本文關鍵詞：Spred-2基因的缺失與四氯化碳誘導的慢性肝損傷和纖維化關系的研究

  更多相關文章： 細胞外基質絲裂原活化蛋白激酶Sprouty相關EVH1域含蛋白質肝星狀細胞

【摘要】：背景：肝臟纖維化可以由多種因素導致,在臨床上多見由病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性疾病。肝臟纖維化是肝內結締組織異常增生,導致肝內彌漫性細胞外基質過度沉淀的病理過程。目前認為肝星狀細胞是細胞外基質的主要來源。在正常的肝臟中肝星狀細胞位于腔隙中以及主要儲存維他命A.伴隨著慢性損傷,肝星狀細胞被激轉化成類成纖維細胞具有促進炎癥發(fā)生和纖維發(fā)生的功能.已激活的肝星狀細胞向組織修復處遷移和增殖,分泌大量細胞外基質以及調節(jié)胞外基質的裂解。主要由Kupffer細胞產生的血小板衍生因子是肝星狀細胞的主要刺激因子。MAPK信號通路涉及慢性肝損傷和肝臟纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)有一個關鍵的作用是將細胞外信號轉導到細胞核,因此導致了許多細胞的反應,包括增殖,分化,和特定的代謝調節(jié)途徑。Spred-2基因可以阻礙Ras蛋白依賴的胞外信號調節(jié)激酶的信號通路,但是其具體調控機制到目前為止仍舊未能探究清楚。目的：檢測四氯化碳和橄欖油處理的野生型小鼠和Spred-2基因敲除小鼠的肝臟中,多種細胞因子和趨化因子如TGF-b、IFN-g、CXCL2、CXCL9、CXCL10、以及纖維化的標志物a-SMA、Collagen-1的mRNA水平的表達。再采用免疫印跡的方法測定蛋白質水平下的a-SMA表達,以及使用Sircol測定蛋白質水平下的Collagen-1的表達。為了探索Spred-2基因在Ras/ERK信號通路下由四氯化碳誘導的慢性肝損傷和纖維化中的調控作用。方法：在這個慢性肝損傷模型中使用同窩出生的Spred-2基因敲出鼠和野生型鼠。Spred-2基因敲除小鼠和野生型小鼠接受四氯化碳腹腔注射2ml/kg,每周三次處理(四氯化碳：橄欖油,1：4,[V：V])以及按體重注射總共持續(xù)6周。對照組的Spred-2基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠根據(jù)體重接受橄欖油處理。在最后一次注射48小時后,處死小鼠,收集血液和小鼠肝臟。將小鼠肝臟分為三部分,其中一部分包埋于石蠟中作染色用,一部分迅速冷凍于液氮中作免疫印跡用,第三部分置于RNA later試劑中作實時聚合酶鏈反應用,使用組織學、a-SMA的免疫組織化學法、實時聚合酶鏈反應等方法來展示肝臟病理的發(fā)生發(fā)展過程。結果：肝臟長期暴露于四氯化碳中,肝臟損傷后炎癥細胞的大量募集導致炎癥反應,表現(xiàn)為肝臟細胞的損傷、壞死、以及肝臟結構的破壞。與野生型小鼠相比,在四氯化碳的誘導下Spred-2基因敲除鼠顯示出明顯更嚴重的肝損傷和纖維化。結論：(1)在四氯化碳誘導的慢性肝纖維化模型中,含有Spred-2基因的小鼠肝損傷和炎癥都顯著較輕,提示Spred-2基因在慢性肝臟損傷和炎癥中可能對肝細胞具有保護作用。(2)在四氯化碳誘導的慢性肝纖維化模型中,含有Spred-2基因的小鼠肝臟纖維化明顯較輕,提示Spred-2基因在肝臟纖維化中可能延緩肝臟纖維化的發(fā)展,可能成為四氯化碳誘導的慢性肝臟纖維化新的治療靶點。
【關鍵詞】：細胞外基質絲裂原活化蛋白激酶Sprouty相關EVH1域含蛋白質肝星狀細胞
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：D919
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-19
• 小鼠12
• 四氯化碳誘導慢性肝損傷和纖維化的發(fā)生12
• 細胞因子的測定12-13
• 膠原蛋白的檢測反應13-14
• 實時定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)和反轉錄14-16
• 免疫印跡分析16-17
• 肝損傷和肝纖維化的定量評估17-18
• 馬松染色步驟18
• Statistics統(tǒng)計分析18-19
• 結果19-20
• (一) Spred-2基因的缺乏加重了小鼠肝臟損傷和炎癥19
• (二) Spred-2基因的缺乏加劇了肝臟纖維化19-20
• 討論20-30
• 結論30-31
• 參考文獻31-36
• 綜述36-50
• 概述36
• 介紹36-37
• 肝星狀細胞的活化37
• 絲裂原活化的蛋白激酶與細胞增殖37-38
• 粘著斑激酶活化造血干細胞的增殖38
• 磷脂酰肌醇3激酶,Akt的,和p70S6激酶和細胞增殖38-40
• P13K信號和膠原基因的表達40
• 轉化生長因子-B(TGF—b)介導的在肝星狀細胞的膠原表達40-41
• 在體內PI3K作用的評價41
• 總結41-43
• 參考文獻43-50
• 致謝50

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1 陳誠;Spred-2基因的缺失與四氯化碳誘導的慢性肝損傷和纖維化關系的研究[D];大連醫(yī)科大學;2015年

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本文編號：762747