本文關(guān)鍵詞：原花青素對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 本實(shí)驗(yàn)擬觀察原花青素對(duì)H_2O_2引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞RGC-5凋亡的影響，并初步探究其作用機(jī)制。在此基礎(chǔ)上擬利用原代組織培養(yǎng)模型驗(yàn)證原花青素對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。 方法： 第一部分原花青素對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制初探 1、H_2O_2損傷模型的建立 （1）細(xì)胞鑒定：采用Thy1.1蛋白特異性熒光染色（免疫組化法）對(duì)培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞進(jìn)行鑒定； （2）H_2O_2損傷濃度梯度：將H_2O_2按濃度梯度分為0、200、400、600、800μM處理組，在損傷7h后，應(yīng)用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞活力，觀察H_2O_2對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞的損傷情況。 2、OPC對(duì)H_2O_2損傷后RGC-5細(xì)胞的影響 （1）OPC安全劑量：觀察不同劑量（0-240μM）原花青素對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞的活力的影響； （2）OPC對(duì)損傷后RGC-5細(xì)胞的影響： ①M(fèi) TT檢測(cè)OPC對(duì)H_2O_2（0-800μM）損傷后RGC-5細(xì)胞的影響； ②O PC（5、10、20、40μM）對(duì)H_2O_2（400μM）損傷后RGC-5細(xì)胞凋亡的影響： a. Hoechst33342染色檢測(cè)各組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞凋亡情況； b. Annexin-V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)分組檢測(cè)各組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞凋亡情況。 3、OPC抗H_2O_2損傷后RGC-5細(xì)胞凋亡的機(jī)制初探 （1） Western Blot檢測(cè)觀察OPC（10、20、40μM）對(duì)H_2O_2（400μM）引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2表達(dá)量的影響； （2）Western Blot檢測(cè)觀察OPC（10、20、40μM）對(duì)H_2O_2（400μM）引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)量的影響。 第二部分：原花青素對(duì)原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞H_2O_2損傷模型的影響 1、上丘逆行性熒光金標(biāo)記法特異性標(biāo)記原代培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞； 2、H_2O_2損傷模型：將H_2O_2按濃度梯度分為0、100、200、300μM處理組，在損傷7h后，計(jì)數(shù)各組間帶熒光金視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存貨率； 3、原代視網(wǎng)膜組織離體培養(yǎng)，熒光視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)（冰凍切片）觀察OPC（10、20μM）對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞H_2O_2（100μM）損傷模型的影響。 結(jié)果： 第一部分原花青素對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制初探 1、培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞24h后，顯微鏡下可見細(xì)胞貼壁，，呈多邊形。熒光顯微鏡下可觀察到細(xì)胞中有Thy1.1表達(dá)，證實(shí)培養(yǎng)細(xì)胞為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞。 2、MTT檢測(cè)結(jié)果表明，隨著H_2O_2濃度的增加，細(xì)胞活力逐漸下降。在400μMH_2O_2濃度下，7h可引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞活力下降約32%。加入不同濃度OPC作用后，細(xì)胞活力明顯增加，且OPC20μM時(shí)細(xì)胞活力最高。 3、用Hoechst33324染色和Annexin-V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組間細(xì)胞凋亡數(shù)目證實(shí)，400μM H_2O_2能明顯誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞凋亡；加入20μMOPC能顯著抑制H_2O_2誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞的凋亡（P0.05）。 4、Western Blot結(jié)果表明，400μM H_2O_2能夠引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)RGC-5細(xì)胞Bcl-2表達(dá)下調(diào)，Bax和Caspase-3表達(dá)增加；OPC（20、40μM）能顯著抑制H_2O_2引起的蛋白表達(dá)變化，即Bcl-2蛋白表達(dá)增加，Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)下調(diào)（P0.05）。 第二部分：原花青素對(duì)原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞H_2O_2損傷模型的影響 1、上丘逆行性熒光標(biāo)記3d后，冰凍切片可見熒光金成功標(biāo)記視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 2、熒光金細(xì)胞計(jì)數(shù)表明，隨著H_2O_2濃度的增加，細(xì)胞存活率逐漸下降。在100μMH_2O_2濃度下，7h可引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活率下降約53%。加入不同濃度OPC作用后，細(xì)胞存活率明顯增加，且OPC20μM時(shí)細(xì)胞存活率最高。 結(jié)論： 原花青素（OPC）對(duì)H_2O_2引起的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷具有對(duì)抗作用，它可以減少視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡，增加視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的活力。
【關(guān)鍵詞】：原花青素 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 RGC-5 H_2O_2 凋亡
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-9
• 前言9-15
• 第一部分 原花青素對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié) RGC-5 細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制初探15-36
• 材料和方法15-26
• 結(jié)果26-36
• 第二部分：原花青素對(duì)原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 H_2O_2損傷模型的影響36-42
• 材料和方法36-39
• 結(jié)果39-42
• 討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 縮略詞表54-56
• 在校期間發(fā)表論文56-57
• 致謝57

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  本文關(guān)鍵詞：原花青素對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：335987