本文關(guān)鍵詞：行為和疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物檢測(cè)方法的研究及應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：生物標(biāo)志物在機(jī)體受到嚴(yán)重?fù)p害前可提供早期預(yù)警,不僅在臨床診斷、環(huán)境評(píng)估等領(lǐng)域發(fā)揮巨大作用,在心理、行為等社會(huì)科學(xué)等領(lǐng)域也逐漸引起廣泛的關(guān)注。建立生物樣品中生物標(biāo)志物快速、高效、準(zhǔn)確的定性定量分析方法,對(duì)有關(guān)學(xué)科的研究和發(fā)展有重要意義。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、組氨酸和皮質(zhì)醇已被證明可以作為行為和疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物,本文主要對(duì)這幾種物質(zhì)的檢測(cè)方法進(jìn)行研究,并初步應(yīng)用于實(shí)際樣品的測(cè)定。本文主要從以下幾個(gè)方面開(kāi)展工作：(1)利用復(fù)合組分納米纖維材料建立人血漿中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的樣品前處理方法和高效液相色譜檢測(cè)方法；(2)基于金屬離子修飾的納米纖維固相萃取實(shí)現(xiàn)快速前處理,建立高效液相色譜-紫外法測(cè)定唾液組氨酸；(3)采用聚苯乙烯納米纖維固相萃取進(jìn)行快速樣品前處理,建立唾液皮質(zhì)醇高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法；(4)唾液皮質(zhì)醇測(cè)定新方法在人群心理和行為實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用研究；(5)探究唾液組氨酸應(yīng)激響應(yīng)特征。論文的主要工作如下：1、利用聚乙烯吡咯烷酮-聚苯乙烯復(fù)合組分納米纖維固相萃取柱提取人血漿中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)本文建立了一個(gè)簡(jiǎn)單、快速、高效的樣品預(yù)處理方法,以聚乙烯吡咯烷酮-聚苯乙烯復(fù)合組分納米纖維作為吸附材料,制成纖維固相萃取柱(PFSPE),提取人血漿中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)。血漿樣品無(wú)需沉淀蛋白和衍生,離心后直接取上清液加載到PFSPE柱中,用硫酸-甲醇混合溶液(1：9,v/v)洗脫吸附在纖維上的目標(biāo)物,用高效液相色譜-熒光檢測(cè)器對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定性定量分析。方法的提取回收率為60.3%～72.5%。2、基于金屬離子修飾的納米纖維作為固相萃取吸附劑聯(lián)合高效液相色譜測(cè)定唾液組氨酸本文研制了一種新型的聚苯乙烯-乙酸鋅復(fù)合納米纖維,并將其作為固相萃取吸附劑,裝填制成固相萃取柱,聯(lián)合高效液相色譜建立了唾液中組氨酸的定量分析方法。利用組氨酸和重氮化合物的偶氮反應(yīng),對(duì)唾液樣品進(jìn)行柱前衍生,并將棕紅色產(chǎn)物過(guò)PFSPE柱,用含3% (v/v)1.45M碳酸鈉(v/v)的水-甲醇混合溶液(v/v=4：6)洗脫吸附在纖維上的目標(biāo)物,用二極管陣列檢測(cè)器在463nm波長(zhǎng)下對(duì)待測(cè)物進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)對(duì)衍生反應(yīng)和提取條件的優(yōu)化,得到該方法的最低檢測(cè)限為0.03μg/mL,定量限為0.1μg/mL,線性范圍為O.lμg/mL～5μg/mL,提取回收率為68.5%。該方法靈敏度高,選擇性好,已成功地用于實(shí)際唾液樣品中組氨酸的測(cè)定。3、基于聚苯乙烯納米纖維固相萃取技術(shù)的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)唾液皮質(zhì)醇的研究本文用聚苯乙烯納米纖維固相萃取柱對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,建立了快速測(cè)定唾液皮質(zhì)醇的高效液相色譜-電噴霧-串聯(lián)質(zhì)譜法。采用內(nèi)標(biāo)法定量,檢出限為30 ng/L,有良好的準(zhǔn)確性和精密度,操作簡(jiǎn)單,大大節(jié)省了分析時(shí)間和樣品用量。4、唾液皮質(zhì)醇測(cè)定新方法在人群心理和行為實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用研究將建立的唾液皮質(zhì)醇檢測(cè)新方法用于測(cè)定主題演講被試唾液皮質(zhì)醇水平,探究應(yīng)激前后皮質(zhì)醇濃度變化與焦慮狀態(tài)和人格特質(zhì)和相關(guān)性。結(jié)果顯示,演講應(yīng)激后,被試的唾液皮質(zhì)醇水平顯著增加(p0.05)。被試初始皮質(zhì)醇水平和狀態(tài)焦慮量表得分呈顯著正相關(guān)(r=0.497,p=0.001)。應(yīng)激前后皮質(zhì)醇的變化率和情緒穩(wěn)定性量表得分呈顯著正相關(guān)(,.=0.395,p=0.016)。以上結(jié)果表明,唾液皮質(zhì)醇對(duì)應(yīng)激不僅有顯著響應(yīng),且響應(yīng)特征和人格特質(zhì)有對(duì)應(yīng)性。5、唾液組氨酸檢測(cè)在人群心理、行為研究中的應(yīng)用應(yīng)激及其生物標(biāo)志物,如唾液皮質(zhì)醇,α-淀粉酶等,已經(jīng)在學(xué)術(shù)界引起了廣泛的關(guān)注。組氨酸是一種半必需氨基酸,對(duì)嬰幼兒和動(dòng)物的成長(zhǎng)至關(guān)重要,但關(guān)于唾液組氨酸對(duì)應(yīng)激響應(yīng)的研究甚少。本次研究先后招募了八十名健康被試,設(shè)計(jì)了對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,其中實(shí)驗(yàn)組被試接受寒冷刺激或主題演講應(yīng)激任務(wù)。本文旨在驗(yàn)證組氨酸作為應(yīng)激標(biāo)志物的可行性,并探究焦慮狀態(tài)和人格特質(zhì)對(duì)應(yīng)激任務(wù)中被試唾液組氨酸濃度變化的影響。結(jié)果顯示,大約一半的被試在應(yīng)激任務(wù)后組氨酸水平上升,另一半下降,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義仞0.05)。主題演講實(shí)驗(yàn)中,組氨酸變化率和狀態(tài)-特質(zhì)焦慮量表得分(r=0.49,p=0.002)以及情緒穩(wěn)定性量表得分(r=0.37,p=0.021)呈顯著正相關(guān)。寒冷刺激實(shí)驗(yàn)中,我們得到了同樣的結(jié)果,即組氨酸變化率和狀態(tài)-特質(zhì)焦慮量表得分(r=0.78,p=0.000)以及情緒穩(wěn)定性量表(r.=0.52,p=0.018)呈顯著正相關(guān)。本次研究表明,唾液組氨酸可以作為新的生物標(biāo)志物應(yīng)用于應(yīng)激反應(yīng)研究,其響應(yīng)特征和焦慮狀態(tài)、人格特質(zhì)有對(duì)應(yīng)性。
【關(guān)鍵詞】：單胺類神經(jīng)遞質(zhì) 組氨酸 皮質(zhì)醇 高效液相色譜 基于纖維的固相萃取
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 論文主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)9-13
• 主要縮寫(xiě)詞表13-14
• 緒論14-17
• 第一章 基于復(fù)合組分納米纖維提取血漿單胺類神經(jīng)遞質(zhì)17-23
• 1.1 引言17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)部分17-19
• 1.2.1 儀器17
• 1.2.2 試劑17-18
• 1.2.3 方法18-19
• 1.3 結(jié)果和討論19-22
• 1.3.1 纖維表征19-20
• 1.3.2 提取條件的優(yōu)化20
• 1.3.3 復(fù)合納米纖維的絕對(duì)提取率20-21
• 1.3.4 色譜圖和方法學(xué)驗(yàn)證21-22
• 1.4 結(jié)論22-23
• 第二章 金屬離子修飾的纖維快速提取-高效液相色譜測(cè)定法唾液組氨酸23-33
• 2.1 引言23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分24-26
• 2.2.1 儀器和設(shè)備24
• 2.2.2 試劑24
• 2.2.3 色譜條件24
• 2.2.4 溶液的配制24-25
• 2.2.5 納米纖維的制備25
• 2.2.6 納米纖維的表征25
• 2.2.7 液樣品前處理25-26
• 2.2.8 工作曲線的制備26
• 2.3 結(jié)果和討論26-32
• 2.3.1 衍生條件的優(yōu)化26-28
• 2.3.2 納米纖維固相萃取提取條件的優(yōu)化28-30
• 2.3.3 方法學(xué)研究30-31
• 2.3.4 新方法在實(shí)際樣品測(cè)定中的應(yīng)用31-32
• 2.4 結(jié)論32-33
• 第三章 纖維萃取聯(lián)合高效液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定唾液皮質(zhì)醇33-39
• 3.1 引言33-34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分34-35
• 3.2.1 儀器與試劑34
• 3.2.2 納米纖維的制備34
• 3.2.3 樣品前處理34-35
• 3.2.4 色譜質(zhì)譜條件35
• 3.2.5 工作曲線的制備35
• 3.3 結(jié)果和討論35-38
• 3.3.1 線性關(guān)系考察35-36
• 3.3.2 回收率和精密度36
• 3.3.3 唾液樣品預(yù)處理方法比較36-37
• 3.3.4 質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化及質(zhì)譜圖37-38
• 3.4 結(jié)論38-39
• 第四章 唾液皮質(zhì)醇檢測(cè)方法在人群心理和行為實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用39-45
• 4.1 引言39
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分39-41
• 4.2.1 被試39
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 4.2.3 程序40
• 4.2.4 主題演講40
• 4.2.5 樣品采集和分析40-41
• 4.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)41
• 4.3 結(jié)果和討論41-44
• 4.3.1 人口學(xué)特征41
• 4.3.2 唾液皮質(zhì)醇對(duì)演講應(yīng)激的響應(yīng)41
• 4.3.3 焦慮狀態(tài)和初始唾液皮質(zhì)醇水平的關(guān)系41-43
• 4.3.4 人格特質(zhì)和唾液皮質(zhì)醇的關(guān)系43
• 4.3.5 焦慮狀態(tài)和唾液皮質(zhì)醇應(yīng)激響應(yīng)的關(guān)系43
• 4.3.6 人格特質(zhì)和演講應(yīng)激前后皮質(zhì)醇變化率的關(guān)系43-44
• 4.4 結(jié)論44-45
• 第五章 唾液組氨酸檢測(cè)在人群心理、行為研究中的應(yīng)用45-52
• 5.1 引言45
• 5.2 實(shí)驗(yàn)部分45-46
• 5.2.1 被試45-46
• 5.2.2 應(yīng)激實(shí)驗(yàn)46
• 5.2.3 樣品采集和分析46
• 5.2.4 數(shù)據(jù)分析方法46
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-50
• 5.3.1 人口學(xué)特征46
• 5.3.2 應(yīng)激前后唾液組氨酸濃度變化46-47
• 5.3.3 主題演講實(shí)驗(yàn)中組氨酸應(yīng)激響應(yīng)特征和焦慮狀態(tài)及人格特質(zhì)的關(guān)系47-49
• 5.3.4 寒冷刺激實(shí)驗(yàn)中組氨酸應(yīng)激響應(yīng)特征和焦慮狀態(tài)及人格特質(zhì)的關(guān)系49-50
• 5.4 討論50-51
• 5.5 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-61
• 綜述61-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 致謝71-72
• 作者簡(jiǎn)介72

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