本文關(guān)鍵詞：新型抗耐藥革蘭氏陰性菌藥物的篩選研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》 2015年

新型抗耐藥革蘭氏陰性菌藥物的篩選研究

王穎  

【摘要】：近十年來(lái),G-桿菌耐藥問(wèn)題日益嚴(yán)重,突出表現(xiàn)在耐碳青霉烯類抗生素的腸桿菌科細(xì)菌和非發(fā)酵糖細(xì)菌,其中肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌耐藥最為嚴(yán)重,臨床治療困難。針對(duì)耐藥機(jī)制的抗菌藥物增效劑的研發(fā)是克服G-菌耐藥問(wèn)題的重要途徑。本研究針對(duì)“超級(jí)細(xì)菌”表達(dá)的新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶1 (New Delhi metallo-β-lactamase, NDM-1)和銅綠假單胞菌最主要外排泵MexAB-OprM,構(gòu)建篩選模型尋找其抑制劑,以期獲得具有臨床前景的抗G-桿菌藥物增效劑。本論文的第一部分,在克隆表達(dá)肺炎克雷伯菌ATCC BAA-2146 NDM-1蛋白的基礎(chǔ)上,采用Ni2+親和層析的方法,純化得到了具有天然酶活性的NDM-1蛋白,建立并優(yōu)化了酶活測(cè)定體系,基于酶活測(cè)定體系分別構(gòu)建了以美羅培南和頭孢硝噻吩為底物的NDM-1酶抑制劑藥物篩選模型,并評(píng)價(jià)了優(yōu)化后模型的可行性；利用此模型對(duì)化合物庫(kù)中76,800個(gè)化合物進(jìn)行了篩選,得到了16個(gè)NDM-1抑制劑,從中篩選到4個(gè)具有可逆轉(zhuǎn)NDM-1表達(dá)菌株耐藥性的陽(yáng)性化合物,其中化合物IMB-XW2在4 μg/ml時(shí)可以使表達(dá)NDM-1的大腸桿菌對(duì)美羅培南和氨芐西林的敏感度提高8倍；該化合物對(duì)所測(cè)試的革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌均沒有抑制活性；酶動(dòng)力學(xué)研究表明該化合物為NDM-1酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,其Ki值為0.221μM,IC50為0.69μM；采用熒光淬滅法分析其作用模式屬于靜態(tài)猝滅,可能與NDM-1的氨基或羥基形成氫鍵；細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果表明IMB-XW2對(duì)HepG2和Vero具有一定的毒性,其TCso分別為5.078和6.430 gg/ml�，F(xiàn)有的研究結(jié)果以及通過(guò)Discovery Studio2.5對(duì)IMB-XW2的ADMET和毒理學(xué)性質(zhì)的預(yù)測(cè)結(jié)果提示我們,IMB-XW2具有一定的成藥性,通過(guò)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化,有可能獲得新型的抗耐藥陰性菌的藥物或藥物先導(dǎo)物。本論文的第二部分,利用前期建立的MexAB-OprM外排泵抑制劑的高通量篩選模型對(duì)化合物庫(kù)中76,800個(gè)化合物進(jìn)行初篩,得到147個(gè)活性化合物,初篩陽(yáng)性率為0.94%；對(duì)初篩陽(yáng)性樣品復(fù)篩得到了4個(gè)可回復(fù)四環(huán)素對(duì)MexAB-OprM特異性表達(dá)的銅綠假單胞菌的抑制作用的陽(yáng)性化合物；聯(lián)合多種抗生素評(píng)價(jià)其對(duì)外排泵的抑制活性,發(fā)現(xiàn)IMB-P4在10 gg/ml下可以使銅綠假單胞菌MexAB-OprM特異性表達(dá)菌株對(duì)多種抗生素的敏感性提高4～16倍；抗菌譜測(cè)定結(jié)果表明,IMB-P4對(duì)所測(cè)試的革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌均無(wú)抑制活性；細(xì)胞毒性研究表明,IMB-P4對(duì)HepG2和Vero的TCso分別為4.551和46.620 μg/ml。該研究結(jié)果為獲得作用于銅綠假單胞菌外排泵的新型抗耐藥銅綠假單胞菌藥物奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R915
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 高山;普珍;孫曉明;劉小康;;肺炎克雷伯桿菌對(duì)氟喹諾酮類抗生素耐藥機(jī)制的研究[J];華西藥學(xué)雜志;2006年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周蓉;朱衛(wèi)民;;肺炎克雷伯菌分子流行病學(xué)及耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè));2012年01期

2 潘佳;魏臣録;翁玲玲;;新型氟喹諾酮化合物的設(shè)計(jì)及合成[J];華西藥學(xué)雜志;2009年03期

3 方可華;于鋒英;;細(xì)菌對(duì)氟喹諾酮類藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J];上海醫(yī)藥;2011年05期

4 張麗妍;張秀林;陳琳;;我院肺炎克雷伯桿菌耐藥性的調(diào)查與分析[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2010年10期

5 陳妍;羅予;毛理納;;氟喹諾酮類藥物體外誘導(dǎo)肺炎克雷伯菌耐藥后GyrA和ParC的變異[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2009年02期

6 杜蘇萌;周永安;張潤(rùn)梅;康建邦;徐輝;武素梅;楊素萍;;社區(qū)肺炎克雷伯菌耐藥性分析及耐藥基因的研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2009年12期

7 金文揚(yáng);孫偉;孫翔;;急診重癥監(jiān)護(hù)病房患者院內(nèi)感染及耐藥分析[J];浙江醫(yī)學(xué);2008年06期

8 鄧曉慧;鄭風(fēng)勁;何文富;孫愛慧;劉小康;;兩種氟喹諾酮類藥物對(duì)肺炎克雷伯菌防耐藥突變濃度及耐藥突變體耐藥性的研究[J];中國(guó)抗生素雜志;2008年06期

9 邱星安;;肺炎克雷伯菌的耐藥趨勢(shì)及耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2011年05期

10 林華勝;張薇;李國(guó)明;;肺炎克雷伯菌耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2014年12期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 陳妍;小鼠腸道菌群及肺炎克雷伯菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥性研究[D];鄭州大學(xué);2008年

2 杜蘇萌;肺炎克雷伯菌和大腸桿菌耐藥性及耐藥基因研究[D];山西大學(xué);2010年

3 徐燕;多藥耐藥肺炎克雷伯菌臨床分離株的耐藥性及耐藥基因研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2012年

4 李倩;四種常見耐藥致病菌所致的老年人肺炎中醫(yī)證候?qū)W規(guī)律研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

5 周蓉;肺炎克雷伯菌感染的耐藥性監(jiān)測(cè)及其產(chǎn)金屬酶基因型研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 夏昆華,周魯,郝麗芬;喹諾酮類抗生素的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè));2004年03期

2 馬越;李景云;姚蕾;張力;胡昌勤;金少鴻;;1999-2003年廣東和遼寧地區(qū)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌臨床分離株耐藥性比較分析[J];臨床藥物治療雜志;2005年02期

3 王重振,錢利生;細(xì)菌對(duì)喹諾酮類抗菌藥的分子耐藥機(jī)制[J];中國(guó)生物工程雜志;2003年12期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林曉 ,陳美云 ,林其昌 ,陳公平;222株銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2002年10期

2 王炳華;王炳云;;106株銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果分析[J];基層醫(yī)學(xué)論壇;2004年06期

3 黃志強(qiáng);李麗君;盧娟;;肺結(jié)核病合并感染銅綠假單胞菌的藥敏分析[J];臨床肺科雜志;2010年09期

4 封尊玉;;銅綠假單胞菌的治療策略[J];海南醫(yī)學(xué);2010年21期

5 劉萍;張志倫;倪丹妮;吳杰紅;;銅綠假單胞菌產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶因素分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2011年23期

6 吳麗娟,熊爾陽(yáng),鄧光貴;聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)銅綠假單胞菌的研究現(xiàn)狀[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);1996年06期

7 周鐵麗,曹建明;一種鑒定銅綠假單胞菌的新方法[J];陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);1997年04期

8 朱小平;78株銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果的初步探討[J];江蘇臨床醫(yī)學(xué)雜志;1999年05期

9 孫東華,邊瑞巖,孫躍軍,王慶敏;銅綠假單胞菌污染礦泉水調(diào)查分析[J];環(huán)境與健康雜志;2000年04期

10 張文英;86株銅綠假單胞菌的耐藥調(diào)查[J];華夏醫(yī)學(xué);2000年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 方莉;許媛;黃義山;蔡燕;唐中;楊明輝;廖濤;;銅綠假單胞菌金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的檢測(cè)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 周明明;周鐵麗;李超;吳慶;陳櫟江;吳蓮鳳;彭定輝;;主動(dòng)外排在銅綠假單胞菌耐藥中的作用研究[A];2009年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 陳邦;王琰;茍曉峰;陳林;;嘧霉胺對(duì)銅綠假單胞菌基因的調(diào)節(jié)[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

4 朱丹;李欣;;對(duì)亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌的體外藥敏分析[A];2005年浙江省呼吸系病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

5 洪波;貢聯(lián)兵;;銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南的藥敏分析[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 徐海茹;田彬;岳娜;胡志東;;臨床分離的銅綠假單胞菌耐藥結(jié)果分析[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 趙書平;姜梅杰;;神經(jīng)內(nèi)科重癥監(jiān)護(hù)室銅綠假單胞菌氨基糖苷類修飾酶基因研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

8 張杜超;方向群;;微重力對(duì)銅綠假單胞菌毒力影響及與肺部感染關(guān)系[A];2011年空間生命與生命起源暨航天醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

9 李春梅;鐘曉祝;;銅綠假單胞菌醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)分析[A];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)消毒分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

10 熊娟;梁麗紅;;尿液中分離出產(chǎn)紅膿素的銅綠假單胞菌[A];2012全國(guó)臨床微生物與感染免疫學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 俞云松;[N];健康報(bào);2008年

2 李曙平;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

3 王振嶺;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

4 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院檢驗(yàn)科 胡志東;[N];健康報(bào);2009年

5 ;[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張瑞琴;氟喹諾酮類藥物誘導(dǎo)銅綠假單胞菌耐藥性及分子機(jī)制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張若文;燒傷病房耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌耐藥機(jī)制及分子流行病學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2012年

3 張亞妮;谷胱甘肽與銅綠假單胞菌致病性及抗生素抗性的關(guān)系研究[D];西北大學(xué);2009年

4 陳林;銅綠假單胞菌內(nèi)在耐藥性相關(guān)基因的篩選及研究[D];西北大學(xué);2010年

5 李學(xué)如;銅綠假單胞菌耐喹諾酮類藥物的分子機(jī)制研究[D];四川大學(xué);2003年

6 徐洋洋;銅綠假單胞菌致病性受信號(hào)分子調(diào)控及其機(jī)理研究[D];西北大學(xué);2013年

7 徐令清;銅綠假單胞菌對(duì)微生物的抑制作用及機(jī)理探討[D];華中科技大學(xué);2014年

8 魏殿軍;臨床分離菌株耐藥性分析及銅綠假單胞菌耐藥機(jī)制的探討[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

9 郭俏;銅綠假單胞菌致病因子抑制劑及喹諾酮信號(hào)分子介導(dǎo)的調(diào)節(jié)途徑研究[D];西北大學(xué);2013年

10 孫小敏;氨溴索對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜密度感應(yīng)系統(tǒng)的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 吳蘇敏;光動(dòng)力療法抗多重耐藥銅綠假單胞菌感染的研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

2 賈子中;黃連素對(duì)燒傷創(chuàng)面銅綠假單胞菌生物膜干預(yù)試驗(yàn)及自制中藥臨床應(yīng)用觀察[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 王穎;新型抗耐藥革蘭氏陰性菌藥物的篩選研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 馬超;無(wú)機(jī)鎵化合物抗菌性能研究[D];西南交通大學(xué);2015年

5 李九龍;PA0861在銅綠假單胞菌PAO1中作用的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

6 梁紅梅;銅綠假單胞菌ATCC27853對(duì)秀麗隱桿線蟲的毒性研究[D];蘭州大學(xué);2015年

7 胡凡;銅綠假單胞菌的耐藥表型與耐藥基因型研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 王貴年;銅綠假單胞菌產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶的臨床調(diào)查研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

9 劉蓉;臨床分離的銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南耐藥的分子機(jī)理的研究[D];四川大學(xué);2006年

10 章喻軍;銅綠假單胞菌外膜耐藥和保護(hù)原功能蛋白組學(xué)的研究[D];廈門大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：新型抗耐藥革蘭氏陰性菌藥物的篩選研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：150363