本文關鍵詞：棘白菌素B高產(chǎn)菌株的選育及其發(fā)酵與提取工藝優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：阿尼芬凈在抗真菌藥物市場的價值越來越大,國內(nèi)許多制藥公司正在仿制該藥物。棘白菌素B是合成阿尼芬凈藥物的關鍵中間體,其生產(chǎn)成本嚴重影響仿制藥阿尼芬凈的制造成本及市場競爭力,十分有必要對其生產(chǎn)菌株及制備工藝進一步優(yōu)化研究。本論文在實驗室前期研究的基礎上,對棘白菌素B的產(chǎn)生菌進一步選育,并優(yōu)化選育獲得高產(chǎn)菌株的發(fā)酵、提取與純化工藝。以實驗室保藏的菌株SIPI-MT2為出發(fā)菌株,經(jīng)過紫外(UV)、亞硝基胍(NTG)等多種誘變方法誘變和篩選,獲得一株較為穩(wěn)定的高產(chǎn)菌株SIPI-W15,其發(fā)酵產(chǎn)物棘白菌素B效價較出發(fā)菌株提高了49.4%。對SIPI-W15菌株的搖瓶發(fā)酵工藝進行了優(yōu)化研究,通過單因素實驗考察了不同發(fā)酵培養(yǎng)基成分及含量對發(fā)酵效價的影響,在此基礎上利用響應面設計實驗獲得最佳發(fā)酵培養(yǎng)基,并優(yōu)化了培養(yǎng)條件。在優(yōu)化后的發(fā)酵工藝條件下,發(fā)酵效價較原始工藝提高了55%,搖瓶發(fā)酵棘白菌素B的產(chǎn)量達到了2013μg/ml。對棘白菌素B提取工藝進行優(yōu)化,確定丙酮為提取最佳溶劑及SP825型號大孔吸附樹脂為提取樹脂,完善整個提取純化工藝路線,制備獲得化合物棘白菌素B樣品,純度達到95.3%。
【關鍵詞】：棘白菌素B 菌株選育 發(fā)酵工藝 響應面 分離純化
【學位授予單位】：中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R915
【目錄】：

• 摘要6-7
• abstract7-8
• 英文縮寫說明8-12
• 第1章 緒論12-24
• 1.1 課題背景12-13
• 1.2 抗真菌藥物研究與使用歷史13-19
• 1.2.1 核苷類抗真菌藥物14-15
• 1.2.2 多烯類抗真菌藥物15
• 1.2.3 唑類抗真菌藥物15-16
• 1.2.4 烯丙胺類抗真菌化合物16
• 1.2.5 棘白菌素類抗真菌藥物16-19
• 1.3 棘白菌素B當前國內(nèi)外研究進展19
• 1.4 微生物發(fā)酵19-21
• 1.4.1 單因素方法19-20
• 1.4.2 正交實驗設計20
• 1.4.3 響應面法20-21
• 1.5 立題依據(jù)21-22
• 1.6 本論文主要研究內(nèi)容22-24
• 第2章 材料與方法24-37
• 2.1 實驗材料24-27
• 2.1.1 菌種來源24
• 2.1.2 培養(yǎng)基24-25
• 2.1.3 主要試劑25-26
• 2.1.4 主要實驗儀器26-27
• 2.2 實驗方法27-37
• 2.2.1 菌種保藏27
• 2.2.2 培養(yǎng)條件27-28
• 2.2.3 菌種選育28-30
• 2.2.4 突變株的篩選30
• 2.2.5 菌種譜系30-31
• 2.2.6 傳代穩(wěn)定性31
• 2.2.7 培養(yǎng)基優(yōu)化31-32
• 2.2.8 培養(yǎng)條件優(yōu)化32-33
• 2.2.9 發(fā)酵培養(yǎng)基響應面優(yōu)化實驗33
• 2.2.10 優(yōu)化后的工藝與原始工藝的發(fā)酵效價對比33
• 2.2.11 發(fā)酵過程代謝曲線測定33
• 2.2.12 分析方法33-35
• 2.2.13 分離純化條件研究35-37
• 第3章 SIPI-MT2誘變選育37-44
• 3.1 自然分離37
• 3.2 SIPI-MT2的誘變育種37-41
• 3.2.1 紫外誘變育種37-38
• 3.2.2 NTG誘變育種38
• 3.2.3 誘變后菌落形態(tài)特征38-39
• 3.2.4 高產(chǎn)菌株的篩選39-40
• 3.2.5 篩選結果驗證40-41
• 3.3 高產(chǎn)菌株的傳代穩(wěn)定性41
• 3.3.1 傳代穩(wěn)定性實驗41
• 3.4 本章小結及討論41-44
• 第4章 發(fā)酵工藝優(yōu)化44-58
• 4.1 SIPI-W15發(fā)酵工藝優(yōu)化44-51
• 4.1.1 發(fā)酵培養(yǎng)基碳源考察44-46
• 4.1.2 發(fā)酵培養(yǎng)基氮源的考察46-48
• 4.1.3 發(fā)酵培養(yǎng)基中磷酸鹽的考察48-50
• 4.1.4 發(fā)酵培養(yǎng)基中前體物質(zhì)考察50-51
• 4.1.5 發(fā)酵培養(yǎng)基中微量元素的考察51
• 4.2 SIPI-W15培養(yǎng)條件優(yōu)化51-55
• 4.2.1 種齡對發(fā)酵的影響51-52
• 4.2.2 接種量對發(fā)酵的影響52
• 4.2.3 溫度對發(fā)酵的影響52-53
• 4.2.4 初始pH對發(fā)酵的影響53
• 4.2.5 轉(zhuǎn)速對發(fā)酵的影響53-54
• 4.2.6 搖瓶裝量對發(fā)酵的影響54-55
• 4.3 本章小結與討論55-58
• 第5章 發(fā)酵培養(yǎng)基響應面優(yōu)化實驗58-70
• 5.1 Plackeet-Burman實驗設計顯著因素58-61
• 5.2 最陡爬坡實驗61
• 5.3 Box-Behnken設計實驗61-67
• 5.3.1 響應面優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基組成61-64
• 5.3.2 多因素回歸方程的建立及其方差分析64-65
• 5.3.3 響應面及等高線分析結果65-67
• 5.3.4 最佳培養(yǎng)基組成確定67
• 5.4 搖瓶代謝曲線的繪制67-68
• 5.5 優(yōu)化后發(fā)酵工藝和原始工藝的發(fā)酵效價對比68-69
• 5.6 本章小結69-70
• 第6章 棘白菌素B的提取工藝優(yōu)化70-76
• 6.1 發(fā)酵液中棘白菌素B的提取70-72
• 6.1.1 對不同提取溶劑的考察70
• 6.1.2 丙酮提取體積的考察70-71
• 6.1.3 對丙酮提取時間的考察71-72
• 6.2 發(fā)酵液中棘白菌素B的純化72-75
• 6.2.1 大孔吸附樹脂的分離72-75
• 6.3 本章小結75-76
• 全文總結76-78
• 參考文獻78-82
• 對進一步研究工作的設想和建議82-84
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文、專利申請84-86
• 致謝86

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本文編號：300363