本文關(guān)鍵詞：抗腫瘤活性物質(zhì)的篩選及其抗腫瘤機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：建立一個(gè)抗腫瘤物質(zhì)篩選的方法,對(duì)來自于中藥的提取樣品進(jìn)行篩選,以期獲得具有抗腫瘤活性的化合物；并進(jìn)一步研究具有抗腫瘤活性的化合物的抑瘤作用機(jī)制,為開發(fā)新的抗腫瘤藥物奠定基礎(chǔ)。方法：MTT比色法檢測(cè)不同濃度(100μg/mL、50μg/mL、2μg/mL、0.4μg/mL 0.08μg/mL、0.16μg/mL)順鉑作用24h對(duì)人肝癌細(xì)胞SNU-387、人骨肉瘤細(xì)胞MG-63的影響,計(jì)算出不同濃度對(duì)應(yīng)的抑制率,求出半數(shù)抑制濃度IC50；以順鉑為參照,選取高濃度501μg/mL作為篩選的初步濃度,分別對(duì)蒼術(shù)苷、白頭翁皂苷(BTW)系列化合物、紫草(ZC)系列化合物、麥冬(MD)系列化合物和靈芝三萜(LZ)系列化合物2種細(xì)胞進(jìn)行篩選。通過順鉑進(jìn)行對(duì)比,選出抑制作用較為明顯的藥物進(jìn)行進(jìn)一步篩選,分別計(jì)算出半數(shù)抑制濃度IC50；最終選擇了4種藥物(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)采用Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè),藥物分別濃度為50μg/mL、10μg/mL、2μg/mL,作用時(shí)間24h；通過Elisa法檢測(cè)4種藥物不同濃度(50μg/mL、0μg/mL、2μg/mL)對(duì)bax與bcl-2蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：順鉑能有效抑制人肝癌細(xì)胞SNU-387、人骨肉瘤細(xì)胞MG-63的生長(zhǎng),24h半數(shù)抑制濃度IC50分別為6.391μg/mL、16.592μg/mL,濃度達(dá)到50μg/mL抑制率均在90%附近；除靈芝三萜(LZ)系列化合物、蒼術(shù)苷外,其他3類樣品(白頭翁皂苷(BTW)系列化合物、紫草(ZC)系列化合物、麥冬(MD)系列化合物)中均發(fā)現(xiàn)有高活性的物質(zhì)。其中ZC-17、MD-4、BTW10μBTW11對(duì)于人肝癌細(xì)胞SNU-387半數(shù)抑制濃度IC50分別為10.86μg/mL、3.097μg/mL、1.633μg/mL,3.104μg/mL,ZC-17、MD-4對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63半數(shù)抑制濃度IC50分別為5.465μg/mL、2.639μg/mL;通過流式結(jié)果,對(duì)比陽性組(順鉑)和陰性組(DMSO)發(fā)現(xiàn)4種物質(zhì)(ZC-17?MD-4/BTW10/BTW11)均可以促進(jìn)人肝癌細(xì)胞SNU-387凋亡,凋亡率與藥物濃度相關(guān),BTW11高濃度組誘導(dǎo)凋亡明顯。2種物質(zhì)(ZC-17、MD-4)均可促進(jìn)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63凋亡MD-4在高劑量下壞死偏多；與對(duì)照組相比,發(fā)現(xiàn)陽性組和3種藥物(ZC-17、BTW10、 BTW11)可上調(diào)人肝癌細(xì)胞SNU-387中bax的蛋白表達(dá)量,下調(diào)bcl-2的蛋白表達(dá)量。同時(shí)ZC.17可上調(diào)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63中bax的蛋白表達(dá)量,下調(diào)bcl-2的蛋白表達(dá)量。結(jié)論：4種物質(zhì)(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)均能明顯抑制腫瘤生長(zhǎng),且與濃度成一定關(guān)系；4種物質(zhì)(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)均能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SNU-387凋亡,2種物質(zhì)(ZC-17、MD-4)均能誘導(dǎo)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63凋亡；通過對(duì)細(xì)胞凋亡蛋白bax與bcl-2的檢測(cè),證明ZC-17、BTW10、BTW11誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可能是通過上調(diào)Bax、下調(diào)Bcl-2,MD-4誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可能是其他途徑。
【關(guān)鍵詞】：抗腫瘤篩選 細(xì)胞凋亡 Bcl-2 Bax
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要7-9
• 英文摘要9-15
• 第一章 緒論15-30
• 1.1 腫瘤的概述15
• 1.2 人肝癌和人骨肉瘤簡(jiǎn)介15-16
• 1.2.1 肝癌的現(xiàn)狀15-16
• 1.2.2 骨肉瘤簡(jiǎn)介16
• 1.3 植物來源抗腫瘤藥物的研究介紹16-22
• 1.3.1 紫杉醇研究簡(jiǎn)述17-18
• 1.3.2 喜樹堿研究簡(jiǎn)述18
• 1.3.3 長(zhǎng)春堿研究簡(jiǎn)述18-19
• 1.3.4 其他相關(guān)抗腫瘤藥19-22
• 1.3.4.1 白頭翁提取物19-20
• 1.3.4.2 麥冬提取物20
• 1.3.4.3 紫草提取物20-21
• 1.3.4.4 靈芝提取物21
• 1.3.4.5 蒼術(shù)苷21-22
• 1.4 藥物篩選介紹22-23
• 1.5 細(xì)胞凋亡機(jī)制23-28
• 1.5.1 細(xì)胞的凋亡與壞死23
• 1.5.2 凋亡的相關(guān)蛋白23-25
• 1.5.2.1 caspase與細(xì)胞凋亡23-24
• 1.5.2.2 Bcl-2家族與細(xì)胞凋亡24-25
• 1.5.2.3 細(xì)胞色素C與細(xì)胞凋亡25
• 1.5.3 細(xì)胞凋亡通路25-28
• 1.5.3.1 細(xì)胞凋亡外源性通路25-26
• 1.5.3.2 細(xì)胞凋亡內(nèi)源性通路26-28
• 1.6 課題研究背景28-30
• 1.6.1 研究意義28-29
• 1.6.2 研究的技術(shù)路線29-30
• 第二章 抗腫瘤藥物模型的建立30-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器30-31
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞來源30
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑30-31
• 2.2 實(shí)驗(yàn)所用相關(guān)方法31
• 2.3 相關(guān)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備31-32
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)液的配制31-32
• 2.3.2 PBS緩沖液的配制32
• 2.3.3 MTT的配制32
• 2.3.4 相關(guān)樣品溶液的處理32
• 2.4 對(duì)SNU-387和MG-63生長(zhǎng)曲線進(jìn)行測(cè)定32-35
• 2.4.1 細(xì)胞復(fù)蘇33
• 2.4.2 細(xì)胞傳代33
• 2.4.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)33-34
• 2.4.4 MTT法測(cè)定SNU-387、MG-63細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線34-35
• 2.4.4.1 實(shí)驗(yàn)步驟34
• 2.4.4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析34-35
• 2.5 觀察不同濃度順鉑對(duì)SNU-387和MG-63生長(zhǎng)抑制作用35-42
• 2.5.1 實(shí)驗(yàn)方法35
• 2.5.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35
• 2.5.3 結(jié)果與討論35-42
• 2.5.3.1 用MTT法測(cè)定順鉑對(duì)SNU-387、MG-63的影響35-41
• 2.5.3.2 小結(jié)與討論41-42
• 第三章 樣品篩選42-71
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料42
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)藥物及細(xì)胞42
• 3.1.2 主要試劑42
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法42-43
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)步驟42-43
• 3.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43
• 3.3 初步篩選43-65
• 3.3.1 蒼術(shù)苷篩選43-44
• 3.3.2 BTW系列化合物初篩44-47
• 3.3.3 ZC系列化合物初篩47-52
• 3.3.3.1 ZC系列化合物初篩-SNU-38747-50
• 3.3.3.2 ZC系列化合物初篩-MG-6350-52
• 3.3.4 MD系列化合物初篩52-60
• 3.3.4.1 MD系列化合物初篩-SNU-38752-56
• 3.3.4.2 MD系列化合物初篩-MG-6356-60
• 3.3.5 LZ三萜系列化合物初篩60-64
• 3.3.5.1 LZ三萜系列化合物初篩-SNU-38760-62
• 3.3.5.2 LZ三萜系列化合物初篩-MG-6362-64
• 3.3.6 小結(jié)64-65
• 3.4 第二次篩選65-69
• 3.4.1 BTW系列化合物篩選65-66
• 3.4.2 ZC系列化合物篩選66-67
• 3.4.3 MD系列化合物篩選67-68
• 3.4.4 小結(jié)68-69
• 3.5 討論69-71
• 第四章 流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)71-82
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器71-74
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞來源71
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)樣品71-73
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑73-74
• 4.2 實(shí)驗(yàn)所用相關(guān)方法74
• 4.3 實(shí)驗(yàn)步驟74-75
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果75-80
• 4.4.1 BTW系列化合物凋亡檢測(cè)75-77
• 4.4.2 ZC-17誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡檢測(cè)77-78
• 4.4.2.1 ZC-17對(duì)SNU-387的凋亡影響77
• 4.4.2.2 ZC-17對(duì)MG-63的凋亡影響77-78
• 4.4.3 MD-4誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡檢測(cè)78-80
• 4.4.3.1 MD-4對(duì)SNU-387的凋亡影響78-79
• 4.4.3.2 MD-4對(duì)MG-63的凋亡影響79-80
• 4.5 小結(jié)和討論80-82
• 第五章 Elisa法檢測(cè)四種樣品中Bax與Bcl-2表達(dá)量82-93
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器82-83
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞來源82
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑82-83
• 5.2 實(shí)驗(yàn)步驟83-84
• 5.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析84
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果84-92
• 5.4.1 BTW10、BTW11作用對(duì)Bcl-2、Bax的影響84-86
• 5.4.2 ZC-17作用2種細(xì)胞對(duì)Bcl-2、Bax的影響86-89
• 5.4.3 MD-4作用2種細(xì)胞對(duì)Bcl-2、Bax的影響89-92
• 5.5 小結(jié)92-93
• 結(jié)論93-94
• 致謝94-95
• 參考文獻(xiàn)95-100
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及科研成果100-101
• 附錄101-105

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本文編號(hào)：263012