本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對小鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的肝移植已成為治療終末期肝臟疾病、急性肝功能衰竭的一種最有效的選擇。移植后的肝臟及膽道具有正常生物學(xué)功能是評價(jià)手術(shù)成功的關(guān)鍵。冷、熱缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury,IRI)是引發(fā)移植術(shù)后肝臟無功能的主要原因。而藥物預(yù)處理可以降低肝臟、膽道移植的缺血再灌注損傷,從而有可能降低肝臟失功的發(fā)生。白藜蘆醇(Resveratrol,RES)是一種能從葡萄、虎杖、花生、桑椹等多種植物中提取的具有很強(qiáng)生物活性的多酚類化合物,具有抗氧化、抗炎癥、抗血栓形成、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用,能夠預(yù)防心血管疾病、腫瘤的發(fā)生。目前白藜蘆醇主要被用于研究對心、腦、腎等器官的保護(hù)作用,而對肝臟,尤其是肝及膽道缺血再灌注損傷保護(hù)方面研究較少。本實(shí)驗(yàn)擬通過模擬肝移植的熱缺血、冷缺血到再灌注復(fù)溫的全過程,探索建立一種穩(wěn)定的、操作簡單的小鼠肝臟及膽道的冷、熱缺血再灌注損傷模型,然后利用該模型,探討白藜蘆醇預(yù)處理對肝臟及肝外膽道的缺血再灌注保護(hù)作用及其可能的機(jī)制,從而為白藜蘆醇更安全、合理的應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。方法本實(shí)驗(yàn)分為2個(gè)時(shí)間階段,第一階段為肝臟缺血再灌注模型建立與改進(jìn)的探索階段,第二階段為模型成功后,研究白藜蘆醇較長周期給藥對接受上述缺血再灌注損傷的肝及膽道的保護(hù)作用。第一階段:選取健康、成年、清潔30只KM小鼠,參考并改進(jìn)趙宏峰[2]的大鼠自體原位肝移植模型,用4℃含12.5U/ml肝素的乳酸林格氏液分別經(jīng)小鼠腸系膜上靜脈、腹主動脈雙重恒壓恒溫灌注,同時(shí)從膽囊置管冷沖洗膽道,并利用“支架法”吻合血管。觀察記錄手術(shù)時(shí)間、手術(shù)成功率及冷灌注效果;第二階段:再次選取健康、成年、清潔KM鼠60只,隨機(jī)分成三組,每組20只。A組為空白對照組,B組為缺血再灌注(IR)組,C組為白黎蘆醇預(yù)處理+缺血再灌注(IR)組,C組小鼠于實(shí)驗(yàn)開始前完成白藜蘆醇的預(yù)處理:給予RSV 20 mg/kg溶于100 g/L羥丙基-β-環(huán)糊精生理鹽水中灌胃0.2ml,連續(xù)2周,每日1次,B組給予相同體積的0.9%生理鹽水。A組僅行單純的開關(guān)腹手術(shù)。灌胃2周后的B、C兩組小鼠立即給予上述建立的肝臟及膽道冷熱缺血再灌注損傷。術(shù)后2小時(shí)留取標(biāo)本。比較各組小鼠的存活率、熱缺血時(shí)間、無肝期時(shí)間,肝功能指標(biāo)血清ALT水平,肝臟、肝外膽總管病理學(xué)形態(tài)改變和Western-blot檢測Gadd45a的表達(dá)。結(jié)果(1)缺血再灌注模型探索階段,實(shí)際共行手術(shù)50例,其中20例為預(yù)實(shí)驗(yàn),主要掌握麻醉劑量、手術(shù)技巧及其改進(jìn)方法。定型術(shù)30例,死亡10例,手術(shù)成功率66.7%(20/30),熱、冷缺血和再灌注時(shí)間可精確控制,無肝期控制在20分鐘以內(nèi)。雙重灌注加膽道沖洗效果好,病理切片示膽道壁毛細(xì)血管未見紅細(xì)胞。該模型達(dá)到模擬肝冷熱缺血再灌注損傷要求,具有操作簡單、穩(wěn)定性強(qiáng)、手術(shù)時(shí)間相對較短、專一性強(qiáng)的特點(diǎn)。(2)白藜蘆醇較長周期給藥實(shí)驗(yàn)階段,1)A組無傷亡,術(shù)中B、C組各死亡5例,B組與C組存活率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2)血清ALT水平:A組術(shù)后血清ALT水平處于正常范圍內(nèi);對比A組,B、C兩組各時(shí)間點(diǎn)的血清ALT水平都顯著升高,但C組低于B組,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示C組較B組肝功能損害輕。3.肝組織及肝外膽總管HE染色病理觀察:A組(對照組):肝細(xì)胞的形態(tài)大小基本正常,肝竇清晰可見,膽總管管壁完整,上皮細(xì)胞無脫落壞死。B組:肝細(xì)胞明顯水腫,胞漿淡染,有空泡變性,肝血竇變窄幾乎消失。膽總管上皮脫落壞死,上皮結(jié)構(gòu)模明顯不完整。C組較B組,肝細(xì)胞輕度水腫,胞漿深染,無空泡變性,肝血竇變窄,但尚可見,膽總管上皮結(jié)構(gòu)尚完整連續(xù),其病理損傷明顯減小。4.Western-blot檢測結(jié)果:空白對照組Gadd45a的表達(dá)為弱陽性;B組缺血再灌注組灰度值比值為0.24士0.07;C組白藜蘆醇預(yù)處理組Gadd45a灰度值比值為0.79士0.09;結(jié)果顯示C組較A、B組肝臟Gadd45a表達(dá)均明顯偏高,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。提示白藜蘆醇可提高缺血再灌注肝臟Gadd45a的早期表達(dá)。結(jié)論1、白藜蘆醇可以降低受冷熱缺血再灌注損傷的小鼠肝血清轉(zhuǎn)氨酶的水平,減輕肝及肝外膽管缺血再灌注損傷,對肝臟及肝外膽道具有明顯保護(hù)作用。2、白藜蘆醇可促進(jìn)缺血再灌注的肝組織Gadd45a的早期表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 動物模型 缺血再灌注損傷 Gadd45a
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 主要英文縮略詞表13-14
• 第1章 前言14-16
• 第2章 材料和方法16-24
• 第3章 結(jié)果24-28
• 第4章 討論28-34
• 結(jié)論34-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 附圖40-44
• 綜述44-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 攻讀學(xué)位期間主要研究成果52-54
• 致謝54

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本文編號：300863