從脊髓背角中沉淀出的RIN1含量明顯減少,提示:外周組織損傷會(huì)打斷RIN1和Spinophilin之間的相互作用;(4)給正常成年大鼠鞘內(nèi)注射NMDA受體激動(dòng)劑NMDA(1μg)或m Glu R1/5受體激動(dòng)劑DHPG(20μg),在降低縮足閾值的同時(shí),也會(huì)減弱RIN1和Spinophilin的相互作用,提示:RIN1/Spinophilin的結(jié)合受到NMDA受體和m Glu R1/5受體的調(diào)控;(5)此外,改變蛋白磷酸酶的活性,也會(huì)影響RIN1和Spinophilin的結(jié)合,因?yàn)榻o正常成年大鼠鞘內(nèi)注射鈣調(diào)磷酸酶(Calcineurin)抑制劑Cyclosporine A(50μg)后,抗RIN1的特異性抗體從脊髓背角中沉淀出的Spinophilin含量會(huì)明顯減少;(6)NMDA受體的NR2A亞基可能也通過Spinophilin與RIN1相互作用。結(jié)論:Spinophilin與RIN1具有密切的相互作用,兩者的相互作用受到NMDA受體、m Glu R1/5受體以及蛋白磷酸酶的調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：N-甲基-D-天門冬氨酸型谷氨酸受體 代謝型谷氨酸受體 脊髓背角 完全弗氏佐劑 Ras and Rab Interacting protein-1 Spinophilin
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 第一章 前言9-14
• 1.1 N-甲基D-天門冬氨酸（N-methyl-D-aspartate; NMDA）受體和疼痛的關(guān)系9
• 1.2 mGlu R1/5 受體與疼痛的關(guān)系9-10
• 1.3 Spinophilin的分子結(jié)構(gòu)10
• 1.4 Spinophilin的生物學(xué)功能10-11
• 1.5 RIN1的分子結(jié)構(gòu)和生物學(xué)活性11-14
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法14-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材14-15
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑15-16
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)溶液16-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-25
• 2.2.1 行為學(xué)測(cè)定20-21
• 2.2.2 藥物鞘內(nèi)注射21
• 2.2.3 藥物皮下注射21
• 2.2.4 全細(xì)胞組織勻漿樣品的制備21-22
• 2.2.5 免疫共沉淀樣品的制備22-23
• 2.2.6 免疫印跡法23-24
• 2.2.7 數(shù)據(jù)處理24-25
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-37
• 3.1 RIN1在大鼠脊髓背角中的表達(dá)25
• 3.2 Spinophilin能夠從大鼠脊髓背角免疫共沉淀RIN125-26
• 3.3 RIN1能夠從大鼠脊髓背角免疫共沉淀Spinophilin26-27
• 3.4 大鼠后足底皮下注射CFA對(duì)Spinophilin和RIN1相互作用的影響27-29
• 3.5 鞘內(nèi)注射NMDA對(duì)Spinophilin和RIN1相互作用的影響29-31
• 3.6 鞘內(nèi)注射DHPG對(duì)Spinophilin和RIN1相互作用的影響31-34
• 3.7 鞘內(nèi)注射CyclosporineA對(duì)Spinophilin和RIN1相互作用的影響34-35
• 3.8 NMDA受體NR2A亞基能夠從大鼠脊髓背角免疫共沉淀RIN135-37
• 第四章 討論37-40
• 4.1 RIN1表達(dá)于脊髓背角37
• 4.2 外周組織損傷打斷Spinophilin和RIN1在脊髓背角的相互作用37-38
• 4.3 NMDA受體和mGlu R1/5 受體對(duì)脊髓背角Spinophilin和RIN1的調(diào)控作用38-39
• 4.4 Cyclosporine A打斷Spinophilin和RIN1在脊髓背角的相互作用39-40
• 第五章 結(jié)論與研究展望40-41
• 5.1 結(jié)論40
• 5.2 研究展望40-41
• 縮略詞41-44
• 在學(xué)期間的研究成果44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻(xiàn)46-53

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龔良維,丁玉強(qiáng),呂巖,鄭恒興,秦秉志,李繼碩;代謝型谷氨酸受體五種亞型在貓脊髓內(nèi)的分布—免疫組織化學(xué)方法研究[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;1998年01期

2 魏祥品;慢性脊髓刺激治療疼痛[J];立體定向和功能性神經(jīng)外科雜志;2002年03期

3 劉燕,陳娟,韓建德,徐迎新,羅力,徐承燾,張艷萍;辣椒素引起脊髓 P 物質(zhì)釋放及其對(duì)血壓的影響[J];生理學(xué)報(bào);1990年05期

4 龍雙漣,李朗,孫俊,傅希s，

本文編號(hào)：339761