本文關鍵詞：氯氮平代謝產物分析方法開發(fā)及其在大鼠和人肝微粒體中的代謝產物研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來,藥物代謝分析經過快速的發(fā)展已經成為藥物代謝動力學研究中的一個重要部分,而不斷完善的液質聯(lián)用技術被廣泛的應用于藥物代謝分析的研究中。相比于傳統(tǒng)的液相色譜技術,具有高靈敏度、高通量和高準確性的優(yōu)點。本論文旨在建立新型靈敏、高通量、高準確性的藥物代謝產物分析方法,并用于分析氯氮平在人和大鼠肝微粒體中的代謝產物。同時,對于催化氯氮平產生主要代謝產物的CYP酶進行了更進一步的研究。本論文第一章概述了藥物代謝及其分析方法的發(fā)展概況,回顧了現(xiàn)有的MRM和MIM的檢測方法,隨后討論了MRM和MIM方法在檢測藥物代謝產物中的應用,以及CYP酶主導氯氮平代謝的研究現(xiàn)狀。同時也對本論文的主要研究工作內容做了介紹。本論文第二章使用新建立的分析方法DE-DD(動態(tài)排除與數(shù)據(jù)依賴聯(lián)用),分析普萘洛爾、維拉帕米及氨氯地平在大鼠肝微粒體中的代謝產物,并與已報道文獻比較,檢測方法的準確性；使用新方法分析氯氮平在大鼠和人肝微粒中的代謝產物,并推測出可能的代謝途徑,分析新發(fā)現(xiàn)的代謝產物。所有試驗藥品在肝微粒中進行孵育,在37℃條件下經水浴振蕩,在達到孵育完成時間后使用甲醇終止反應,離心樣品取上清液,在氮氣下進行樣品濃縮,以水-0.1%甲酸為水相,乙腈-0.1%甲酸為有機相,流速為0.6 mL/min, Thermo Hypersil-C 18 (2.1 × 50 mm, 1.9 μm)色譜柱進行梯度洗脫分離。采用Thermo LTQ XL型線性離子阱質譜儀,新型電噴霧電離源(HESI),全掃描監(jiān)測(Full scan),同時進行二級碎片和三級碎片掃描�？疾霥E-DD方法的所得結果,并以此結果同相關報道的文獻進行比較,確定所得結果的可靠性以及準確性。本方法能夠較為全面的發(fā)現(xiàn)藥物體外模擬代謝實驗中所產生的代謝產物,并同時可以獲取代謝產物的多級碎片信息,節(jié)約樣品分析次數(shù)；能夠在針對未知化合物進行代謝產物分析時快速、準確和高效的獲取代謝物質譜碎片信息,為下步的代謝物結構鑒定提供豐富的質譜信息。論文第三章我們使用DE-DD的分析方法分析氯氮平在人和大鼠肝微粒中孵育后的樣品,樣品孵育的實驗操作與普萘洛爾、維拉帕米和氨氯地平的相同。根據(jù)DE-DD方法所得的結果,分析氯氮平在人和大鼠肝微粒體中的代謝差異。并由結果推測出可能的代謝途徑,比較氯氮平在不同種屬間的代謝差異。根據(jù)實驗分析的結果,發(fā)現(xiàn)氯氮平主要的代謝產物在大鼠和人之中是有較大的差異。其中氯氮平在大鼠肝微粒體中的主要代謝產物為去甲基化氯氮平。而氯氮平在人肝微粒體中的主要的代謝產物為氮-氧化氯氮平。同時,葡萄糖醛酸化氯氮平為人肝微粒體中所獨有的代謝產物；去甲基氧化氯氮平和開環(huán)氧化氯氮平為大鼠肝微粒體中所獨有的代謝產物。論文第四章我們選取了人肝微粒體為模型,進行體外模擬代謝實驗,旨在發(fā)現(xiàn)催化氯氮平在人肝微粒體中主要代謝產物的CYP酶亞型。因此進行關于催化氯氮平代謝的CYP酶篩選實驗,選取1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A4為代表的CYP酶亞型進行孵育實驗,這7種亞型基本占到了CYP450的92%以上,因此可以獲得較為可靠的結果。同時分別考慮含有抑制劑和不含有抑制劑的兩種情況。經過樣品分析后,總結所得實驗數(shù)據(jù),表明在單種亞型CYP酶的孵育體系中,主導氯氮平在人肝微粒體中代謝的主要酶為1A2。2D6和3A4也參與氯氮平的代謝,但不是催化氯氮平代謝的主要酶。其中1A2主要催化去甲基化氯氮平的產生,2D6參與催化去甲基氯氮平,3A4參與催化氮氧化氯氮平。論文第五章我們對所有的實驗結果進行了匯總以及討論,得出了一下結論。本論所建立的代謝產物分析方法具有靈敏、高效、快速的特點,可用于藥物體外代謝產物分析以及代謝物結構判斷,為藥物開發(fā)過程中提供豐富的代謝信息。同時通過對氯氮平在體外代謝產物的分析研究,發(fā)現(xiàn)氯氮平在人肝微粒體中主要的代謝途徑是去甲基化和N-氧化,其中去甲基代謝為主要途徑,通過使用CYP酶的篩選發(fā)現(xiàn)去甲基化途徑是通過CYP1A2催化進行；CYP3A4和CYP2D6不是催化氯氮平代謝的主要酶,但是CYP3A4參與催化N-氧化代謝,CYP2D6參與催化去甲基代謝。
【關鍵詞】：動態(tài)排除與數(shù)據(jù)依賴 氯氮平 代謝產物鑒定
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R917
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 第一章 緒論10-21
• 1. 藥物代謝組學10
• 2. 氯氮平研究現(xiàn)在10-13
• 2.1 精神失常和抗精神失常藥物的研究10-12
• 2.2 氯氮平(Clozapine,CLZ)12
• 2.3. CYP酶主導氯氮平代謝12-13
• 3. 現(xiàn)有檢測方法及存在的問題13-19
• 3.1. LC-MS液質聯(lián)用分析技術13-15
• 3.2. 現(xiàn)有的測定方法15-18
• 3.3. 關于CYP酶主導氯氮平代謝的研究現(xiàn)狀18-19
• 4. 本論的意義19-21
• 第二章 動態(tài)排除-數(shù)據(jù)依賴掃描法分析普萘洛爾、維拉帕米和氨氯地平在人肝微粒體中的代謝物21-40
• 1. 引言21-22
• 2. 實驗部分22-31
• 2.1 儀器、試劑、溶液配置及樣品制備22-24
• 2.2 動態(tài)排除-數(shù)據(jù)依賴掃描法分析普萘洛爾、維拉帕米及氨氯地平的分析方法建立和條件優(yōu)化24-31
• 3. 結果與討論31-40
• 第三章 使用DE-DD方法研究氯氮平在大鼠和人肝微粒體中的代謝差異40-56
• 1. 引言40
• 2. 實驗部分40-43
• 2.1 儀器、試劑、溶液配置及樣品制備40-42
• 2.2. LC-MS法研究氯氮平在大鼠和人肝微粒體中的代謝差異42-43
• 3. 實驗結果43-46
• 4. 氯氮平及其代謝物結構解析46-55
• 4.1 氯氮平的質譜結構解析46-47
• 4.2 M1和M2(氧化氯氮平)47-49
• 4.3 M3(葡萄糖醛酸化氯氮平)49-50
• 4.4 M4(去甲基氧化氯氮平)50-51
• 4.5 M5(去甲基化氯氮平)51-52
• 4.6 M6(開環(huán)氧化氯氮平)52-53
• 4.7 M7(開環(huán)氧化氯氮平)53-54
• 4.8 M8(氮氧化氯氮平)54-55
• 5. 實驗結果與討論55-56
• 第四章 對催化氯氮平主要代謝產物生產的酶系的深入研究56-70
• 1. 引言56
• 2. 實驗部分56-61
• 2.1 儀器、試劑、溶液配置及樣品制備56-59
• 2.2 色譜條件59-61
• 3. 數(shù)據(jù)處理61-62
• 3.1 數(shù)據(jù)處理計算公式61
• 3.2 實驗結果61-62
• 4. 原始數(shù)據(jù)62-69
• 5. 結果與討論69-70
• 第五章 實驗結果匯總及結論70-73
• 1. 實驗結果匯總70-71
• 1.1 DE-DD方法實驗結果匯總70
• 1.2. 氯氮平在不同種屬中的代謝差異70-71
• 1.3 主導氯氮平代謝的CYP酶篩選71
• 2. 結論71-73
• 致謝73-74
• 參考文獻74-76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張信中;李迎;;液相色譜質譜聯(lián)用檢測藥物反應性代謝物的研究進展[J];國際藥學研究雜志;2009年05期

2 趙愛玲,趙靖平;與氯氮平代謝有關的P450酶及其遺傳多態(tài)性[J];四川精神衛(wèi)生;2002年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉兆穎;戴夢紅;陶燕飛;袁宗輝;;肝微粒體孵育法在藥物代謝中的應用[A];第八次全國藥物與化學異物代謝學術會議論文摘要[C];2006年

  本文關鍵詞：氯氮平代謝產物分析方法開發(fā)及其在大鼠和人肝微粒體中的代謝產物研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：263020