本文關鍵詞：雙環(huán)醇對次黃嘌呤脫氫酶Ⅱ的作用及其抗炎機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雙環(huán)醇是中國醫(yī)學科學院藥物所研發(fā)的、具有我國自主知識產(chǎn)權的抗炎保肝藥物,自2001年起,已在臨床廣泛應用至今。但其作用機制與靶點不明部分限制了臨床應用。本論文目的是探索雙環(huán)醇的潛在抗炎機制及靶點。前期利用中國科學院上海藥物研究所TarFisDock網(wǎng)絡反式分子對接系統(tǒng)對雙環(huán)醇與PDTD數(shù)據(jù)庫中的蛋白質(zhì)進行虛擬分子對接,發(fā)現(xiàn)次黃嘌呤脫氫酶Ⅱ(inosine 5'-monophosphate dehydrogenase Ⅱ, IMPDHⅡ)與雙環(huán)醇潛在結合能力最強。為考察IMPDHⅡ是否為雙環(huán)醇作用靶點,本部分論文首先采用小鼠原代脾淋巴細胞增殖模型、人外周血單個核細胞(human peripheral blood monouclear cells, hPBMC)增殖模型及IMPDHⅡ酶促反應動力學模型,考察雙環(huán)醇對IMPDH II酶活性的影響。結果顯示1μM、5μM的雙環(huán)醇能顯著抑制5μg/mLconcanavalinA (conA)刺激的小鼠原代脾淋巴細胞增殖；雙環(huán)醇對5μg/mL phytohemagglutinin (PHA)刺激的人外周血單個核細胞增殖有抑制的趨勢(僅兩次實驗)；在IMPDHⅡ酶促反應動力學模型中,低濃度雙環(huán)醇(0.1μM,0.5μM, 1μM,5μM, 10μM)具有促進IMPDHⅡ酶活的趨勢,而高濃度雙環(huán)醇(5OμM, 100μM,200μM)具有抑制]MPDHⅡ酶活性的趨勢,但均不具統(tǒng)計學意義。以上結果提示雙環(huán)醇并不是傳統(tǒng)意義的IMPDH ⅡI酶活性抑制劑。進一步考察雙環(huán)醇對IMPDHⅡ生物學功能的影響。結果顯示,雙環(huán)醇可促進活化的TLR2受體對ⅡMPDH Ⅱ的募集作用,募集IMPDHⅡ的TLR2無法向下游傳遞炎癥信號,繼而抑制下游NF-κB通路的激活與細胞炎癥因子TNF-α、IL-1β的釋放。這可能為雙環(huán)醇抗炎機制之一。論文第一部分工作顯示,在單核細胞,雙環(huán)醇能夠通過促進IMPDH Ⅱ進入脂閥,與活化的TLR2結合,進而影響TLR2下游炎癥通路,減少炎癥因子的釋放,發(fā)揮抗炎活性。在本部分實驗中,利用組織中的免疫細胞--巨噬細胞進一步考察雙環(huán)醇的抗炎作用及機制。鑒于近年來雙環(huán)醇在非酒精性脂肪肝治療中療效良好,我們也同時考察了雙環(huán)醇對同時參與炎癥及代謝作用的代謝性核受體表達的影響。50ng/mL佛波酯(phorbol myristate acetate, PMA)作用人單核細胞THP-1細胞2天,該細胞分化為巨噬細胞。利用300ng/mL pam3刺激THP-1巨噬細胞6h以激活TLR2受體,同時考察雙環(huán)醇的作用。ELISA結果顯示,5、10、50μM雙環(huán)醇對pam3束(?)激的巨噬細胞炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β釋放均表現(xiàn)出良好的抑制活性。Western結果顯示,在pam3刺激TLR2活化的NF-κB經(jīng)典通路中,雙環(huán)醇可顯著降低NF-κ,B通路上游PI3K的表達,抑制AKT、IKK的磷酸化水平,進而降低IκB蛋白的磷酸化,減少IκB的降解,抑制NF-κB入核,減少炎癥因子的釋放。對于在炎癥及代謝中均發(fā)揮重要作用的代謝性核受體PPARy、LXRα與RXRα,雙環(huán)醇對PPARy表現(xiàn)出劑量依賴性的激活作用。在本論文第三部分工作中,利用經(jīng)典的免疫激活劑脂多糖(LPS)刺激TLR4受體激活人THP-1巨噬細胞,進一步考察雙環(huán)醇對LPS/TLR4引起炎癥反應的作用及機制。同時分析與pam3/TLR2通路的異同。ELISA結果顯示,雙環(huán)醇對LPS/TLR4引起的巨噬細胞炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6釋放亦有顯著抑制活性,但雙環(huán)醇對TLR4表達,Akt、IKK磷酸化均無明顯影響,卻能抑制PI3K的表達,顯著促進IκB,抑制IrB磷酸化,進而抑制NF-κB入核。進一步的western結果顯示：雙環(huán)醇對未受刺激及受刺激的巨噬細胞均顯著上調(diào)PPARy的表達。利用siRNA技術對PPARy進行干擾后,western結果顯示,雙環(huán)醇仍能夠上調(diào)PPARy的表達,但激活作用不及干擾前。且PPARy干擾后,雙環(huán)醇對IκB表達的促進作用亦隨之降低,提示雙環(huán)醇對IκB表達的上調(diào)作用可能是部分通過PPARy而引起。同時,在PPARy干擾后,雙環(huán)醇抑制LPS刺激巨噬細胞所致細胞因子(TNF-α、IL-1β)的釋放及基因表達(TNF-α)升高的作用有所減弱,進一步提示雙環(huán)醇對PPARy的促表達作用可能是其促IκB表達而發(fā)揮抗炎作用的機制。
【關鍵詞】：雙環(huán)醇 次黃嘌呤脫氫酶Ⅱ TLR2 淋巴細胞 NF-κB 雙環(huán)醇 TLR2 NF-κB 細胞因子 PPARγ 雙環(huán)醇 PPARγ TLR4 NF-κB 細胞因子 小干擾RNA 葡萄糖激酶
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 第一部分 雙環(huán)醇對次黃嘌呤脫氫酶Ⅱ的作用7-9
• 中文摘要7
• 英文摘要7-8
• 小結8-9
• 第二部分 雙環(huán)醇對pam3刺激巨噬細胞TLR2信號傳導通路的影響及機制9-11
• 中文摘要9
• 英文摘要9-10
• 小結10-11
• 第三部分 雙環(huán)醇對LPS刺激巨噬細胞TLR4信號傳導通路的影響及機制11-13
• 中文摘要11
• 英文摘要11-12
• 小結12-13
• 全文總結13-15
• 第一部分 雙環(huán)醇對次黃嘌呤脫氫酶Ⅱ的作用15-38
• 前言15-16
• 材料與方法16-25
• 實驗結果25-33
• 1. 雙環(huán)醇與IMPDHⅡ的虛擬分子對接結果25-26
• 2. 雙環(huán)醇對conA刺激的小鼠原代脾淋巴細胞增殖的影響26-27
• 3. 雙環(huán)醇對PHA刺激的人外周血單個核細胞增殖(hPBMC)的影響27-28
• 4. 雙環(huán)醇對IMPDHⅡ酶促反應動力學的影響28-29
• 5. 雙環(huán)醇對pam3激活的TLR2募集IMPDHⅡ的影響29-30
• 6. 雙環(huán)醇對pam3激活的THP-1細胞IκB、NF-κB表達的影響30-31
• 7. 雙環(huán)醇對pam3激活THP-1單核細胞細胞因子釋放的影響31-33
• 討論33-36
• 參考文獻36-38
• 第二部分 雙環(huán)醇對pam3刺激巨噬細胞TLR2信號傳導通路的影響及機制38-52
• 前言38-39
• 材料與方法39-43
• 實驗結果43-48
• 1. PMA刺激單核細胞THP-1分化為巨噬細胞的條件探索43
• 2. 雙環(huán)醇對pam3刺激的巨噬細胞細胞因子釋放的影響43-44
• 3. 雙環(huán)醇對pam3刺激巨噬細胞TLR2后NF-κB經(jīng)典通路的影響44-46
• 4. 雙環(huán)醇對具抗炎作用的代謝性核因子表達的影響46-48
• 討論48-50
• 參考文獻50-52
• 第三部分 雙環(huán)醇對LPS刺激巨噬細胞TLR4信號傳導通路的影響及機制52-72
• 前言52
• 材料與方法52-58
• 實驗結果58-69
• 1. 雙環(huán)醇對LPS刺激的巨噬細胞細胞因子釋放的影響58
• 2. 雙環(huán)醇在巨噬細胞對LPS刺激TLR4后NF-κB經(jīng)典通路的影響58-60
• 3. 雙環(huán)醇對LPS刺激的巨噬細胞代謝性核因子表達的影響60-61
• 4. 雙環(huán)醇對未刺激的巨噬細胞PPARγ表達的影響61-62
• 5. 雙環(huán)醇對未刺激巨噬細胞siRNA干擾PPARγ后的PPARγ、IκB表達的影響62-64
• 6. 雙環(huán)醇對LPS刺激siRNA干擾后巨噬細胞的PPARγ、IκB表達的影響64-65
• 7. 雙環(huán)醇對LPS刺激的siRNA干擾后巨噬細胞細胞因子釋放的影響65-66
• 8. 雙環(huán)醇對LPS刺激的siRNA干擾后巨噬細胞TNF-α mRNA轉(zhuǎn)錄量的影響66-68
• 9. 雙環(huán)醇對葡萄糖激酶(GK)酶活性的影響68-69
• 討論69-71
• 參考文獻71-72
• 附錄 雙環(huán)醇對雷公藤多苷片及抗腫瘤藥物誘導肝損傷的保護作用及機制研究72-83
• 中文摘要72-73
• Abstract73-74
• 前言74
• 材料與方法74-76
• 實驗結果76-81
• 1. 雙環(huán)醇對雷公藤多苷致肝損傷小鼠血清生化指標的影響76-77
• 2. 雙環(huán)醇對雷公藤多苷致小鼠肝損傷肝臟病理結果77-78
• 3. 雙環(huán)醇對雷公藤多苷致小鼠肝損傷肝組織蛋白表達情況78-79
• 4. 雷公藤甲素對WB-F344細胞胞間通訊功能的影響79
• 5. 雙環(huán)醇對CDDP聯(lián)合GEM致肝腎損傷荷瘤小鼠血清生化指標的影響79-80
• 6. 雙環(huán)醇對CDDP聯(lián)合GEM致肝腎損傷荷瘤小鼠抑瘤率及死亡率影響80-81
• 討論81-82
• 參考文獻82-83
• 綜述83-96
• 參考文獻93-96
• 致謝96-97
• 個人簡歷97
• 發(fā)表文章和參加會議97-98

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 涂峗;萬以葉;;雙環(huán)醇片對肺癌患者藥物性肝損傷的防治研究[J];醫(yī)學研究雜志;2012年07期

2 胡小鵬;尹航;王瑋;楊曉勇;任亮;劉航;車樂;張小東;;雙環(huán)醇片治療腎移植術后藥物性肝損傷的療效觀察[J];胃腸病學和肝病學雜志;2012年04期

  本文關鍵詞：雙環(huán)醇對次黃嘌呤脫氫酶Ⅱ的作用及其抗炎機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：320693