本文關(guān)鍵詞：單寧酸對(duì)血小板生成的影響及抗輻射作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：臨床上原發(fā)性或繼發(fā)性血小板減少癥以及由電離輻射引起的骨髓造血功能損傷均可導(dǎo)致血小板水平嚴(yán)重低下。血小板在人體生理和病理過程中發(fā)揮著止血、傷口愈合、修復(fù)血管、血栓形成、炎癥反應(yīng)等重要作用。血小板嚴(yán)重減少可導(dǎo)致機(jī)體出血、感染、疾病預(yù)后差,甚至死亡[1]。目前臨床上治療血小板減少癥的藥物種類較少,并且它們大多還存在著起效慢、副作用大及價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)。此外,現(xiàn)有升血小板藥物基本上都是注射給藥,而相對(duì)于注射給藥,口服給藥更為安全,尤其是類似食療方式更能為病人所接受。因此,通過尋找并開發(fā)食物中具有促進(jìn)血小板生成和抗輻射作用的特殊成分,或許能為有效防治電離輻射所致血小板減少提供新思路。骨髓中的巨核細(xì)胞來源于造血干細(xì)胞,并通過增殖、分化、多倍體形成等過程產(chǎn)生血小板[2]。因此,促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖、分化和成熟,減輕并保護(hù)各種原因所致的巨核細(xì)胞損傷,可直接影響血小板的生成數(shù)量和體內(nèi)血小板水平。血小板生成素(TPO)是血小板生成最重要的調(diào)控因子,其主要通過激活相關(guān)信號(hào)通路而促進(jìn)巨核細(xì)胞的增殖、分化和成熟[3]。食物中的某些成分可能具有類似于TPO或者其它細(xì)胞因子的功能,對(duì)巨核細(xì)胞和血小板生成起到一定的調(diào)控作用。單寧酸(Tannic acid,TA)是廣泛存在于石榴、核桃、葡萄籽、花生、余甘子等果實(shí)成分中的一種多酚化合物[4]。在民間一直都有花生紅衣、石榴等能夠補(bǔ)血和升血小板的說法,但具體TA是否可以直接促進(jìn)血小板生成及其可能機(jī)制尚不清楚。不過有研究表明,TA能夠通過激活ERK和p38激酶通路而影響某些細(xì)胞的分化和成熟[5],至于其是否也會(huì)對(duì)巨核細(xì)胞的分化和成熟發(fā)揮調(diào)控作用?值得深入探討。此外,根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn),TA又具有明顯的抗氧化應(yīng)激活性[6],在化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)器官、組織損傷以及動(dòng)物衰老的情況下給予TA可發(fā)揮一定的保護(hù)作用,并且TA能夠通過抑制氧化應(yīng)激而減輕化學(xué)毒物和輻射誘導(dǎo)的DNA損傷[7]。所以,我們推測(cè)TA可能也會(huì)對(duì)輻射誘導(dǎo)的骨髓巨核細(xì)胞損傷起到一定的防護(hù)作用。為此,本文重點(diǎn)探討了TA對(duì)正常及放射損傷情況下血小板生成的影響作用,并對(duì)其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了深入分析。實(shí)驗(yàn)分為兩部分,第一部分主要研究TA對(duì)巨核細(xì)胞增殖、分化、成熟和產(chǎn)生血小板的影響:選擇具有增殖能力的人M07e細(xì)胞株為早期巨核祖細(xì)胞代表,觀察ta是否具有促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖的作用;選擇成熟且具有分化能力的hel、meg-01細(xì)胞株和人原代巨核細(xì)胞,觀察ta促巨核細(xì)胞分化及多倍體形成能力,并探索相關(guān)機(jī)制;最后,小鼠體內(nèi)應(yīng)用ta,觀察外周血小板水平變化,明確ta在體內(nèi)是否具有促血小板生成作用。第二部分主要研究ta對(duì)電離輻射誘導(dǎo)巨核細(xì)胞損傷的防治作用及相關(guān)機(jī)制:首先在體外觀察給予不同濃度ta預(yù)處理對(duì)電離輻射(10.0gy60coγ射線照射)誘導(dǎo)m07e細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,分析活性氧(ros)水平、線粒體膜電位(mmp)和凋亡率變化,明確ta減輕或阻抗電離輻射誘導(dǎo)巨核細(xì)胞損傷的可能機(jī)制;進(jìn)而,復(fù)制急性放射損傷小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,分別于照前、照后及照前+照后給予ta處理,觀察照后21天內(nèi)小鼠存活率,并分析外周血小板水平、骨髓巨核細(xì)胞數(shù)目和集落數(shù)量變化,以驗(yàn)證體內(nèi)應(yīng)用ta是否能夠有效防治電離輻射誘導(dǎo)的骨髓巨核細(xì)胞損傷和血小板減少。主要結(jié)果與結(jié)論:1、cck-8法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),不同濃度ta處理均不能促進(jìn)巨核細(xì)胞株m07e的增殖,提示ta對(duì)早期巨核祖細(xì)胞的增殖無顯著影響。2、流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn),巨核細(xì)胞株hel、meg-01及原代培養(yǎng)巨核細(xì)胞受到ta處理后,成熟巨核細(xì)胞的分化標(biāo)記分子cd42b表達(dá)水平顯著升高,四倍體細(xì)胞的比例也顯著增多,說明ta具有促進(jìn)巨核細(xì)胞分化、成熟的作用。3、westernblot結(jié)果表明,ta能夠顯著激活erk1/2信號(hào)通路,而給予erk1/2信號(hào)通路阻斷劑u0126則能抑制ta的促巨核細(xì)胞分化作用,提示ta可能通過激活erk1/2信號(hào)通路而促進(jìn)巨核細(xì)胞的分化與成熟。4、balb/c小鼠給予300mg/kg/d的ta溶液灌胃處理,外周血小板水平顯著升高,進(jìn)一步證實(shí)ta應(yīng)用后能夠促進(jìn)體內(nèi)血小板的生成。5、mtt法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ta能夠劑量依賴性地提高受照(10.0gyco60γ射線照射)m07e細(xì)胞的存活率;流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示,一定濃度的ta能夠顯著抑制電離輻射誘導(dǎo)的m07e細(xì)胞凋亡,表明ta對(duì)巨核細(xì)胞具有輻射防護(hù)作用。6、dcfh-da熒光分析結(jié)果顯示,ta能夠顯著降低放射損傷巨核細(xì)胞內(nèi)的總活性氧ros水平,提示ta對(duì)巨核細(xì)胞的輻射防護(hù)作用可能與其擁有的顯著抗氧化應(yīng)激能力有關(guān)。7、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)羅丹明123標(biāo)記的巨核細(xì)胞熒光強(qiáng)度變化結(jié)果顯示,單純輻照組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度低于正常對(duì)照組,ta處理組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度則顯著高于單純照射組,提示ta可能通過穩(wěn)定線粒體膜電位而發(fā)揮抑制輻射誘導(dǎo)巨核細(xì)胞凋亡的作用。8、采用重度放射損傷(5.0gyco60γ射線照射)小鼠觀察ta處理對(duì)血小板水平恢復(fù)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)照后第9-21天,ta處理組小鼠的外周血小板水平顯著高于單純照射組,在第18天時(shí)TA處理組小鼠的血小板計(jì)數(shù)基本恢復(fù)到正常水平,而單純照射組還處在緩慢恢復(fù)期;骨髓切片HE染色結(jié)果顯示,TA處理組小鼠骨髓組織中包括巨核細(xì)胞在內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)目顯著增多;體外集落形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),TA照前給藥組多系集落形成數(shù)量顯著高于單純照射組,說明TA能夠有效防護(hù)電離輻射引起的巨核細(xì)胞損傷,并能促進(jìn)血小板水平的快速恢復(fù)。9、照前及照前+照后灌胃方式給予小鼠TA處理,可以顯著提高極重度放射損傷(7.0Gy Co60γ射線全身一次性照射)小鼠的21天存活率,進(jìn)一步證實(shí)TA具有明顯的輻射防護(hù)作用�？傊�,通過本實(shí)驗(yàn)我們首次發(fā)現(xiàn)TA具有促進(jìn)巨核細(xì)胞分化、成熟和血小板生成的作用,并初步闡明了其作用機(jī)理;同時(shí),發(fā)現(xiàn)TA還能通過抗氧化應(yīng)激途徑減輕電離輻射對(duì)骨髓巨核細(xì)胞的損傷作用,提示TA在防治電離輻射引起的血小板減少方面具有突出療效,值得進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：單寧酸、輻照損傷 巨核細(xì)胞 血小板 分化 凋亡
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表4-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 第一章 前言13-16
• 1.1 選題緣由13
• 1.2 研究背景13-14
• 1.3 研究意義14
• 1.4 研究?jī)?nèi)容14-15
• 1.5 研究方法15-16
• 第二章 單寧酸對(duì)血小板生成的影響及調(diào)控機(jī)制研究16-32
• 2.1 引言16
• 2.2 材料與方法16-23
• 2.3 結(jié)果23-29
• 2.4 討論29-31
• 2.5 小結(jié)31-32
• 第三章 單寧酸對(duì)電離輻射誘導(dǎo)巨核細(xì)胞損傷的防護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制研究32-50
• 3.1 引言32
• 3.2 材料與方法32-39
• 3.3 結(jié)果39-46
• 3.4 討論46-48
• 3.5 小結(jié)48-50
• 全文總結(jié)50-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 文獻(xiàn)綜述 天然活性成分調(diào)節(jié)巨核細(xì)胞-血小板研究進(jìn)展56-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陳石磊;陳芳;許楊;王崧;王艾平;粟永萍;王軍平;;重組胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ促進(jìn)輻射損傷小鼠血小板水平的恢復(fù)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年22期

2 吳蘇南;許楊;陳石磊;申明強(qiáng);陳芳;陳默;張舟;王崧;粟永萍;程天民;王軍平;;單寧酸對(duì)電離輻射所致巨核細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2015年07期

3 劉屏;穆麗華;韓亞亮;王東曉;馬亮;馬曉菲;王波;;雞血藤活性化合物兒茶素結(jié)構(gòu)修飾及抗輻射作用研究[J];解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào);2007年05期

4 賈海泉;金宏;李培兵;吳健全;南文考;王永輝;鄧炳楠;高蘭興;;大豆異黃酮對(duì)輻射小鼠骨髓細(xì)胞的防護(hù)作用[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

5 何科;;三七的藥理作用研究進(jìn)展[J];中國(guó)民族民間醫(yī)藥;2011年06期

6 陳國(guó)仙;花生衣和三七加味治療血小板減少性紫癜38例療效觀察[J];云南中醫(yī)中藥雜志;2002年05期

  本文關(guān)鍵詞：單寧酸對(duì)血小板生成的影響及抗輻射作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：315744