本文關(guān)鍵詞：聚季銨鹽-1作為眼用制劑抑菌劑的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：眼睛是人類的重要感覺器官,但隨著人們生活習(xí)慣與環(huán)境的變化以及無紙化辦公的普及,視疲勞、角膜結(jié)膜炎、干眼癥等眼病患者的數(shù)量逐年增加。眼用制劑直接用于眼部治療眼科疾病,其用藥安全性一直為人們所關(guān)心。目前國內(nèi)外大多數(shù)多劑量包裝的眼用制劑中均含有抑菌劑(也稱防腐劑),以避免微生物污染、保證藥品質(zhì)量。 近年來,有關(guān)眼用制劑抑菌劑眼部刺激性、對角膜的毒性等不良反應(yīng)的報道日益增加。研究發(fā)現(xiàn),長期使用含有抑菌劑的眼用制劑患者,如白內(nèi)障、青光眼和干眼癥等患者,會影響其淚膜穩(wěn)定性,造成角、結(jié)膜等眼組織損傷,嚴重者甚至失明。因此,尋找溫和型抑菌劑或抑菌系統(tǒng)是當(dāng)今眼用制劑研發(fā)的重點。 聚季銨鹽-1(Polyquaternium-1,以下簡稱PQ-1)具有抑菌作用強、眼部刺激性小的特點,已作為殺菌劑在隱形眼鏡護理液中得到廣泛應(yīng)用,但在滴眼液等藥品中的研究和應(yīng)用較少。目前國內(nèi)尚無廠家生產(chǎn)PQ-1,也沒有PQ-1的相關(guān)文獻報道。本課題旨在開發(fā)PQ-1在眼用制劑中的應(yīng)用,對其合成工藝及產(chǎn)業(yè)化進行探索；建立了差示分光光度法測定PQ-1的含量；通過營養(yǎng)肉湯試管二倍稀釋法測定PQ-1的最小抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,以下簡稱MIC)和最小殺菌濃度(Minimum bactericidal concentration,以下簡稱MBC),考察其抑菌穩(wěn)定性并對其抑菌機理進行初步探究；研究PQ-1對人角膜上皮細胞(Human corneal epithelial cell,以下簡稱HCEpiC)的毒性作用；以PQ-1作為滴眼液的抑菌劑,通過抑菌效力測試,篩選PQ-1在滴眼液中的有效濃度。 1聚季銨鹽-1的合成、結(jié)構(gòu)表征及分子量測定 目的：初步確定眼用輔料PQ-1的合成工藝。方法：以N,N,N,N-四甲基-2-丁烯-1,4-二胺(DA)、反(順)式-1,4-二氯-2-丁烯(DCB)和三乙醇胺(TEA)為原料,通過共聚合反應(yīng)制備PQ-1樣品；運用核磁共振儀(NMR)和傅里葉變換紅外光譜儀(FT-IR)對產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進行表征；采用凝膠滲透色譜法(GPC法)測定產(chǎn)物的重均分子量(Mw)及Mw分布。結(jié)果：產(chǎn)物NMR圖譜中各基團上的C和H的化學(xué)位移與PQ-1均一致,產(chǎn)物IR圖譜與PQ-1對照品R圖譜也一致；產(chǎn)物Mw為19432,Mw/Mn小于3.0。結(jié)論：所選合成工藝簡單可行,制備的PQ-1樣品Mw及Mw分布符合眼用級PQ-1的要求。 2差示分光光度法測定眼用制劑中聚季銨鹽-1的含量 目的：建立簡便、快捷、準確測定眼用制劑中抑菌劑PQ-1含量的方法。方法：應(yīng)用PQ-1和臺盼藍之間反應(yīng)發(fā)生紅移現(xiàn)象,采用差示分光光度法,以臺盼藍溶液作為參比液,在波長681nm處,測得臺盼蘭在不同濃度PQ-1溶液中的差示吸光度值(△A)。結(jié)果：PQ-1濃度在5.00～15.00μg·mL-1范圍內(nèi),ΔA與溶液濃度呈良好線性關(guān)系(r=0.9996),平均回收率(n=9)為97.8%,RSD=0.87%。結(jié)論：該方法操作簡便、快捷,成本低,結(jié)果準確,適用于測定常規(guī)眼用制劑中PQ-1的含量。 3聚季銨鹽-1抑菌作用的研究 目的：研究PQ-1的抑菌活性及其穩(wěn)定性,并初步探究其抑菌作用機理。方法：采用營養(yǎng)肉湯試管二倍稀釋法測定PQ-1對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌和黑曲霉的MIC和MBC,考察紫外光照射、溫度、pH和鹽濃度對PQ-1穩(wěn)定性的影響。以大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作為指示菌,采用電導(dǎo)率法和透射電鏡觀察方法,考察了PQ-1對菌體細胞膜通透性的影響,并對其超微結(jié)構(gòu)進行了實驗室觀察,同時研究了PQ-1對該兩種細菌生長曲線的影響。結(jié)果：PQ-1對5種實驗菌的MIC和MBC分別為：大腸桿菌MIC16μg·mL-1、 MIC16μg·mL-1金黃色葡萄球菌MIC4μg·mL-1. MBC8μg-mL-1,銅綠假單胞菌MIC16μg-mL-1MBC32μg-mL-1,白色念珠菌MIC8μg-mL-1、MBC8μg-mL-1,黑曲霉MIC64μg-mL-1、MBC128μg-mL-1;PQ-1的抑菌活性不受紫外光和pH的影響,但會隨溫度和鹽濃度的升高而降低。菌液電導(dǎo)率值隨著PQ-1作用時間的延長持續(xù)增加；PQ-1作用后的菌體,表面粗糙并出現(xiàn)許多顆粒狀物,細胞壁有明顯褶皺和破裂。MIC的PQ-1顯著抑制細菌生長,未出現(xiàn)大量生長的對數(shù)期。 結(jié)論：PQ-1在較低濃度具有抑制微生物生長的活性,其對紫外照射和pH較穩(wěn)定,但高溫處理或在高滲環(huán)境下,其抑菌活性會顯著降低。PQ-1可能通過增加菌體細胞膜的通透性,促進胞內(nèi)K+等電解質(zhì)的滲出,逐漸破壞細胞結(jié)構(gòu)而發(fā)揮抑菌作用。 4聚季銨鹽-1對體外培養(yǎng)的人角膜上皮細胞毒性作用的研究 目的：考察PQ-1對體外培養(yǎng)的HCEpiC的毒性作用。方法：建立HCEpiC的體外培養(yǎng)模型,將不同濃度的PQ-1(0.01%,0.005%,0.001%,0.0005%)分別與細胞共同孵育,并于作用后10min、25min、1h、2h,利用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)變化,并采用四唑氮藍(MTT)分析法和細胞活性/毒性染色法評估PQ-1的細胞毒性。同時選取常用濃度的苯扎溴銨(0.01%)和羥苯乙酯(0.03%)進行比較。結(jié)果：(1)細胞形態(tài)學(xué)改變：隨著作用時間延長,0.01%PQ-1、0.005%PQ-1和0.01%苯扎溴銨作用后的細胞連接逐漸松散,胞內(nèi)物質(zhì)逐漸泄漏,細胞變圓并逐漸裂解：0.03%羥苯乙酯對HCEpiC作用1h內(nèi)細胞形態(tài)正常,但作用2h后部分細胞開始腫脹變圓,并逐漸脫落；0.001%PQ-1和0.0005%PQ-1處理組的細胞形態(tài)完整,與正常組相比無肉眼可辨的顯著性差異；(2)MTT分析：隨作用時間延長,0.01%PQ-1、0.005%PQ-1、0.01%苯扎溴銨和0.03%羥苯乙酯處理組的HCEpiC存活率均降低,與正常組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；0.001%PQ-1和0.0005%PQ-1處理組不同作用時間的HCEpiC存活率,與正常組相比均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；(3)細胞活性／毒性檢測：0.01%PQ-1和0.005%PQ-1對HCEpiC作用10min后,仍可見少數(shù)細胞存活,但作用25min、1h、2h后,細胞幾乎全部死亡；0.001%PQ-1和0.0005%PQ-1對HCEpiC作用2h內(nèi)的細胞活性較好,活細胞數(shù)量一直維持在較高水平；0.01%苯扎溴銨處理組各作用時問的細胞活性均較低,幾乎無活細胞存在；0.03%羥苯乙酯對HCEpiC作用1h內(nèi)的細胞活性較好,但作用2h后,死細胞數(shù)量明顯增加。結(jié)論：高濃度PQ-1對HCEpiC有一定的毒性作用,但常用濃度的三種抑菌劑之間比較,PQ-1的細胞毒性作用最小。 5聚季銨鹽-1用于滴眼液防腐的可行性研究 目的：考察PQ-1與常用眼用輔料的配伍穩(wěn)定性,并對PQ-1用于眼用制劑防腐的可行性進行研究和探討。方法：(1)通過配伍液的澄清度檢查和透光率測定,分別考察了PQ-1與磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、玻璃酸鈉(SH)、依地酸二鈉(EDTA-2Na)羥丙甲纖維素(HPMC)、聚乙烯吡咯烷酮-K30(PVP-K30)、羥苯乙酯以及Tween80的配伍穩(wěn)定性；(2)考察了PQ-1與SH配伍時,SH的Mw和濃度、PQ-1濃度以及配伍液pH值對PQ-1與SH配伍液澄清度的影響；(3)選用規(guī)定范圍內(nèi)相對較低Mw的SH,同時加入增溶劑]ween80,將0.0001%PQ-1和0.0001%PHMB聯(lián)用作為復(fù)合抑菌劑應(yīng)用于牛磺酸滴眼液中,并進行了抑菌效力測試；(4)通過抑菌效力測試初步篩選了PQ-1在復(fù)方氯化鈉滴眼液中的使用濃度范圍。結(jié)果：(1)除SH外,PQ-1與其它常用眼用輔料均無配伍禁忌,與SH的配伍溶液有白色乳光產(chǎn)生；(2)PQ-1與SH的配伍溶液的澄清度與SH的Mw和濃度、PQ-1濃度均呈負相關(guān),而受pH值(5-8)的影響較小；(3)選用0.0001%PQ-1和0.0001%PHMB作為復(fù)合抑菌劑的�；撬岬窝垡阂志ЯΨ显u價標準,且性狀合格；(4)復(fù)方氯化鈉滴眼液中PQ-1的最低使用濃度為0.0006%時,抑菌效力才能合格,初步確定了PQ-1的使用濃度范圍為0.0006%～0.0009%。結(jié)論：PQ-1與常規(guī)眼用輔料的配伍穩(wěn)定性較好,適用于常規(guī)眼用制劑的防腐,但本實驗制備的以PQ-1作為抑菌劑的�；撬岬窝垡汉蛷�(fù)方氯化鈉滴眼液的長期穩(wěn)定性以及如何實現(xiàn)PQ-1與SH在眼用制劑中的共存尚需進一步實驗研究。
【關(guān)鍵詞】：聚季銨鹽-1 抑菌劑 含量測定 抑菌作用 細胞毒性 滴眼液
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要16-20
• ABSTRACT20-25
• 符號說明25-27
• 第一章 前言27-38
• 1 眼用制劑抑菌劑的研究現(xiàn)狀27-34
• 1.1 常用眼用制劑抑菌劑的種類及抑菌機理27-28
• 1.2 影響抑菌劑抑菌活性的因素28-31
• 1.3 眼用制劑中抑菌劑的選擇31
• 1.4 抑菌劑的眼表毒性31-32
• 1.5 抑菌劑的質(zhì)量控制32-33
• 1.6 眼用制劑抑菌劑的發(fā)展趨勢33-34
• 2 玻璃酸鈉降低眼用制劑抑菌劑不良反應(yīng)的研究34
• 3 季銨鹽類抑菌劑的研究34-35
• 4 聚季銨鹽-135-36
• 4.1 聚季銨鹽-1的簡介35-36
• 4.2 聚季銨鹽-1的應(yīng)用前景36
• 5 本課題的研究目的及內(nèi)容36-38
• 5.1 研究目的36-37
• 5.2 研究內(nèi)容37-38
• 第二章 聚季銨鹽-1的合成、結(jié)構(gòu)表征及分子量測定38-47
• 第一節(jié) 聚季銨鹽-1的合成及結(jié)構(gòu)表征38-42
• 1 材料38
• 1.1 主要試劑38
• 1.2 主要器材38
• 2 反應(yīng)機理38-39
• 3 方法39-40
• 4 結(jié)果40-41
• 4.1 性狀觀察40
• 4.2 結(jié)構(gòu)表征40-41
• 5 討論41-42
• 第二節(jié) 凝膠滲透色譜法測定聚季銨鹽-1的分子量及分子量分布42-47
• 1 材料42-43
• 1.1 主要試劑42
• 1.2 主要器材42-43
• 2 方法43
• 2.1 對照品溶液和供試品溶液的配制43
• 2.2 分子量及分子量分布測定43
• 3 結(jié)果43-46
• 3.1 標準曲線的生成43-45
• 3.2 聚季銨鹽-1供試品的分子量及分子量分布測定45-46
• 4 討論46-47
• 第三章 差示分光光度法測定眼用制劑中聚季銨鹽-1的含量47-54
• 1 材料47-48
• 1.1 主要試劑47-48
• 1.2 主要器材48
• 2 方法和結(jié)果48-52
• 2.1 檢測波長和專屬性實驗48-49
• 2.2 線性關(guān)系考察49
• 2.3 精密度實驗49
• 2.4 溶液穩(wěn)定性實驗49-50
• 2.5 重復(fù)性實驗50
• 2.6 回收率實驗50
• 2.7 樣品含量測定50
• 2.8 常用眼用制劑輔料對聚季銨鹽-1含量測定的影響50-51
• 2.9 臺盼藍溶液濃度對聚季銨鹽-1含量測定的影響51-52
• 2.10 磷酸鹽緩沖液pH對聚季銨鹽-1含量測定的影響52
• 3 討論52-54
• 第四章 聚季銨鹽-1抑菌作用的研究54-68
• 第一節(jié) 聚季銨鹽-1的抑菌活性及其穩(wěn)定性研究55-61
• 1 材料55
• 1.1 主要試劑55
• 1.2 主要器材55
• 2 方法55-57
• 2.1 菌懸液和樣品溶液的制備55-56
• 2.2 最低抑菌濃度和最低殺菌濃度測定56
• 2.3 聚季銨鹽-1抑菌活性穩(wěn)定性研究56-57
• 3 結(jié)果57-60
• 3.1 聚季銨鹽-1對五種致病菌的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度57-58
• 3.2 聚季銨鹽-1抑菌活性穩(wěn)定性研究58-60
• 4 討論60-61
• 第二節(jié) 聚季銨鹽-1的抑菌作用機理初探61-68
• 1 材料61
• 1.1 主要試劑61
• 1.2 主要儀器61
• 2 方法61-63
• 2.1 聚季銨鹽-1對菌體細胞膜通透性的影響61-62
• 2.2 透射電鏡觀察方法62
• 2.3 聚季銨鹽-1對細菌生長曲線的影響62-63
• 3 結(jié)果63-66
• 3.1 聚季銨鹽-1對菌體細胞膜通透性的影響63-64
• 3.2 細菌表面超微結(jié)構(gòu)觀察64-65
• 3.3 聚季銨鹽-1對細菌生長曲線的影響65-66
• 4 討論66-68
• 第五章 聚季銨鹽-1對體外培養(yǎng)的人角膜上皮細胞毒性作用的研究68-78
• 1 材料68-69
• 1.1 主要材料68
• 1.2 儀器設(shè)備68-69
• 2 方法69-71
• 2.1 HCEpiC培養(yǎng)69
• 2.2 實驗藥液的配制69
• 2.3 細胞形態(tài)學(xué)觀察69
• 2.4 MTT分析69-70
• 2.5 乳酸脫氫酶釋放法分析70
• 2.6 細胞活性檢測70-71
• 2.7 統(tǒng)計學(xué)分析方法71
• 3 結(jié)果71-77
• 3.1 形態(tài)學(xué)變化觀察71-73
• 3.2 MTT分析結(jié)果73-74
• 3.3 乳酸脫氫酶釋放法分析結(jié)果74-75
• 3.4 細胞活性檢測結(jié)果75-77
• 4 討論77-78
• 第六章 聚季銨鹽-1用于滴眼液防腐的可行性研究78-99
• 第一節(jié) 聚季銨鹽-1與常用眼用輔料的配伍穩(wěn)定性考察78-81
• 1 材料78
• 1.1 試劑78
• 1.2 儀器78
• 2 方法78-79
• 2.1 溶液配制78
• 2.2 聚季銨鹽-1與pH緩沖液的配伍穩(wěn)定性考察78-79
• 2.3 聚季銨鹽-1與其他常用眼用輔料的配伍穩(wěn)定性考察79
• 3 結(jié)果79-80
• 4 討論80-81
• 第二節(jié) 聚季銨鹽-1與玻璃酸鈉配伍液的澄清度影響因素考察81-85
• 1 材料81
• 1.1 試劑81
• 1.2 儀器81
• 2 方法81-82
• 2.1 玻璃酸鈉分子量的影響81
• 2.2 玻璃酸鈉濃度的影響81-82
• 2.3 聚季銨鹽-1濃度的影響82
• 2.4 配伍液pH值的影響82
• 3 結(jié)果82-84
• 3.1 玻璃酸鈉分子量的影響82-83
• 3.2 玻璃酸鈉濃度的影響83
• 3.3 聚季銨鹽-1濃度的影響83-84
• 3.4 pH值的影響84
• 4 討論84-85
• 第三節(jié) 含聚季銨鹽-1牛磺酸滴眼液的制備及其抑菌效力測定85-93
• 1 材料85-86
• 1.1 試劑85
• 1.2 儀器85-86
• 2 方法86-89
• 2.1 �；撬岬窝垡簶悠返闹苽�86-87
• 2.2 抑菌效力測定87-89
• 3 結(jié)果89-92
• 3.1 0d實驗89-90
• 3.2 7、14、28d實驗90-92
• 4 討論92-93
• 第四節(jié) 含聚季銨鹽-1復(fù)方氯化鈉滴眼液的制備及其抑菌效力測定93-99
• 1 材料93-94
• 1.1 試劑93
• 1.2 儀器93-94
• 2 方法94-95
• 2.1 復(fù)方氯化鈉滴眼液樣品的制備94
• 2.2 抑菌效力測定94-95
• 3 結(jié)果95-98
• 3.1 0d實驗95
• 3.2 7、14、28d實驗95-98
• 4 討論98-99
• 總結(jié)與展望99-101
• 參考文獻101-107
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄107-108
• 致謝108-109
• 附件109

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：聚季銨鹽-1作為眼用制劑抑菌劑的應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：333755