本文關(guān)鍵詞：辛伐他汀對小鼠脂肪細胞糖代謝的影響及其機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究背景】他汀類藥物(3-hydroxy-3-methyl-glut-aryl CoA reeducates inhibitor,HMG CoA還原酶抑制劑)是動脈粥樣硬化性心血管疾病一級預(yù)防和二級預(yù)防的基石。他汀通過抑制膽固醇合成的限速酶——HMG CoA還原酶——降低患者血漿低密度脂蛋白膽固醇(Low Density Lipoprotein-Cholesterol,LDL-C)濃度,有效延緩和抑制動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的發(fā)生發(fā)展,已被確立為調(diào)脂治療及抗動脈粥樣硬化治療的首選藥物之一。但近年來研究顯示,某些他汀類藥物對糖代謝具有潛在的不利影響,但機制不清�！灸康摹坑^察親脂性的他汀(辛伐他汀)對分化成熟的3T3-L1脂肪細胞糖代謝的影響并探討其可能的機制。【方法】1、采用經(jīng)典的激素“雞尾酒”(誘導(dǎo)培養(yǎng)基A:胰島素5 mg/L,地塞米松1.0μmol/L,3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤5 mmol/L;誘導(dǎo)培養(yǎng)基B:胰島素10mg/L)誘導(dǎo)方法,誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細胞為成熟的脂肪細胞,顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細胞及脂肪細胞形態(tài),油紅“O”染色觀察細胞內(nèi)脂滴聚集。2、將誘導(dǎo)成熟的3T3-L1脂肪細胞隨機分為NC組(對照組)、A組、B組和C組,分別用含0、2、5、10μmol/L辛伐他汀濃度及10 nmol/L胰島素的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48小時。3、CCK-8試劑盒分析不同濃度辛伐他汀對3T3-L1脂肪細胞活性的影響。4、采用葡萄糖氧化酶法檢測并計算各組的葡萄糖消耗量。5、運用熒光定量PCR(Real-Time PCR)檢測IR,GLUT-4及PPAR-γmRNA的表達水平。6、Western blot檢測P-PI3K,P-Akt,總GLUT-4及膜GLUT-4蛋白表達水平。7、流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率和細胞周期及細胞膜上胰島素受體IR、膜蛋白GLUT-4的表達水平�！窘Y(jié)果】1、顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細胞呈成纖維細胞樣的長梭形,胞漿中無脂滴;分化成熟后,細胞呈大圓形,胞漿內(nèi)可見大量脂滴包繞胞核,呈“戒環(huán)”狀。2、不同濃度辛伐他汀(實驗濃度:0、2、5、10μmol/L)作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細胞,對細胞活性沒有明顯影響(p0.05),而當(dāng)濃度過高時(辛伐他汀:15、20μmol/L),明顯影響細胞活性(p0.05)。3、不同濃度辛伐他汀(實驗濃度:0、2、5、10μmol/L)作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細胞,葡萄糖消耗量呈濃度依賴性減少,并且在較高濃度時(辛伐他汀:10、20μmol/L),明顯減少,并且有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。4、不同濃度辛伐他汀(0、2、5、10μmol/L)作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細胞,P-Akt表達水平在高濃度(10μmol/L)時明顯下降(p0.05),膜GLUT-4蛋白表達水平在中高濃度(5、10μmol/L)時明顯下降(p0.05),P-PI3K、總GLUT-4蛋白表達量無明顯減少(p0.05)。5、不同濃度辛伐他汀(0、2、5、10μmol/L)作用于分化成熟的3T3-L1脂肪細胞,IR m RNA水平在中高濃度(5、10μmol/L)時,表達明顯減少(p0.05);PPAR-γm RNA水平在高濃度(10μmol/L)時,表達明顯減少(p0.05);GLUT-4 m RNA水平無明顯變化(p0.05)。6、流式細胞術(shù)試驗表明中高濃度辛伐他汀對細胞凋亡率和細胞周期及細胞膜IR蛋白的表達無明顯的影響,而GLUT-4蛋白在高濃度時,表達水平明顯降低(p0.05)�！窘Y(jié)論】本研究表明辛伐他汀可能通過抑制Ins/IR/IRS-1/PI3-K/AKT/GLUT-4信號通路和PPARγ/GLUT-4信號通路,從而抑制GLUT-4由胞漿向胞膜的轉(zhuǎn)移,進而抑制葡萄糖由胞外向胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運。
【關(guān)鍵詞】：辛伐他汀 新發(fā)糖尿病 脂肪細胞 糖代謝 胰島素抵抗
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 材料和方法13-31
• 2.1 材料13-18
• 2.1.1 實驗細胞株13
• 2.1.2 主要試劑及來源13
• 2.1.3 相關(guān)試劑配制13-17
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備17-18
• 2.2 實驗方法18-21
• 2.2.1 3T3-L1細胞株的培養(yǎng)、傳代18
• 2.2.2 3T3-L1細胞的誘導(dǎo)分化18-19
• 2.2.3 3T3-L1細胞的凍存（凍存原則：緩慢降溫）19
• 2.2.4 3T3-L1細胞的復(fù)蘇（復(fù)蘇原則：快速復(fù)溫）19
• 2.2.5 分化成熟的 3T3-L1細胞的鑒定19-20
• 2.2.6 分化成熟 3T3-L1細胞的分組處理20-21
• 2.3 CCK-8 試劑盒檢測辛伐他汀對 3T3-L1脂肪細胞活性的影響21
• 2.3.1 3T3-L1脂肪細胞的鋪板及處理21
• 2.3.2 CCK-8 試劑的處理及吸光度值（OD值）的測定21
• 2.4 葡萄糖氧化酶法測定各處理組的葡萄糖濃度，計算各組葡萄糖消耗量21-22
• 2.5 實時熒光定量PCR方法檢測辛伐他汀作用下 3T3-L1脂肪細胞GLUT-4 mRNA、PPAR-γ mRNA及IR mRNA的表達水平22-25
• 2.5.1 TRizol法提取 3T3-L1脂肪細胞的總RNA22-23
• 2.5.2 逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）23-24
• 2.5.3 Real-Time PCR24-25
• 2.6 免疫印跡法（Western blot）檢測細胞總蛋白GLUT-4、膜蛋白GLUT-4、P-PI3K及P-Akt蛋白的表達水平25-28
• 2.6.1 細胞總蛋白的提取25
• 2.6.2 蛋白濃度的測定：BCA法測蛋白濃度25-26
• 2.6.3 細胞蛋白樣品的制備26
• 2.6.4 Western blot檢測蛋白基本步驟26-28
• 2.7 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率和細胞周期，，檢測細胞膜IR、GLUT-4 蛋白的表達28-31
• 2.7.1 利用流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡28-29
• 2.7.2 利用流式細胞抗體檢測細胞膜表面蛋白的變化29-31
• 第三章 結(jié)果31-38
• 3.1 3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)前、誘導(dǎo)第4天及誘導(dǎo)第9天后的形態(tài)31
• 3.2 CCK-8 檢測藥物對細胞活性的影響31-32
• 3.3 葡萄糖氧化酶法檢測不同藥物濃度下葡萄的消耗量32-33
• 3.4 Real Time PCR檢測 3T3-L1脂肪細胞GLUT-4 mRNA、PPAR-γ mRNA及IR mRNA的表達水平33-35
• 3.4.1 GLUT-4 mRNA表達33
• 3.4.2 PPAR-γ mRNA表達33-34
• 3.4.3 IR mRNA表達34-35
• 3.5 Western blot檢測P-PI3K，P-Akt，總GLUT-4 及膜GLUT-4 蛋白表達水平35-36
• 3.6 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率和細胞周期及膜IR蛋白及GLUT-4 蛋白表達水平36-38
• 第四章 討論38-42
• 第五章 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-45
• 致謝45-46
• 綜述46-55
• 綜述參考文獻53-55

【共引文獻】

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本文編號：334257