本文關(guān)鍵詞：沙利度胺對正常及組胺刺激后人真皮成纖維細(xì)胞分泌的TGF-β1、MMP-1、TIMP-1基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:成纖維細(xì)胞是皮膚真皮層最重要的細(xì)胞之一,附著在膠原纖維上,可以合成和分泌大量的膠原蛋白,這對于維持皮膚的彈性和韌性有著重要作用[1]。許多疾病的發(fā)生與膠原蛋白的代謝異常有明顯相關(guān)性。有研究表明系統(tǒng)性硬皮病和病理性瘢痕[2]是由于成纖維細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)和以膠原蛋白為主的細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積造成的。細(xì)胞因子中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖,刺激膠原蛋白合成,同時可以刺激膠原酶的產(chǎn)生。TGF-β1被認(rèn)為在瘢痕形成中最重要的細(xì)胞因子[3-4],可以強(qiáng)烈促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。在正常情況細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解保持著動態(tài)平衡,以維持組織的正常結(jié)構(gòu)與功能。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)與其抑制因子基質(zhì)金屬抑制蛋白酶(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMPs)在這種平衡中起著重要作用[5]。MMP-1是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的重要一員,在創(chuàng)傷修復(fù)中對啟動膠原的降解起著關(guān)鍵作用,是膠原降解的關(guān)鍵酶。TIMP-1是MMP-1最重要的抑制因子,可以與MMP-1按比例1:1形成復(fù)合體抑制該酶的活性[6]。隨著沙利度胺(THD)在麻風(fēng)、結(jié)節(jié)性紅斑等疾病治療上取得良好效果,研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺具有抗炎、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用。目前有實驗證明沙利度胺可以通過抑制TGF-β、TNF-α因子對抗肺纖維化的進(jìn)程[7]。大量實驗均已證明肥大細(xì)胞分泌的組胺可以刺激成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成增多,故本實驗用組胺作為成纖維細(xì)胞的刺激因子誘導(dǎo)纖維化病理細(xì)胞模型。本課題通過體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞,研究沙利度胺對組胺刺激后人成纖維細(xì)胞分泌的TGF-β1、MMP-1及TIMP-1的影響。目的:探討沙利度胺對正常及組胺刺激后人真皮成纖維細(xì)胞分泌的TGF-β1、MMP-1、TIMP-1的mRNA的影響。方法:1使用體積分?jǐn)?shù)為20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,通過消化-組織塊混合法對人正常真皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)。2通過波形蛋白免疫組化染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。3實驗分組實驗分為空白對照組(正常成纖維細(xì)胞)、沙利度胺組、組胺組、組胺+沙利度胺組。4經(jīng)前期實驗測定,沙利度胺的濃度在10~(-5)mol/l時對正常成纖維細(xì)胞的增殖活性無影響,經(jīng)查閱大量文獻(xiàn),本實驗所用的組胺濃度為100um。5采用sybrgreeni染料法熒光定量pcr測定tgf-β1的mrna的表達(dá)情況及進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。按上述分組的要求處理細(xì)胞,每組均設(shè)三個樣本,接種在25ml培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。24h后提取各組的總rna。應(yīng)用熒光定量pcr對tgf-β1mrna基因的表達(dá)量進(jìn)行測定,并用以上測得數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。6采用sybrgreeni染料法熒光定量pcr測定mmp-1及timp-1的mrna的表達(dá)情況及進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。按方法5得到mmp-1及timp-1mrna基因表達(dá)量,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1沙利度胺對組胺誘導(dǎo)后人成纖維細(xì)胞tgf-β1mrna的影響。空白組、沙利度胺組、組胺組、組胺+沙利度胺組的tgf-β1mrna的rq值分別為0.9837±0.0125、0.849±0.0276、2.5653±0.0935、0.648±0.0321。各組rq值不全相等(p0.05),組內(nèi)兩兩比較時均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)果提示:經(jīng)組胺誘導(dǎo)后tgf-β1mrna表達(dá)量增加。沙利度胺可抑制正常的人真皮成纖維細(xì)胞tgf-β1mrna的表達(dá),且經(jīng)過組胺誘導(dǎo)后其抑制作用更顯著。2沙利度胺對組胺誘導(dǎo)后人成纖維細(xì)胞mmp-1mrna的影響。空白組、沙利度胺組、組胺組、組胺+沙利度胺組的mmp-1mrna的rq值分別為0.9973±0.0074、1.2773±0.0351、1.071±0.0137、1.7523±0.0334。各組rq值不全相等(p0.05),且組內(nèi)兩兩比較時均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)果提示:組胺和沙利度胺可以促進(jìn)正常人真皮成纖維細(xì)胞mmp-1mrna的表達(dá),經(jīng)過組胺誘導(dǎo)后沙利度胺對其促進(jìn)作用更明顯。3沙利度胺對組胺誘導(dǎo)后人成纖維細(xì)胞timp-1mrna的影響�？瞻捉M、沙利度胺組、組胺組、組胺+沙利度胺組的TIMP-1mRNA的RQ值分別為0.997±0.007、0.1687±0.0015、0.9563±0.0312、0.1173±0.005。對各組的RQ值進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,四組數(shù)據(jù)方差不齊�？瞻捉M與組胺組相比較沒有顯著性差異;沙利度胺組較空白組TIMP-1mRNARQ值降低,兩者間有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);組胺+沙利度胺組與組胺組相比較RQ降低,兩者間有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);組胺+沙利度胺組與沙利度胺組相比較RQ降低,兩者間有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示:沙利度胺可以抑制正常成纖維細(xì)胞TIMP-1m RNA表達(dá),在組胺誘導(dǎo)后對其抑制作用更明顯。結(jié)論1經(jīng)100UM組胺誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞TGF-β1 mRNA表達(dá)量明顯增加。2 10~(-5)mol/L沙利度胺可以促進(jìn)正常成纖維細(xì)胞MMP-1mRNA的表達(dá),經(jīng)過100UM組胺誘導(dǎo)后其促進(jìn)作用更明顯。3 10~(-5)mol/L沙利度胺可以抑制正常成纖維細(xì)胞TGF-β1 mRNA、TIMP-1 mRNA表達(dá),在100UM組胺誘導(dǎo)后對其抑制作用更明顯。
【關(guān)鍵詞】：沙利度胺 組胺 人真皮成纖維細(xì)胞 TGF-β1 MMP-1 TIMP-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-29
• 附表29-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 綜述 成纖維細(xì)胞的研究進(jìn)展39-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于蓉;岑瑛;;TGF-β_1/Smad3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與創(chuàng)傷后瘢痕形成[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2012年03期

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  本文關(guān)鍵詞：沙利度胺對正常及組胺刺激后人真皮成纖維細(xì)胞分泌的TGF-β1、MMP-1、TIMP-1基因表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：312357