本文關(guān)鍵詞：氯氮平代謝產(chǎn)物分析方法開發(fā)及其在大鼠和人肝微粒體中的代謝產(chǎn)物研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來,藥物代謝分析經(jīng)過快速的發(fā)展已經(jīng)成為藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究中的一個(gè)重要部分,而不斷完善的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)被廣泛的應(yīng)用于藥物代謝分析的研究中。相比于傳統(tǒng)的液相色譜技術(shù),具有高靈敏度、高通量和高準(zhǔn)確性的優(yōu)點(diǎn)。本論文旨在建立新型靈敏、高通量、高準(zhǔn)確性的藥物代謝產(chǎn)物分析方法,并用于分析氯氮平在人和大鼠肝微粒體中的代謝產(chǎn)物。同時(shí),對(duì)于催化氯氮平產(chǎn)生主要代謝產(chǎn)物的CYP酶進(jìn)行了更進(jìn)一步的研究。本論文第一章概述了藥物代謝及其分析方法的發(fā)展概況,回顧了現(xiàn)有的MRM和MIM的檢測(cè)方法,隨后討論了MRM和MIM方法在檢測(cè)藥物代謝產(chǎn)物中的應(yīng)用,以及CYP酶主導(dǎo)氯氮平代謝的研究現(xiàn)狀。同時(shí)也對(duì)本論文的主要研究工作內(nèi)容做了介紹。本論文第二章使用新建立的分析方法DE-DD(動(dòng)態(tài)排除與數(shù)據(jù)依賴聯(lián)用),分析普萘洛爾、維拉帕米及氨氯地平在大鼠肝微粒體中的代謝產(chǎn)物,并與已報(bào)道文獻(xiàn)比較,檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性；使用新方法分析氯氮平在大鼠和人肝微粒中的代謝產(chǎn)物,并推測(cè)出可能的代謝途徑,分析新發(fā)現(xiàn)的代謝產(chǎn)物。所有試驗(yàn)藥品在肝微粒中進(jìn)行孵育,在37℃條件下經(jīng)水浴振蕩,在達(dá)到孵育完成時(shí)間后使用甲醇終止反應(yīng),離心樣品取上清液,在氮?dú)庀逻M(jìn)行樣品濃縮,以水-0.1%甲酸為水相,乙腈-0.1%甲酸為有機(jī)相,流速為0.6 mL/min, Thermo Hypersil-C 18 (2.1 × 50 mm, 1.9 μm)色譜柱進(jìn)行梯度洗脫分離。采用Thermo LTQ XL型線性離子阱質(zhì)譜儀,新型電噴霧電離源(HESI),全掃描監(jiān)測(cè)(Full scan),同時(shí)進(jìn)行二級(jí)碎片和三級(jí)碎片掃描。考察DE-DD方法的所得結(jié)果,并以此結(jié)果同相關(guān)報(bào)道的文獻(xiàn)進(jìn)行比較,確定所得結(jié)果的可靠性以及準(zhǔn)確性。本方法能夠較為全面的發(fā)現(xiàn)藥物體外模擬代謝實(shí)驗(yàn)中所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物,并同時(shí)可以獲取代謝產(chǎn)物的多級(jí)碎片信息,節(jié)約樣品分析次數(shù)；能夠在針對(duì)未知化合物進(jìn)行代謝產(chǎn)物分析時(shí)快速、準(zhǔn)確和高效的獲取代謝物質(zhì)譜碎片信息,為下步的代謝物結(jié)構(gòu)鑒定提供豐富的質(zhì)譜信息。論文第三章我們使用DE-DD的分析方法分析氯氮平在人和大鼠肝微粒中孵育后的樣品,樣品孵育的實(shí)驗(yàn)操作與普萘洛爾、維拉帕米和氨氯地平的相同。根據(jù)DE-DD方法所得的結(jié)果,分析氯氮平在人和大鼠肝微粒體中的代謝差異。并由結(jié)果推測(cè)出可能的代謝途徑,比較氯氮平在不同種屬間的代謝差異。根據(jù)實(shí)驗(yàn)分析的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)氯氮平主要的代謝產(chǎn)物在大鼠和人之中是有較大的差異。其中氯氮平在大鼠肝微粒體中的主要代謝產(chǎn)物為去甲基化氯氮平。而氯氮平在人肝微粒體中的主要的代謝產(chǎn)物為氮-氧化氯氮平。同時(shí),葡萄糖醛酸化氯氮平為人肝微粒體中所獨(dú)有的代謝產(chǎn)物；去甲基氧化氯氮平和開環(huán)氧化氯氮平為大鼠肝微粒體中所獨(dú)有的代謝產(chǎn)物。論文第四章我們選取了人肝微粒體為模型,進(jìn)行體外模擬代謝實(shí)驗(yàn),旨在發(fā)現(xiàn)催化氯氮平在人肝微粒體中主要代謝產(chǎn)物的CYP酶亞型。因此進(jìn)行關(guān)于催化氯氮平代謝的CYP酶篩選實(shí)驗(yàn),選取1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A4為代表的CYP酶亞型進(jìn)行孵育實(shí)驗(yàn),這7種亞型基本占到了CYP450的92%以上,因此可以獲得較為可靠的結(jié)果。同時(shí)分別考慮含有抑制劑和不含有抑制劑的兩種情況。經(jīng)過樣品分析后,總結(jié)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),表明在單種亞型CYP酶的孵育體系中,主導(dǎo)氯氮平在人肝微粒體中代謝的主要酶為1A2。2D6和3A4也參與氯氮平的代謝,但不是催化氯氮平代謝的主要酶。其中1A2主要催化去甲基化氯氮平的產(chǎn)生,2D6參與催化去甲基氯氮平,3A4參與催化氮氧化氯氮平。論文第五章我們對(duì)所有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了匯總以及討論,得出了一下結(jié)論。本論所建立的代謝產(chǎn)物分析方法具有靈敏、高效、快速的特點(diǎn),可用于藥物體外代謝產(chǎn)物分析以及代謝物結(jié)構(gòu)判斷,為藥物開發(fā)過程中提供豐富的代謝信息。同時(shí)通過對(duì)氯氮平在體外代謝產(chǎn)物的分析研究,發(fā)現(xiàn)氯氮平在人肝微粒體中主要的代謝途徑是去甲基化和N-氧化,其中去甲基代謝為主要途徑,通過使用CYP酶的篩選發(fā)現(xiàn)去甲基化途徑是通過CYP1A2催化進(jìn)行；CYP3A4和CYP2D6不是催化氯氮平代謝的主要酶,但是CYP3A4參與催化N-氧化代謝,CYP2D6參與催化去甲基代謝。
【關(guān)鍵詞】：動(dòng)態(tài)排除與數(shù)據(jù)依賴 氯氮平 代謝產(chǎn)物鑒定
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R917
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 第一章 緒論10-21
• 1. 藥物代謝組學(xué)10
• 2. 氯氮平研究現(xiàn)在10-13
• 2.1 精神失常和抗精神失常藥物的研究10-12
• 2.2 氯氮平(Clozapine,CLZ)12
• 2.3. CYP酶主導(dǎo)氯氮平代謝12-13
• 3. 現(xiàn)有檢測(cè)方法及存在的問題13-19
• 3.1. LC-MS液質(zhì)聯(lián)用分析技術(shù)13-15
• 3.2. 現(xiàn)有的測(cè)定方法15-18
• 3.3. 關(guān)于CYP酶主導(dǎo)氯氮平代謝的研究現(xiàn)狀18-19
• 4. 本論的意義19-21
• 第二章 動(dòng)態(tài)排除-數(shù)據(jù)依賴掃描法分析普萘洛爾、維拉帕米和氨氯地平在人肝微粒體中的代謝物21-40
• 1. 引言21-22
• 2. 實(shí)驗(yàn)部分22-31
• 2.1 儀器、試劑、溶液配置及樣品制備22-24
• 2.2 動(dòng)態(tài)排除-數(shù)據(jù)依賴掃描法分析普萘洛爾、維拉帕米及氨氯地平的分析方法建立和條件優(yōu)化24-31
• 3. 結(jié)果與討論31-40
• 第三章 使用DE-DD方法研究氯氮平在大鼠和人肝微粒體中的代謝差異40-56
• 1. 引言40
• 2. 實(shí)驗(yàn)部分40-43
• 2.1 儀器、試劑、溶液配置及樣品制備40-42
• 2.2. LC-MS法研究氯氮平在大鼠和人肝微粒體中的代謝差異42-43
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-46
• 4. 氯氮平及其代謝物結(jié)構(gòu)解析46-55
• 4.1 氯氮平的質(zhì)譜結(jié)構(gòu)解析46-47
• 4.2 M1和M2(氧化氯氮平)47-49
• 4.3 M3(葡萄糖醛酸化氯氮平)49-50
• 4.4 M4(去甲基氧化氯氮平)50-51
• 4.5 M5(去甲基化氯氮平)51-52
• 4.6 M6(開環(huán)氧化氯氮平)52-53
• 4.7 M7(開環(huán)氧化氯氮平)53-54
• 4.8 M8(氮氧化氯氮平)54-55
• 5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論55-56
• 第四章 對(duì)催化氯氮平主要代謝產(chǎn)物生產(chǎn)的酶系的深入研究56-70
• 1. 引言56
• 2. 實(shí)驗(yàn)部分56-61
• 2.1 儀器、試劑、溶液配置及樣品制備56-59
• 2.2 色譜條件59-61
• 3. 數(shù)據(jù)處理61-62
• 3.1 數(shù)據(jù)處理計(jì)算公式61
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-62
• 4. 原始數(shù)據(jù)62-69
• 5. 結(jié)果與討論69-70
• 第五章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果匯總及結(jié)論70-73
• 1. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果匯總70-71
• 1.1 DE-DD方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果匯總70
• 1.2. 氯氮平在不同種屬中的代謝差異70-71
• 1.3 主導(dǎo)氯氮平代謝的CYP酶篩選71
• 2. 結(jié)論71-73
• 致謝73-74
• 參考文獻(xiàn)74-76

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張信中;李迎;;液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)藥物反應(yīng)性代謝物的研究進(jìn)展[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2009年05期

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉兆穎;戴夢(mèng)紅;陶燕飛;袁宗輝;;肝微粒體孵育法在藥物代謝中的應(yīng)用[A];第八次全國(guó)藥物與化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

  本文關(guān)鍵詞：氯氮平代謝產(chǎn)物分析方法開發(fā)及其在大鼠和人肝微粒體中的代謝產(chǎn)物研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：263020