本文關(guān)鍵詞：乙酰普魯蘭葉酸偶合體納米粒的體外細(xì)胞攝取途徑研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景隨著納米技術(shù)的飛速發(fā)展,越來越多的納米材料如納米粒、脂質(zhì)體以及高分子聚合物-藥物偶聯(lián)體等用于抗腫瘤藥物載體的研究及臨床應(yīng)用,并顯示了良好的應(yīng)用前景。普魯蘭多糖(Pullulan)是一種水溶性的中性直鏈多糖,由α-1,6糖苷鍵連接的麥芽三糖重復(fù)單位組成。由于無毒、無免疫原性、無致突變作用、無致癌性以及良好的生物相容性等優(yōu)良特點(diǎn),近年來作為靶向藥物或基因載體受到廣泛關(guān)注。課題組前期合成并制備了乙酰普魯蘭葉酸偶合的納米粒(Folate conjugated pullulan acetate,FPA NPs),研究結(jié)果表明具有較高的藥物包封率,體內(nèi)外緩釋特性,且具有良好的體內(nèi)生物相容性。但是作為靶向抗腫瘤藥物載體,其細(xì)胞攝取機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。目的1.制備載藥的FPA NPs。選擇三種葉酸受體表達(dá)量不同的腫瘤細(xì)胞,研究其體外抑瘤效應(yīng);并從細(xì)胞水平闡明攝取納米粒的途徑和機(jī)制。2.研究大鼠肝臟枯否細(xì)胞(Kupffer cells,KC)攝取納米粒子途徑及初步闡述免疫逃逸機(jī)制,進(jìn)一步評(píng)價(jià)其作為靶向抗腫瘤藥物載體的可行性。方法1.透析法制備包載表阿霉素的(Epirubicin,EPI)納米粒(FPA/EPI NPs)。采用激光粒度分析儀檢測(cè)粒徑分布、表面Zeta電位等,透射電鏡下觀察納米粒的形貌;考察其載藥率、包封率及體外釋藥行為。2.選擇葉酸受體高表達(dá)細(xì)胞株Hela細(xì)胞,葉酸受體低表達(dá)細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞及葉酸受體陰性細(xì)胞株HepG2細(xì)胞,MTS法檢測(cè)FPA NPs和FPA/EPI NPs體外細(xì)胞毒。通過加入4種特異性細(xì)胞吞噬抑制劑氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ),氯喹(chloroquine,CQ),阿米洛利(Amiloride,AMR),制霉素(Nystain,NY)和葉酸(folicacid,fol),通過激光共聚焦、流式細(xì)胞分析儀和熒光化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度,定性定量分析納米粒攝取量和攝取途徑。3.肝臟灌流消化及梯度離心法提取sd大鼠肝臟枯否細(xì)胞(kupffercell,kc)并鑒定。研究4種選擇性吞噬抑制劑和葉酸對(duì)kc攝取納米粒的影響;并通過elisa方法檢測(cè)4種吞噬抑制劑和nf-?b通道抑制劑pdtc對(duì)kc攝取納米粒后,炎癥因子tnf-α,il-1β,il-6分泌量的影響。結(jié)果1.透析法制備了fpa/epinps,透射電鏡下觀察到納米粒呈圓球形,粒徑分布均勻。粒徑分析儀測(cè)試fpanps和fpa/epinps粒徑分別為(204.2±10.9)nm和(273.4±11.0)nm。fpa/epinps載藥量和包封率分別為(6.45±1.04)%和(72.45±11.50)%。體外釋放結(jié)果表明前12h藥物釋放較快,之后藥物緩慢釋放。2.mts法測(cè)定hela,mcf-7,hepg2細(xì)胞分別與不同濃度的fpanps孵育時(shí),細(xì)胞存活率高,表明三種細(xì)胞無顯著的細(xì)胞毒性。此外,激光共聚焦顯微鏡結(jié)果表明fpa/epinps較容易進(jìn)入葉酸高表達(dá)細(xì)胞株hela細(xì)胞。對(duì)于hepg2細(xì)胞,fpa/epinps主要通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞以及巨胞飲途徑進(jìn)入細(xì)胞。對(duì)于hela細(xì)胞和mcf-7細(xì)胞,葉酸抑制納米粒的攝取量,其納米粒攝取量分別減少到原來57.8%和70.0%。3.通過肝臟灌流消化及梯度離心法成功提取了kc,溶酶體抑制劑cq顯著抑制kc攝取納米粒的量;cq和nf-?b通道抑制劑pdtc聯(lián)用,顯著降低了炎癥因子tnf-a,il-1β和il-6的分泌量(***p0.001)。結(jié)論1.成功制備了fpa/epinps,納米粒具有較高的藥物包封率和良好的藥物緩釋性。2.體外細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)表明該載體材料無毒。對(duì)于葉酸高表達(dá)細(xì)胞株,載藥納米粒具有顯著抑瘤效應(yīng),并顯著增加了細(xì)胞攝取量。網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞以及巨胞飲途徑等多種機(jī)制參與了fpa/epinps進(jìn)入細(xì)胞的途徑,但是對(duì)于葉酸高表達(dá)的hela細(xì)胞,葉酸受體介導(dǎo)的途徑占主導(dǎo)作用。3.溶酶體抑制劑CQ顯著抑制KC攝取納米粒,CQ和PDTC聯(lián)用能顯著抑制KC分泌三種炎癥因子。4.綜上所述,對(duì)于葉酸高表達(dá)細(xì)胞株,FPA NPs包載抗腫瘤藥物EPI,能顯著增加細(xì)胞攝取并具有顯著的抑瘤效應(yīng),作為靶向抗腫瘤藥物載體,具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：普魯蘭多糖 葉酸 納米粒 靶向抗腫瘤 枯否細(xì)胞 細(xì)胞攝取
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-25
• 結(jié)果25-36
• 討論36-39
• 小結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述：普魯蘭多糖納米粒作為靶向抗腫瘤藥物載體的研究進(jìn)展44-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 附錄55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況56-57
• 致謝57-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷58

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本文編號(hào)：337885