蛋白質(zhì)組學(xué)研究已從靜態(tài)的定性分析逐步過(guò)渡到動(dòng)態(tài)變化的定量研究。為了實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)組學(xué)的定量分析，各種定量方法相繼被開發(fā)，例如基于雙向凝膠電泳的定量技術(shù)，基于非標(biāo)記的定量技術(shù)，基于質(zhì)量標(biāo)簽的定量技術(shù)，基于液質(zhì)聯(lián)用的穩(wěn)定同位素標(biāo)記定量技術(shù)等多類定量策略。由于基于液質(zhì)聯(lián)用的穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)在定量的準(zhǔn)確度，適用范圍等方面都超過(guò)了前三類定量方法，因而被廣泛采用，其商業(yè)化的試劑不斷被推出。但是由于商業(yè)化的標(biāo)記方法普遍存在試劑昂貴(iTRAQ)，標(biāo)記位點(diǎn)少(ICAT)，只能用指定的質(zhì)譜儀進(jìn)行數(shù)據(jù)采集(依賴性強(qiáng))，分析軟件只能用于商業(yè)公司自身的質(zhì)譜儀(通用性差)等缺陷，其應(yīng)用范圍受到限制。 本研究目的是開發(fā)一整套具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記和液質(zhì)聯(lián)用的蛋白質(zhì)組學(xué)定量新策略，實(shí)現(xiàn)高通量，高準(zhǔn)確性，高靈敏度的蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析，用來(lái)克服商業(yè)化試劑存在的不足，擺脫對(duì)于商業(yè)化標(biāo)記試劑的依賴性。 本研究首先建立和優(yōu)化了一種針對(duì)肽段還原性氨基的乙�；�(wěn)定同位素標(biāo)記方法。該方法經(jīng)條件優(yōu)化后具有以下優(yōu)點(diǎn)：乙�；�(wěn)定同位素試劑用量少，副反應(yīng)少，能標(biāo)記樣品中全部蛋白質(zhì)或肽段，標(biāo)記后的蛋白質(zhì)或肽段的質(zhì)量差可以預(yù)測(cè)，標(biāo)...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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縮略語(yǔ)索引
第一章 前言
    1.蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的定量分析方法
        1.1 基于二維凝膠電泳(2-DE)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)
        1.2 基于蛋白質(zhì)芯片技術(shù)的蛋白質(zhì)組定量分析方法
        1.3 基于非標(biāo)記策略的蛋白質(zhì)組定量方法
        1.4 基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記的蛋白質(zhì)組定量分析方法
        1.5 非穩(wěn)定同位素標(biāo)記的質(zhì)量豐度標(biāo)簽技術(shù)
        1.6 定量蛋白質(zhì)組分析軟件
        1.7 展望
    2.本文研究工作
    參考文獻(xiàn)
第二章 乙�；�(wěn)定同位素標(biāo)記方法的建立與優(yōu)化
    1.材料與方法
        1.1 儀器與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.結(jié)果與討論
        2.1 乙�；瘶�(biāo)記的基本原理
        2.2 乙�；瘶�(biāo)記反應(yīng)條件優(yōu)化
            2.2.1 不同緩沖體系對(duì)乙酰化反應(yīng)效率的影響
            2.2.2 乙�；噭┯昧繉�(duì)乙酰化效率的影響
            2.2.3 pH值對(duì)乙�；实挠绊�
            2.2.4 溫度對(duì)乙酰化效率的影響
            2.2.5 反應(yīng)時(shí)間對(duì)乙�；实挠绊�
            2.2.6 乙酰化位點(diǎn)的確定
            2.2.7 乙�；瘶�(biāo)記反應(yīng)中形成的酯鍵及其去除效果的考察
            2.2.8 乙酰化穩(wěn)定同位素標(biāo)記馬心肌紅蛋白酶切肽段的動(dòng)態(tài)范圍考察
            2.2.9 乙�；瘶�(biāo)記對(duì)肽段在MALDI源質(zhì)譜離子化效率的影響
            2.2.10 乙�；瘶�(biāo)記在反相色譜中的色譜行為
            2.2.11 基于乙�；瘶�(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略
    3 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 胍基化修飾的乙酰化穩(wěn)定同位素標(biāo)記方法的建立與優(yōu)化
    1.材料與方法
        1.1 儀器與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.結(jié)果與討論
        2.1 基于胍基化修飾的乙酰標(biāo)記原理
        2.2 基于胍基化修飾的乙�；瘶�(biāo)記效率的考察
        2.3 胍基化修飾的乙酰化穩(wěn)定同位素標(biāo)記方法在ESI源質(zhì)譜中的線性范圍考察
        2.4 基于胍基化修飾的乙�；�(wěn)定同位素標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略
    3 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)的高通量蛋白質(zhì)N末端肽組學(xué)研究
    1 材料與方法
        1.1 儀器與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與討論
        2.1 N末端特異性識(shí)別原理
        2.2 模式蛋白質(zhì)的選擇
        2.3 蛋白質(zhì)的胍基化修飾
        2.4 N—末端肽段的特異性識(shí)別
        2.5 規(guī)模化識(shí)別大腸桿菌蛋白質(zhì)N末端
    3 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第五章 乙�；�(wěn)定同位素標(biāo)記方法在四氯化碳致大鼠肝損傷組織CYP450蛋白質(zhì)組定量研究中的應(yīng)用
    1.材料與方法
        1.1 儀器與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.結(jié)果與討論
        2.1 血生化和病理學(xué)
        2.2 膠內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.3 微粒體蛋白質(zhì)SDS-PAGE分離
        2.4 CYP450蛋白質(zhì)組定量分析策略
        2.5 CYP450蛋白定量分析結(jié)果
    3.小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第六章 胍基化修飾的乙酰化穩(wěn)定同位素標(biāo)記與自動(dòng)化分析軟件MSAQ的研發(fā)及其在人血漿定量蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用
    1 材料與方法
        1.1 儀器與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與討論
        2.1 FT質(zhì)譜儀質(zhì)量準(zhǔn)確度的評(píng)估及校正
        2.2 胍基化的修飾乙�；瘶�(biāo)記方法用于血漿蛋白質(zhì)定量研究
        2.3 傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀(FTICR-MS)高質(zhì)量的數(shù)據(jù)采集
        2.4 同位素效應(yīng)
        2.5 不同定量方法之間的比較
        2.6 肽段定量比值和肽段對(duì)定量比值的比較
        2.7 不同階段肝炎病人血漿定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析
    3.小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
總結(jié)
在讀期間研究成果
致謝
附:文獻(xiàn)綜述



本文編號(hào)：3809793