本文關(guān)鍵詞：氟西汀對(duì)NLRP3炎癥小體激活的抑制作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：氟西�。╢luoxetine）是一種選擇性五羥色胺（serotonin，5-HT）再攝取抑制劑（selective serotonin reuptake inhibitors，SSRIs），能選擇性地抑制突觸前膜對(duì)5-HT的再攝取，從而增加突觸間隙5-HT水平，達(dá)到治療抑郁癥的目的。氟西汀因具有順應(yīng)性、安全性、有效性等優(yōu)點(diǎn)，一直是抑郁癥治療的首選藥物。新近研究發(fā)現(xiàn)，氟西汀還具有神經(jīng)保護(hù)、抗腫瘤、抗炎等藥理作用。對(duì)全身性炎癥（如感染性休克）模型動(dòng)物的研究發(fā)現(xiàn)，氟西汀能有效抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化以及炎癥因子分泌；氟西汀還可通過(guò)減少炎癥相關(guān)細(xì)胞、抑制白介素-1β（interleukin-1beta，IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）的釋放而發(fā)揮抗炎作用。但是，氟西汀調(diào)節(jié)中樞和外周炎癥反應(yīng)的分子機(jī)制目前尚未闡明。 抑郁癥是一種常見的精神類疾病，主要臨床表現(xiàn)為情緒低落，興趣減低，悲觀，缺乏主動(dòng)性，自責(zé)自罪，飲食、睡眠差，嚴(yán)重者可出現(xiàn)自殺念頭和行為。世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，到2020年抑郁癥將成為繼高血壓之后第二大臨床慢性疾病。目前關(guān)于抑郁癥發(fā)病機(jī)制的研究假說(shuō)包括單胺假說(shuō)、受體假說(shuō)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子假說(shuō)、神經(jīng)內(nèi)分泌假說(shuō)以及免疫炎性假說(shuō)等。1995年，Maes首次提出了抑郁癥免疫反應(yīng)假說(shuō)：即抑郁癥伴有免疫系統(tǒng)的激活和炎性反應(yīng)。近年來(lái)研究表明炎癥因子，尤其是IL-1β在抑郁癥的病理過(guò)程中發(fā)揮非常重要的作用：臨床研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者腦脊液和外周血中IL-1β、TNF-α等炎癥因子的表達(dá)水平顯癥藥物能顯著降低血清中IL-1β水平；長(zhǎng)期溫和應(yīng)激和足電擊習(xí)得性無(wú)助致抑郁的模型動(dòng)物中腦內(nèi)和外周IL-1β升高，應(yīng)激前腦內(nèi)注射IL-1受體拮抗劑，能阻斷動(dòng)物的抑郁樣行為的產(chǎn)生。因此，，抑郁癥和炎癥相關(guān)性以及抗抑郁藥物抗炎作用的研究成為近年來(lái)基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)。 IL-1β主要產(chǎn)生于外周單核巨噬細(xì)胞和中樞小膠質(zhì)細(xì)胞，并依賴NLRP3炎癥小體的激活。NLRP3炎癥小體（inflammasome）是由NLRP3（也稱NALP3或者cryopyrin）、胱冬肽酶（cysteiny aspartate-specific protease，caspase-1）前體和構(gòu)架蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD，ASC）組裝而成的多蛋白復(fù)合物，是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分。NLRP3屬于胞漿內(nèi)模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRRs），能識(shí)別病原相關(guān)分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）或者宿主來(lái)源的危險(xiǎn)信號(hào)分子（damage-associated molecular patterns，DAMPs），招募和激活促炎癥蛋白酶胱冬肽酶-1（caspase-1），活化的caspase-1切割pro-IL-1β和pro-IL-18，最終生成成熟的IL-1β和IL-18。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，NLRP3炎癥小體活化與多種疾病諸如糖尿病和Alzheimer病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，然而其與抑郁癥的發(fā)生以及抗抑郁藥氟西汀的治療作用是否相關(guān)目前尚未見報(bào)道。 因此，本文應(yīng)用C57BL/6J小鼠制備慢性溫和應(yīng)激（chronic mild stress，CMS）誘導(dǎo)的小鼠抑郁癥模型，研究NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是否參與抑郁癥發(fā)病過(guò)程及其對(duì)氟西汀治療作用的影響；應(yīng)用RAW264.7巨噬細(xì)胞株，研究、闡明抗抑郁癥藥物氟西汀對(duì)NLRP3炎癥小體激活的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制，揭示氟西汀抗抑郁作用的新機(jī)制，也為抑郁癥的治療提供新思路。 目的：研究氟西汀對(duì)NLRP3炎癥小體激活的影響及其機(jī)制。 方法：1.應(yīng)用C57BL/6J小鼠，建立CMS小鼠抑郁癥模型，給予氟西汀治療，共分為三組：對(duì)照組、CMS抑郁模型組、CMS抑郁模型+氟西汀給藥組；通過(guò)糖水偏愛實(shí)驗(yàn)、懸尾試驗(yàn)以及強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)確證CMS抑郁模型是否成功。 2.應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blotting）檢測(cè)上述三組小鼠海馬NLRP3炎癥小體各組分（NLRP3、caspase-1、IL-1β）的表達(dá)。3.分離并培養(yǎng)上述三組小鼠骨髓源性巨噬細(xì)胞（bone marrow-derived macrophages，BMDM），應(yīng)用Western blotting方法檢測(cè)NLRP3炎癥小體各組分的表達(dá)（NLRP3、caspase-1）；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的方法檢測(cè)分泌入細(xì)胞上清的IL-1β水平。4.應(yīng)用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）/尿酸鹽晶體（monosodium urate，MSU）處理小鼠源性小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2及小鼠源性巨噬細(xì)胞株RAW264.7，應(yīng)用Western blotting檢測(cè)caspase-1、NLRP3的表達(dá)量，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-1β分泌量，觀察氟西汀對(duì)NLRP3炎癥小體激活的影響。5.應(yīng)用ROS探針H2DCF-DA進(jìn)行熒光定量實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)氟西汀對(duì)LPS+ATP誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中ROS生成的影響。6.應(yīng)用Western blotting方法檢測(cè)氟西汀對(duì)ERK1/2、p38及JNK的磷酸化影響以及對(duì)核因子p65的表達(dá)變化。7.應(yīng)用免疫共沉淀方法觀察氟西汀對(duì)TXNIP/PKR與NLRP3結(jié)合的影響。 結(jié)果： 1.氟西汀抑制CMS誘導(dǎo)的小鼠海馬及外周NLRP3炎癥小體的激活CMS誘導(dǎo)的小鼠抑郁癥模型中，海馬腦組織和外周骨髓源性巨噬細(xì)胞（bonemarrow-derived macrophages，BMDM）的NLRP3炎癥小體顯著激活；氟西汀能抑制CMS誘導(dǎo)的海馬組織和BMDM中NLRP3炎癥小體的激活。 2.氟西汀抑制LPS+ATP/MSU對(duì)NLRP3炎癥小體的激活作用氟西汀抑制LPS+ATP/MSU誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞NLRP3的表達(dá)（P 0.05）、caspase-1的活化（P 0.01）以及IL-1β的分泌（P 0.05）；同時(shí)氟西汀也能抑制巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞NLRP3的表達(dá)（P 0.01）、caspase-1的活化（P 0.01）以及IL-1β的分泌（P 0.01），表明氟西汀能抑制LPS+ATP/MSU誘導(dǎo)的NLRP3炎癥小體的激活。 3.氟西汀通過(guò)減少ROS的生成及PKR、MAPK的磷酸化而抑制NLRP3炎癥小體的激活ROS探針熒光定量分析結(jié)果顯示，氟西汀減少LPS+ATP誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞ROS的生成（P 0.05）；氟西汀抑制LPS+ATP誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞p65核移位，抑制ERK1/2、p38、JNK（MAPK）和PKR的磷酸化（P 0.05）；并且，氟西汀抑制TXNIP和NLRP3、PKR和NLRP3的相互作用，從而抑制NLRP3炎癥小體的激活。 結(jié)論： 1. NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與抑郁癥相關(guān)。 2.氟西汀通過(guò)抑制中樞和外周NLRP3炎癥小體激活而發(fā)揮抗炎作用。 本文工作的創(chuàng)新之處： 1.揭示NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與抑郁癥相關(guān)性，提示NLRP3炎癥小體可能是抑郁癥治療的新靶點(diǎn)； 2.闡明氟西汀抑制NLRP3炎癥小體激活而發(fā)揮抗炎作用的新機(jī)制，揭示了抗抑郁藥物的新的藥理作用。
【關(guān)鍵詞】：氟西汀 NLRP3炎癥小體 IL-1β 外周炎癥 抑郁癥
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-12
• ABSTRACT12-15
• 前言15-25
• 材料與方法25-30
• 結(jié)果30-42
• 討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-56
• 綜述56-72
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章情況72-73
• 致謝73

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：336804