本文關(guān)鍵詞：新型陽離子脂質(zhì)體的制備及載運(yùn)小干擾核酸能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：基因治療是通過糾正或者沉默靶基因來治療疾病的治療方法,然而基因治療的臨床應(yīng)用由于缺乏安全高效的基因遞送載體而受到極大限制。因此,研發(fā)新型安全高效的基因遞送載體成為了臨床應(yīng)用基因治療的關(guān)鍵,其中陽離子脂質(zhì)體成為載體研究的焦點(diǎn)之一。精胺是在真核細(xì)胞代謝中涉及的多胺并帶有四價正電荷,可作為陽離子載體,但由于其分子量太小導(dǎo)致其無法高效的運(yùn)載RNA或DNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。針對這一問題,本研究合成了五種較大分子量的新型精胺衍生物。隨后將五種新型精胺衍生物與膽固醇(摩爾比為1:1)共用制備成陽離子精胺脂質(zhì)體。并通過改變制備溶劑中乙醇的含量(體積比分別為50%,25%,12.5%),探討了乙醇含量對精胺脂質(zhì)體顆粒穩(wěn)定性的影響。實(shí)驗(yàn)表明溶劑中乙醇含量為12.5%的精胺脂質(zhì)體較其它濃度更為理想,即脂質(zhì)體YY-1-12.5,YY-2-12.5,YY-3-12.5,YY-4-12.5,YY-5-12.5。本文對比了精胺脂質(zhì)體包裹小干擾核酸(small interfering RNA,si RNA)前后粒徑電位和形貌的變化,并選取lipofactamine 2000轉(zhuǎn)染試劑作為陽性對照,從下面幾個方面比較這五種脂質(zhì)體的優(yōu)劣:(1)通過測定五種精胺脂質(zhì)體的包封率,分析五種精胺脂質(zhì)體結(jié)合并包裹si RNA的能力;(2)通過細(xì)胞熒光轉(zhuǎn)染試驗(yàn),初步探討這五種精胺脂質(zhì)體是否可以運(yùn)載si RNA進(jìn)入細(xì)胞,以及轉(zhuǎn)染效率;(3)通過靶基因敲低實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步證明這五種精胺脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率以及釋放效率;(4)測定五種精胺脂質(zhì)體對細(xì)胞的毒性大小。結(jié)果表明,YY-1-12.5,YY-2-12.5,YY-3-12.5,YY-4-12.5,YY-5-12.5這五種精胺脂質(zhì)體具有很強(qiáng)的包載si RNA的能力,可以安全高效的轉(zhuǎn)染進(jìn)入Hela細(xì)胞,有望成為新型安全高效的基因載體。
【關(guān)鍵詞】：精胺 精胺衍生物 siRNA 脂質(zhì)體
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 縮略詞表11-12
• 第一章 緒論12-21
• 1.1 基因治療現(xiàn)狀12
• 1.2 基因載體的分類12-17
• 1.2.1 病毒基因載體12-13
• 1.2.2 非病毒基因載體13-17
• 1.3 脂質(zhì)體構(gòu)建的研究現(xiàn)狀17-18
• 1.4 研究意義和研究內(nèi)容18-21
• 1.4.1 研究意義18-19
• 1.4.2 研究內(nèi)容19-21
• 第二章 精胺衍生物的合成21-35
• 2.1 引言21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑22-23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-32
• 2.3.1 N,N'-二-(3-氨基-丙基)-N,N'-二9十八烯基- 1,4-丁二胺（化合物 1）的合成方法24-25
• 2.3.2 3-((3-氨基-丙基)-{4-[(3-氨基-丙基)-(2-十八碳9烯氧基羰基-乙基)-氨基]-丁基}-氨基)-丙酸9十八烯基酯（化合物 2）的合成方法25
• 2.3.3 9-十八烯酸 (3-氨基-丙基)-{4-[(3-氨基-丙基)-十八碳9烯酰-氨基]-丁基}-酰胺（化合物 3）的合成方法25-26
• 2.3.4 N, N'-二-(3-氨基-丙基)-N, N'-二-(3-十八碳9烯氧基-丙基)-1, 4-丁二胺（化合物 4）的合成方法26
• 2.3.5 N, N'-二-(3-氨基-丙基)-N, N'-二-(3-十八烷氧基-丙基)-1, 4-丁二胺（化合物5）的合成方法26-27
• 2.3.6 {3-[4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基氨基)-丁基氨基]-丙基}-氨甲酸叔丁基酯（化合物 6）的合成方法27
• 2.3.7 1-溴9十八烯（化合物 7）的合成方法27-28
• 2.3.8 [3-({4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)9十八烯基-氨基]-丁基}9十八烯基-氨基)-丙基]-氨甲酸叔丁基酯（化合物 8）的合成28
• 2.3.9 丙烯酸9十八烯基酯（化合物 9）的合成28-29
• 2.3.10 3-((3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-{4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-(2-十八碳9烯氧基羰基-乙基)-氨基]-丁基}-氨基)-丙酸9十八碳烯基酯（化合物 10）的合成29
• 2.3.11 [3-({4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-9 十八烯酰氨基]-丁基}9十八烯�；�)-丙基]-氨甲酸叔丁基酯（化合物 11）的合成29-30
• 2.3.12 1-[3- (9-十八烯氧基)]-丙醇（化合物 12）的合成30
• 2.3.13 1-(3-溴-丙氧基)9十八烯（化合物 13）的合成30-31
• 2.3.14 {3-[{4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-(4-十七碳9烯氧基-丁基)-氨基]-丁基}-(3-十八碳9烯氧基-丙基)-氨基]-丙基}-氨甲酸叔丁基酯（化合物 14）的合成31
• 2.3.15 1-（3-十八烷氧基）-丙醇（化合物 15）的合成31-32
• 2.3.16 1-(3-溴-丙氧基)-十八烷(化合物 16)的合成32
• 2.3.17 {3-[{4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-(4-十七烷氧基-丁基)-氨基]-丁基}-(3-十八烷氧基-丙基)-氨基]-丙基}-氨甲酸叔丁基酯(化合物 17)的合成32
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論32-34
• 2.5 本章小結(jié)34-35
• 第三章 精胺脂質(zhì)體的制備與包封率測定35-52
• 3.1 引言35
• 3.2 實(shí)驗(yàn)儀器35-37
• 3.2.1 馬爾文納米粒度儀35-36
• 3.2.2 掃描電子顯微鏡36
• 3.2.3 熒光酶標(biāo)儀36-37
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法37-40
• 3.3.1 精胺脂質(zhì)體制備及包封率測定實(shí)驗(yàn)方法流程圖37
• 3.3.2 精胺脂質(zhì)體制備方法37-38
• 3.3.3 精胺脂質(zhì)體包裹siRNA前后的粒徑電位測量38-39
• 3.3.4 精胺脂質(zhì)體包裹siRNA前后顆粒的形態(tài)表征39
• 3.3.5 精胺脂質(zhì)體的包封率測定方法39-40
• 3.4 結(jié)果與討論40-51
• 3.4.1 精胺脂質(zhì)體制備結(jié)果與討論40-41
• 3.4.2 精胺脂質(zhì)體粒徑及表面電位結(jié)果與討論41-45
• 3.4.3 精胺脂質(zhì)體形態(tài)表征結(jié)果與討論45-48
• 3.4.4 精胺脂質(zhì)體包封率結(jié)果與討論48-51
• 3.5 本章小結(jié)51-52
• 第四章 精胺脂質(zhì)體載運(yùn)siRNA的體外細(xì)胞學(xué)評價52-67
• 4.1 引言52
• 4.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材52-53
• 4.3 實(shí)驗(yàn)儀器53-54
• 4.3.1 倒置熒光顯微鏡53
• 4.3.2 實(shí)時熒光定量PCR儀53-54
• 4.4 實(shí)驗(yàn)方法54-59
• 4.4.1 精胺脂質(zhì)體體外細(xì)胞學(xué)評價實(shí)驗(yàn)流程圖54
• 4.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)方法54-55
• 4.4.3 熒光轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)方法55-56
• 4.4.4 靶基因敲低實(shí)驗(yàn)方法56-57
• 4.4.5 RNA提取方法（Omega試劑盒）57
• 4.4.6 反轉(zhuǎn)錄RT-PCR實(shí)驗(yàn)方法（Takara，，PrimeScript? RT試劑盒）57-58
• 4.4.7 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)方法（Takara，PrimeScript? RT試劑盒）58-59
• 4.4.8 精胺脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性測定實(shí)驗(yàn)方法59
• 4.5 結(jié)果與討論59-66
• 4.5.1 熒光轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論59-63
• 4.5.2 靶基因敲低實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論63-65
• 4.5.3 精胺脂質(zhì)體細(xì)胞毒性測定65-66
• 4.6 本章小結(jié)66-67
• 總結(jié)與展望67-69
• 總結(jié)67-68
• 展望68-69
• 參考文獻(xiàn)69-75
• 附錄75-90
• 附錄 175-76
• 附錄 276-77
• 附錄 377-78
• 附錄 478-79
• 附錄 579-80
• 附錄 680-81
• 附錄 781-82
• 附錄 882-83
• 附錄 983-84
• 附錄 1084-85
• 附錄 1185-86
• 附錄 1286-87
• 附錄 1387-88
• 附錄 1488-89
• 附錄 1589-90
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果90-91
• 致謝91-92
• 附件92

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 唐明青;刁勇;許瑞安;;以殼聚糖為載體的口服基因藥物[J];中國生化藥物雜志;2009年02期

2 張夏華;吳廣通;李蓉;;基因治療現(xiàn)狀與前景[J];藥學(xué)實(shí)踐雜志;2009年01期

3 黃永焯;孫曉譯;梁文權(quán);;DNA/陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物的構(gòu)效關(guān)系[J];中國藥學(xué)雜志;2006年05期

  本文關(guān)鍵詞：新型陽離子脂質(zhì)體的制備及載運(yùn)小干擾核酸能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：312254